TGXTC 0011-2024 基于酶聯(lián)免疫法（ELISA）甘蔗宿根性早期評價

ICS65.020.20CCSB05GXTC團 體 標(biāo) 準(zhǔn)T/GXTC0011—2024基于酶聯(lián)免疫法（ELISA）甘蔗宿根性早期評價Earlyevaluationofsugarcaneperennialrootbasedonenzyme-linkedimmunoassay(ELISA)（完成時間：2024年7月3日星期三）2024-07-24發(fā)布 2024-08-05實施廣西熱帶作物學(xué)會??發(fā)布T/GXTC0011T/GXTC0011—2024IIII前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由廣西壯族自治區(qū)亞熱帶作物研究所提出并宣貫。本文件由廣西熱帶作物學(xué)會歸口。T/GXTC0011T/GXTC0011—2024PAGEPAGE1基于酶聯(lián)免疫法（ELISA）甘蔗宿根性早期評價范圍本文件規(guī)范了基于酶聯(lián)免疫法（ELISA）甘蔗宿根性早期評價的術(shù)語和定義、原理、材料和試劑、儀器設(shè)備、檢測步驟和數(shù)據(jù)處理。本文件適用于甘蔗組培苗、種苗、種莖及大田植株的宿根蔗宿根性的早期評價。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB19489實驗室生物安全通用要求術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。甘蔗宿根性 Sugarcaneperennial甘蔗宿根性是指甘蔗在收斬后留下的地下蔗莖和根系繼續(xù)存活并再次發(fā)株的能力，其強弱表現(xiàn)在宿根發(fā)株的快慢強弱和數(shù)量，最終成莖率、有效莖數(shù)和產(chǎn)蔗量高低等。酶聯(lián)免疫法 Enzymelinkedimmunosorbentassay縮略語 Acronym下列縮略語適用于本文件。ABA:脫落酸(Abscisicacid)IAA:生長素(Indoleaceticacid)GA3:赤霉素(Gibberellin)CAT:過氧化氫酶(Catalase)SOD:超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase)PAL:苯丙氨酸解氨酶(Phenylalanineammonia-lyase)SS:蔗糖合成酶(Sucrosesynthase)原理在甘蔗宿根性的研究中，植物激素如生長素（IAA）、赤霉素（GA）、脫落酸（ABA）等，可能影響蔗芽的萌發(fā)、根系的發(fā)育和植株的整體生長。過氧化氫酶（CAT）、植物苯丙氨酸解氨酶（PAL）（Prot）（SS）ELISA（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中植物激素和酶的濃度。材料和試劑材料試驗設(shè)計及田間管理試驗采用隨機區(qū)組田間設(shè)計，57m1.2m3個小區(qū)。新植蔗當(dāng)312.8芽/m1月收獲，保留宿根，宿根蔗次年1月收獲。新植蔗和宿根蔗的田間管理均與當(dāng)?shù)馗收岣弋a(chǎn)栽培管理相同。ELISA試劑盒IAA檢測試劑盒、ABA檢測試劑盒、GA3檢測試劑盒、CAT檢測試劑盒、SOD檢測試劑盒、Prot檢測試劑盒、PAL檢測試劑盒、SS檢測試劑盒。除另有說明外，所用試劑均為分析純，實驗用水應(yīng)符合GB/T6682中三級水的要求。見附錄A。儀器設(shè)備分光光度計波長范圍（325nm～800nm），波長準(zhǔn)確度（±2nm）。酶標(biāo)儀波長范圍（200nm～1000nm）,精度：SD<0.001Abs或CV0.5%，@450nm(0Abs～3Abs)。培養(yǎng)箱控溫范圍：RT+5～RT+65，輸入功率：450W，定時范圍：1min～9999min。移液器10μL～100μL、20μL～200μL、100μL～1000μL。離心機轉(zhuǎn)速100rpm～14800rpm，步長100rpm，容量1.5mL/2.0mL×24，溫控-20℃～40℃。檢測步驟試樣的采集與準(zhǔn)備3樣品溶液的準(zhǔn)備取回的嫩根（步驟7.1）加入2mL生理鹽水冰浴研磨搗碎，4℃，9550rpm離心10分鐘，取上清液，待測。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制450nm1cm試樣的測定50μL40L10μL。按照酶聯(lián)免疫試劑盒所述操作步驟對待測試樣（液）進(jìn)行定量檢測，重復(fù)三次。數(shù)據(jù)處理待測液濃度計算按照試劑盒說明書提供的計算方法以及計算機軟件，將待測液吸光度代入7.3所獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算待測液濃度。宿根性強弱評價方法采用WPS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和作圖。將參與評價指標(biāo)相對數(shù)據(jù)劃分為5級。對每一品種所測指標(biāo)相對值進(jìn)行分級，使每一指標(biāo)都得到相應(yīng)級別值。公式為：D=(Hmax-Hmin)/5（1）E=[(H-Hmin)/D]+1（2）式中，Hmax為各指標(biāo)相對數(shù)據(jù)最大值；Hmin為各指標(biāo)相對數(shù)據(jù)最小值；H為各指標(biāo)相對數(shù)據(jù)任意值；D為得分級差（每得1分之差）；E為各材料每個指標(biāo)的級別值。通過計算可以得到鑒評矩陣。權(quán)重系數(shù)為每一指標(biāo)在綜合評價中的權(quán)重，計算公式為：任意指標(biāo)權(quán)重系數(shù)B=任意指標(biāo)變異系數(shù)/各指標(biāo)變異系數(shù)之和（3）綜合評價值其計算公式為：Vi=ΣEij×Bj（i=1，2…8；j=1，2…4）,（4）式中，Vi為每一份材料綜合評價值；Eij為各相對數(shù)據(jù)的級別值；Bj為對應(yīng)指標(biāo)權(quán)重系數(shù)。宿根性強弱判定標(biāo)準(zhǔn)甘蔗宿根性強弱根據(jù)綜合評價值Vi確定，Vi值越高，說明該材料的宿根性越好。附 錄 A（資料性）表A.1給出了內(nèi)源激素和酶活檢測試劑盒。表A.1 內(nèi)源激素和酶活檢測試劑盒產(chǎn)品名稱規(guī)格數(shù)量（盒）備注植物吲哚乙酸(IAA)ELISA試劑盒48T1定量植物脫落酸(ABA)ELISA試劑盒48T1定量植物赤霉素(GA3)ELISA試劑盒48T1定量植物過氧化氫酶(CAT)ELISA試劑盒48T1酶活植物超氧化物歧化酶(SOD)ELISA試劑盒48T1酶活植物蛋白酶(Prot)ELISA試劑盒48T1酶活植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA試劑盒48T1酶活植物蔗糖合成酶(SS)ELISA試劑盒48T1酶活表A.2給出了試劑盒組成。表A.2 試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)