免疫診斷與防治課件

第二十二章

免疫學檢測技術(shù)主要內(nèi)容抗原或抗體的檢測免疫細胞的檢測高度特異性:表位---CDR表面化學集團之間的可逆結(jié)合Ag-Ab通過非共價結(jié)合，影響易受溫度、酸堿度等影響而解離解離度取決于：親和力環(huán)境因素適宜的AgAb濃度和比例

抗原抗體比例合適肉眼可見IC(凝集物，沉淀物）AgAb反應(yīng)的兩個階段AgAb特異性結(jié)合：非共價結(jié)合可見反應(yīng)階段：正負電荷吸引形成較大復合物

第一節(jié)體外抗原抗體反應(yīng)特點1、抗原抗體反應(yīng)的可見性：比例適當抗體過剩比例適當抗原過?？乖贵w的比例與其形成免疫復合物大小的關(guān)系二、抗原-抗體反應(yīng)影響因素1電解質(zhì)：中性或弱堿性條件，Ag/Ab帶負電0.85%的氯化鈉作為稀釋液2溫度：37℃3.酸堿度：pH6~8。二、檢測抗原抗體的體外試驗?zāi)磻?yīng)（agglutinationreaction)沉淀反應(yīng)(precipitationreaction)免疫標記技術(shù)（immunolabellingtechnique）

原理：抗原抗體在體外相遇，發(fā)生特異性結(jié)合，用已知Ag，可以判斷另外一種。（一）凝集反應(yīng)(agglutination)

顆粒性Ag與相應(yīng)Ab在電解質(zhì)存在的條件下結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集物。

直接凝集反應(yīng)間接(被動)凝集反應(yīng)1.直接凝集反應(yīng)①玻片法： 定性，已知抗體測未知抗原細菌的鑒定和分型人類ABO血型測定

1.直接凝集反應(yīng)②試管法： 半定量，用已知抗原測未知抗體的量

肥達氏試驗-----診斷傷寒和付傷寒間接凝集反應(yīng)：可溶性Ag/Ab先吸附在某些顆粒載體上，形成為致敏顆粒，再與相應(yīng)Ab/Ab結(jié)合，出現(xiàn)凝集現(xiàn)象.常用的載體顆粒乳膠顆粒人O型RBC、綿羊RBC2.間接凝集反應(yīng)可溶性抗原 載體顆粒免疫微球（致敏載體）＋＋抗體凝集(二)沉淀反應(yīng)概念：可溶性Ag與相應(yīng)Ab在電解質(zhì)存在條件下結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見的沉淀物。

可溶性抗原：血清蛋白、外毒素、組織浸出液、細菌濾液等

類型：

1）單向瓊脂擴散試驗(singlelagarimmunodiffusion)2）雙向瓊脂擴散試驗(doubleagarimmunodiffusion)

1）單向瓊脂擴散試驗應(yīng)用：Ag鑒定，定量AbAg2）雙向瓊脂擴散試驗(三)免疫標記技術(shù)將抗體或抗原反應(yīng)與熒光素、酶、放射性核素等標記技術(shù)相結(jié)合，通過檢測標記物，間接測定Ag-Ab復合的一類方法。重要標記技術(shù)：

1）免疫酶測定(enzymeimmunoassay,EIA)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA）

2）免疫熒光技術(shù)(immunofluorescencetechnique)3）放射免疫測定法(radioimmunoassay,RIA)4）免疫膠體金技術(shù)（immunologicalcolloidalgoldsignature,ICS)1.酶免疫測定用酶標記Ab進行的抗原抗體反應(yīng)，通過酶作用于底物后顯色來判斷結(jié)果。

抗原抗體反應(yīng)＋酶促反應(yīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗

（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）將已知抗原/Ab吸附在固相載體表面，再用酶標抗體/Ag進行檢測的抗原抗體反應(yīng)。特點：敏感性高（ng-pg），操作簡便類型：直接法(雙抗體夾心法):

Ab+Ag+Ab*

間接法:

Ag+Ab+抗Ab*

雙抗體夾心法2.免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù):用熒光素標記一抗或二抗，檢測特異性抗原或抗體的方法。分類：

(1)直接熒光法

（2)間接熒光法結(jié)果觀察:(1)熒光顯微鏡

(2)流式細胞儀(Flowcytometer，F(xiàn)CM)3、放射免疫測定法(radioimmunoassay,RIA)用放射性核素標記抗原或抗體進行免疫學檢測的技術(shù)第二節(jié)免疫細胞功能的檢測

免疫細胞的分離、鑒定免疫細胞的功能測定一、免疫細胞的分離外周血單個核細胞（peripheralbloodmononuclearcell,PBMC）T、B細胞的分離與鑒定磁珠分離法熒光激活細胞分選儀分離法（流式細胞術(shù)，F(xiàn)CM)外周血單個核細胞外周血單個核細胞-----淋巴細胞分離液二、免疫細胞及其亞群的分離和分析免疫吸附分離法：Ab包被培養(yǎng)板免疫磁珠法：

Ab吸附在磁珠上，加至細胞懸液，細胞吸附磁珠吸附磁鐵，洗脫未結(jié)合細胞熒光激活細胞分離儀分離法（FACS）即流式細胞儀（Flowcytometry，F(xiàn)CM）抗原肽-MHC分子四聚體技術(shù)分析CTL流式細胞儀工作原理抗原肽-MHC四聚體技術(shù)

二、免疫細胞功能的測定

（一）

T細胞功能測定：

(1)T細胞增殖(轉(zhuǎn)化)試驗：形態(tài)計數(shù)3H-TdR或125I-UdR摻入法MTT比色法（2）DTH檢測-----皮膚試驗

淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗（形態(tài)學示意圖）

PHA刺激48~72小時培養(yǎng)液3H-TdRPHA淋巴細胞全血分層液離心過濾測量放射性淋巴細胞增殖試驗（3H-TdR摻入法）示意圖結(jié)核菌素注射受試者前臂內(nèi)側(cè)皮內(nèi)紅腫硬結(jié)＞0.5cm陽性觀察局部超敏反應(yīng)48～72小時后無紅腫硬結(jié)或＜0.5cm陰性原理：Ⅳ型超敏反應(yīng)步驟： 皮膚試驗（結(jié)核菌素試驗）應(yīng)用： OT試驗（二）B細胞功能測定

(1)單向瓊脂擴散試驗等測定Ig的含量

(2)抗體形成細胞測定

溶血空斑形成試驗

（三）細胞毒試驗51Cr釋放法LDH釋放法凋亡細胞檢測ELISPOT靶細胞51Cr洗滌去除游離的51Cr效應(yīng)細胞測量上清液中釋放的51Cr混合培養(yǎng)4-6小時細胞毒試驗（51Cr釋放法）示意圖CK抗體包被的反應(yīng)板

CK抗原包被的反應(yīng)板加入淋巴細胞加入酶標記二抗加入底物檢測抗原特異性B細胞加入底物T細胞產(chǎn)生CK的檢測加入淋巴細胞加入酶標的CK抗體第二十三章免疫學防治適應(yīng)性免疫的獲得自然免疫人工免疫自然被動免疫自然主動免疫來自母親的抗體自然感染（隱性、顯性）人工被動免疫抗毒素免疫球蛋白人工主動免疫疫苗類毒素SIgAIgG

人工主動免疫articleactiveimmunization用疫苗（抗原物質(zhì))接種機體，使之主動產(chǎn)生適應(yīng)性免疫應(yīng)答，從而預防或治療疾病的方法。

人工被動免疫articlepassitiveimmunization給人體注射特異性抗體，使之被動獲得適應(yīng)性免疫應(yīng)答，達到治療或緊急預防疾病的方法。

兩類免疫方法的比較：人工免疫的種類自動免疫被動免疫

輸入物質(zhì)抗原抗體

免疫力出現(xiàn)的時間

1-4周后立即免疫力維持時間數(shù)月-數(shù)年2-3周

用途預防治療或緊急預防第一節(jié)免疫預防疫苗Vaccine：接種后能使機體對特定疾病產(chǎn)生免疫力的生物制劑類的統(tǒng)稱。疫苗的基本要求安全、有效、實用疫苗的種類及其發(fā)展第一代傳統(tǒng)疫苗：滅活疫苗、減毒活疫苗、類毒素、第二代疫苗：微生物的天然成分及其產(chǎn)物亞單位疫苗、重組蛋白疫苗第三代疫苗：基因疫苗

主動免疫被動免疫

(一)滅活疫苗（二）減毒活疫苗（三）類毒素病原體滅活減毒活病原體細菌外毒素脫毒體液免疫體液免疫、細胞免疫亞單位疫苗：提取病原體有效的免疫原成分制成的疫苗。

霍亂亞單位疫苗結(jié)合疫苗:細菌莢膜多糖+白喉類毒素DAN疫苗：用編碼病原體有效免疫原的基因與細菌質(zhì)粒構(gòu)建的重組體，注入人體，在宿主細胞中表達保護性抗原，從而誘導機體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的疫苗。重組載體疫苗：用編碼病原體有效免疫原的基因插入載體（減毒的病毒/細菌）基因組中，接種后,疫苗增殖大量表達保護性Ag.新疫苗的發(fā)展合成肽疫苗：用人工合成多肽抗原連接適當載體與佐劑制成的疫苗。豬口蹄疫合成肽疫苗基因工程疫苗：利用DNA重組技術(shù)制備的只含保護性抗原的純化疫苗。HBsAg疫苗三、疫苗的應(yīng)用

1.抗感染和計劃免疫

2.抗腫瘤：HPV疫苗

3.計劃生育:HCG4.防止免疫病理損傷:免疫偏離計劃免疫Planedimmunization

據(jù)某些傳染病的疫情監(jiān)測和人群免疫狀況，有計劃地用疫苗進行免疫接種，預防相應(yīng)傳染病，最終達到控制乃至消滅相應(yīng)的傳染病的措施。疫苗名稱接種對象月（年）齡乙肝疫苗0、1、6月齡卡介苗出生時脊灰疫苗2、3、4月齡，4周歲百白破疫苗3、4、5月齡，18-24月齡白破疫苗6周歲麻風、麻疹疫苗8月齡麻腮風疫苗18-24月齡乙腦疫苗8月齡，2周歲A群流腦疫苗8-18月齡A+C流腦疫苗3周歲，6周歲甲肝減毒活疫苗18月齡我國計劃免疫程序表第二節(jié)免疫治療一、分子治療（輸入分子制劑）1.分子疫苗：治療性疫苗2.抗體：多克隆抗體：