生物技術(shù)與工程-三年（2020-2022）高考真題生物分項(xiàng)匯編（新高考專(zhuān)用）（解析版）-高考生物備考復(fù)習(xí)重點(diǎn)資料歸納

專(zhuān)題14生物技術(shù)與工程

:蹩2022年高考真題

1.(2022.湖南.高考真題)水蛭是我國(guó)的傳統(tǒng)中藥材，主要藥理成分水蛭素為水蛭蛋白中重

要成分之一，具有良好的抗凝血作用。擬通過(guò)蛋白質(zhì)工程改造水蛭素結(jié)構(gòu)，提高其抗凝血活

性。回答下列問(wèn)題:

(1)蛋白質(zhì)工程流程如圖所示，物質(zhì)a是，物質(zhì)b是.。在生產(chǎn)過(guò)程中，物質(zhì)b

可能不同，合成的蛋白質(zhì)空間構(gòu)象卻相同，原因是

分子設(shè)計(jì)

<?....................蛋白質(zhì)預(yù)期功能

三維結(jié)構(gòu)一生物功能

折彘

(2)蛋白質(zhì)工程是基因工程的延伸，基因工程中獲取目的基因的常用方法有

,和利用PCR技術(shù)擴(kuò)增。PCR技術(shù)遵循的基本原理是.

(3)將提取的水蛭蛋白經(jīng)甲、乙兩種蛋白酶水解后，分析水解產(chǎn)物中的肽含量及其抗凝血活

性，結(jié)果如圖所示。推測(cè)兩種處理后酶解產(chǎn)物的抗凝血活性差異主要與肽的(填“種

類(lèi)''或"含量”)有關(guān)，導(dǎo)致其活性不同的原因是

6oo

尊

己5oo

裝4oo

照3oo

自

純2oo金—酶甲處理

與1OO

—O-酶乙處理

0246810

酶解時(shí)間(h)

(4)若要比較蛋白質(zhì)工程改造后的水蛭素、上述水蛭蛋白酶解產(chǎn)物和天然水蛭素的抗凝血活

性差異，簡(jiǎn)要寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路.

【答案】(1)氨基酸序列多肽鏈mRNA密碼子的簡(jiǎn)并性

(2)從基因文庫(kù)中獲取目的基因通過(guò)DNA合成儀用化學(xué)方法直接人工合成DNA

雙鏈復(fù)制

(3)種類(lèi)提取的水蛭蛋白的酶解時(shí)間和處理的酶的種類(lèi)不同，導(dǎo)致水蛭蛋白空間結(jié)構(gòu)

有不同程度破壞

(4)取3支試管，分別加入等量的蛋白質(zhì)工程改造后的水蛭素、上述水蛭蛋白酶解產(chǎn)物和天

然水蛭素；用酒精消毒，用注射器取同一種動(dòng)物(如家兔)血液，立即將等量的血液加入1、

2、3號(hào)三支試管中，靜置相同時(shí)間，統(tǒng)計(jì)三支試管中血液凝固時(shí)間

【解析】

【分析】

1、蛋白質(zhì)工程的基本途徑是：從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)一設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)一推測(cè)

應(yīng)有的氨基酸序列T找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核甘酸序列；

2、蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過(guò)基因修

飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造--種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類(lèi)的生產(chǎn)和生活

的需求。也就是說(shuō)，蛋白質(zhì)工程是在基因工程的基礎(chǔ)上，延伸出來(lái)的第二代基因工程，是包

含多學(xué)科的綜合科技工程領(lǐng)域。

(1)

據(jù)分析可知，物質(zhì)a是氨基酸序列多肽鏈，物質(zhì)b是mRNA。在生產(chǎn)過(guò)程中，物質(zhì)b可能

不同，合成的蛋白質(zhì)空間構(gòu)象卻相同，原因是密碼子的簡(jiǎn)并性，即一種氨基酸可能有幾個(gè)密

碼子。

(2)

蛋白質(zhì)工程是基因工程的延伸，基因工程中獲取目的基因的常用方法有從基因文庫(kù)中獲取目

的基因、通過(guò)DNA合成儀用化學(xué)方法直接人工合成和利用PCR技術(shù)擴(kuò)增。PCR技術(shù)遵循

的基本原理是DNA雙鏈復(fù)制。

(3)

將提取的水蛭蛋白經(jīng)甲、乙兩種蛋白酶水解后，據(jù)圖可知，水解產(chǎn)物中的肽含量隨著酶解時(shí)

間的延長(zhǎng)均上升，且差別不大；而水解產(chǎn)物中抗凝血活性有差異，經(jīng)酶甲處理后，隨著酶解

時(shí)間的延長(zhǎng)，抗凝血活性先上升后相對(duì)穩(wěn)定，經(jīng)酶乙處理后，隨著酶解時(shí)間的延長(zhǎng)，抗凝血

活性先上升后下降，且酶甲處理后的酶解產(chǎn)物的抗凝血活性最終高于經(jīng)前乙處理后的酶解產(chǎn)

物的抗凝血活性，差異明顯，據(jù)此推測(cè)兩種處理后酶解產(chǎn)物的抗凝血活性差異主要與肽的種

類(lèi)有關(guān)，導(dǎo)致其活性不同的原因是提取的水蛭蛋白的酶解時(shí)間和酶的種類(lèi)不同，導(dǎo)致水蛭蛋

白空間結(jié)構(gòu)有不同程度破壞。

(4)

若要比較蛋白質(zhì)工程改造后的水蛭素、上述水蛭蛋白酶解產(chǎn)物和天然水蛭素的抗凝血活性差

異，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路為：取3支試管，分別加入等量的蛋白質(zhì)工程改造后的水蛭素、上述水蛭

蛋白酶解產(chǎn)物和天然水蛭素；用酒精消毒，用注射器取同一種動(dòng)物(如家兔)血液，立即將

等量的血液加入I、2、3號(hào)三支試管中，靜置相同時(shí)間，統(tǒng)計(jì)三支試管中血液凝固時(shí)間。

2.(2022?山東?高考真題)某種類(lèi)型的白血病由蛋白P引發(fā)，蛋白UBC可使P被蛋白前識(shí)

別并降解，藥物A可通過(guò)影響這一過(guò)程對(duì)該病起到治療作用。為探索藥物A治療該病的機(jī)

理，需構(gòu)建重組載體以獲得融合蛋白FLAG-P和FLAG-PA?P△是缺失特定氨基酸序列的P,

FLAG是一種短肽，連接在P或P△的氨基端，使融合蛋白能與含有FLAG抗體的介質(zhì)結(jié)合,

但不影響P或P△的功能。

(1)為構(gòu)建重組載體，需先設(shè)計(jì)引物，通過(guò)PCR特異性擴(kuò)增P基因。用于擴(kuò)增P基因的引物

需滿足的條件是、為使PCR產(chǎn)物能被限制酶切割，需在引物上添加相應(yīng)的限制酶識(shí)

別序列，該限制酶識(shí)別序列應(yīng)添加在引物的(填“3端”或“5端”)。

(2)PCR擴(kuò)增得到的P基因經(jīng)酶切連接插入載體后，與編碼FLAG的序列形成一個(gè)融合基因，

如圖甲所示，其中“ATGTGCA”為P基因編碼鏈起始序列。將該重組載體導(dǎo)入細(xì)胞后，融合

基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA序列正確，翻譯出的融合蛋白中FLAG的氨基酸序列正確，但P基因

對(duì)應(yīng)的氨基酸序列與P不同。據(jù)圖甲分析，出現(xiàn)該問(wèn)題的原因是o修改擴(kuò)增P基因

時(shí)使用的帶有EcoR1識(shí)別序列的引物來(lái)解決該問(wèn)題，具體修改方案是

EcoRIBamHI

重蛆載體-i鰥，p基因?終if為—注：DN脩碼鏈為轉(zhuǎn)錄

的部分結(jié)構(gòu)

k/\時(shí)所用模板捱的互補(bǔ)捱

編碼FLAG的序列

放大

Z'coRIl、BamHI

D、磔碼德ATGGAC-AAGGCGAATTCATGTGCA-^GGATCC

氨基酸序列Met|Asp…Lys|AlaAsnSerCysAlaGlySer

FLAG圖甲

(3)融合蛋白表達(dá)成功后，將FLAG-P、FLAG-PA、藥物A和UBC按照?qǐng)D乙中的組合方式分

成5組。各組樣品混勻后分別流經(jīng)含F(xiàn)LAG抗體的介質(zhì)，分離出與介質(zhì)結(jié)合的物質(zhì)并用UBC

抗體檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如圖丙所示。已知FLAG-P和FLAG-P△不能降解UBC,由①②③組結(jié)

果的差異推測(cè)，藥物A的作用是；由②④組或③⑤組的差異推測(cè)，P△中缺失的特定

序列的作用是，

①②③④⑤注：.②③④⑤

FLAG-P-++-表示有

+表示無(wú)UBcl———

FLAG-PA---+

藥物A--+-圖丙

UBC++++

圖7,

(4)根據(jù)以上結(jié)果推測(cè)，藥物A治療該病的機(jī)理是

【答案】(1)兩種引物分別與兩條模板鏈3,端的堿基序列互補(bǔ)配對(duì)5,端

(2)在轉(zhuǎn)錄出的mRNA中，限制酶識(shí)別序列對(duì)應(yīng)的最后兩個(gè)堿基與P基因?qū)?yīng)的第一個(gè)

堿基構(gòu)成一個(gè)密碼子，導(dǎo)致讀碼框改變，翻譯出的氨基酸序列改變。

在EcoRI識(shí)別序列前后增加堿基，使其堿基數(shù)目加上FLAG的堿基數(shù)目為3的倍數(shù)

(3)促進(jìn)UBC與FLAG-P的結(jié)合P△中缺失的特定序列是與UBC結(jié)合的關(guān)鍵序列

(4)藥物A促進(jìn)UBC與FLAG-P的結(jié)合，從而促進(jìn)蛋白P被蛋白酶識(shí)別并降解，達(dá)到治療的

目的。

【解析】

【分析】

PCR過(guò)程：①變性：當(dāng)溫度上升到90℃以上時(shí)，雙鏈DNA解旋為單鏈；②溫度下降到50℃

左右時(shí)，兩種引物通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)與兩條單鏈DNA結(jié)合；③延伸：當(dāng)溫度上升到72℃左

右時(shí)，溶液中的4種脫氧核甘酸在耐高溫的DNA聚合酶的作用下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則

合成新的DNA鏈。

(1)

引物是一小段能與DNA母鏈的一段堿基序列互補(bǔ)配對(duì)的短單鏈核甘酸，因此設(shè)計(jì)擴(kuò)增P基

因的引物，需要兩種引物分別與兩條模板鏈3,端的堿基序列互補(bǔ)。DNA聚合酶延伸時(shí)，是

將脫氧核甘酸加到引物的3,端，為了不破壞目的基因，該限制酶識(shí)別序列應(yīng)添加在引物的

5,端。

(2)

融合基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA序列正確，翻譯出的融合蛋白中FLAG的氨基酸序列正確，但P

基因?qū)?yīng)的氨基酸序列與P不同，說(shuō)明P基因翻譯時(shí)出錯(cuò)。由圖可看出，在轉(zhuǎn)錄出的mRNA

中，限制酶識(shí)別序列對(duì)應(yīng)的最后兩個(gè)堿基與P基因?qū)?yīng)的第一個(gè)堿基構(gòu)成一個(gè)密碼子，導(dǎo)

致讀碼框改變，翻譯出的氨基酸序列改變，可通過(guò)在EcoR1識(shí)別序列前后增加堿基，使其

堿基數(shù)目加上FLAG的堿基數(shù)目為3的倍數(shù)，這樣能保證P基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA上的讀碼

框不改變，能夠正常翻譯。

(3)

①組僅添加UBC,處理后，用UBC抗體檢測(cè)，不出現(xiàn)雜交帶：②組添加UBC和FLAG-P,

出現(xiàn)雜交帶；③組添加UBC、藥物A和FLAG-P,雜交帶更加明顯，說(shuō)明藥物A的作用是

促進(jìn)UBC與FLAG-P的結(jié)合。由②④組或③⑤組的差異在于②③組使用FLAG-P,出現(xiàn)雜

交帶；④⑤組使用FLAG-P1不出現(xiàn)雜交帶，據(jù)此推測(cè)P△中缺失的特定序列是與UBC結(jié)

合的關(guān)鍵序列。

(4)

根據(jù)(3)的分析推測(cè)，藥物A促進(jìn)UBC與FLAG-P的結(jié)合，從而促進(jìn)蛋白P被蛋白酶識(shí)

別并降解，達(dá)到治療的目的。

【點(diǎn)睛】

本題難點(diǎn)在于分析翻譯出錯(cuò)的原因，需要結(jié)合翻譯相關(guān)知識(shí)對(duì)圖進(jìn)行仔細(xì)分析方可得出結(jié)

論。

3.(2022年6月?浙江?高考真題)回答下列(一)、(~)小題：

(一)回答與產(chǎn)淀粉醐的枯草桿菌育種有關(guān)的問(wèn)題：

(1)為快速分離產(chǎn)淀粉酶的枯草桿菌，可將土樣用制成懸液，再將含有懸液的三

角瓶置于80℃的中保溫一段時(shí)間，其目的是o

(2)為提高篩選效率，可將菌種的過(guò)程與菌種的產(chǎn)酶性能測(cè)定一起進(jìn)行：將上述

懸液稀釋后涂布于淀粉為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，采用顯色方法，根據(jù)

透明圈與菌落直徑比值的大小，可粗略估計(jì)出菌株是否產(chǎn)酶及產(chǎn)酶性能。

(3)為了獲得高產(chǎn)淀粉酶的枯草桿菌，可利用現(xiàn)有菌種，通過(guò)后再篩選獲得，或

利用轉(zhuǎn)基因、等技術(shù)獲得。

(二)回答與植物轉(zhuǎn)基因和植物克隆有關(guān)的問(wèn)題：

(4)在用農(nóng)桿菌侵染的方法進(jìn)行植物轉(zhuǎn)基因過(guò)程中，通常要使用抗生素，其目的一是抑制

___________生長(zhǎng)，二是篩選轉(zhuǎn)化細(xì)胞。當(dāng)選擇培養(yǎng)基中抗生素濃度時(shí)，通常會(huì)

出現(xiàn)較多假陽(yáng)性植株，因此在轉(zhuǎn)基因前需要對(duì)受體進(jìn)行抗生素的檢測(cè)。

(5)為提高培育轉(zhuǎn)基因植株的成功率，植物轉(zhuǎn)基因受體需具有較強(qiáng)的能力和遺傳

穩(wěn)定性。對(duì)培養(yǎng)的受體細(xì)胞遺傳穩(wěn)定性的早期檢測(cè)，可通過(guò)觀察細(xì)胞內(nèi)形態(tài)是

否改變進(jìn)行判斷，也可通過(guò)觀察分裂期染色體的，分析染色體組型是否改變進(jìn)

行判斷。

(6)植物轉(zhuǎn)基因受體全能性表達(dá)程度的高低主要與受體的基因型、培養(yǎng)環(huán)境、繼代次數(shù)和

長(zhǎng)短等有關(guān)。同時(shí)也與受體的取材有關(guān)，其中受體為時(shí)全能性表達(dá)

能力最高。

【答案】(1)無(wú)菌水水浴殺死不耐熱微生物

(2)分離KI-I2

(3)人工誘變?cè)|(zhì)體融合

⑷農(nóng)桿菌過(guò)低敏感性

(5)再生細(xì)胞核形態(tài)特征和數(shù)量

(6)培養(yǎng)時(shí)間受精卵

【解析】

【分析】

(-)選擇培養(yǎng)基是根據(jù)某種微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)

的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢(shì)菌變成優(yōu)勢(shì)菌，從而提高該菌的篩選率。

(二)農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的

DNA上。根據(jù)農(nóng)桿菌的這一特點(diǎn)，如果將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上，通過(guò)農(nóng)桿

菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以把目的基因整合到植物細(xì)胞中染色體的DNA上。轉(zhuǎn)化過(guò)程：目的基

因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上農(nóng)桿菌-導(dǎo)入植物細(xì)胞一目的基因整合到植物細(xì)胞染色體匕一目

的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達(dá)。

(1)

產(chǎn)生淀粉醐的枯草桿菌的最適溫度為50-75C,要快速分離枯草桿菌，先將土樣加入無(wú)菌水

制成枯草桿菌懸液，再將含有懸液的三角瓶置于80℃的水浴中保溫一段時(shí)間，殺死不耐熱

的微生物。

(2)

將菌種的分離過(guò)程與菌種的產(chǎn)酶性能測(cè)定同時(shí)進(jìn)行可以提高篩選效率。用稀釋涂布平板法可

以分離枯草桿菌，在培養(yǎng)基中添加淀粉作為唯一碳源，并且在培養(yǎng)基中添加Kl-h,能合成

淀粉酶的枯草桿菌因?yàn)槟芾玫矸鄱婊?，同時(shí)淀粉由于被分解在菌落周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)透明圈，

比較透明圈與菌落直徑比值的大小，比值大的說(shuō)明該菌株產(chǎn)醐性能較高。

(3)

要獲得高產(chǎn)淀粉酣的枯草桿菌，可利用誘變育種，由于變異的不定向性，人工誘變后還需要

再篩選才能獲得高產(chǎn)淀粉前的枯草桿菌。也可以利用轉(zhuǎn)基因、原生質(zhì)體融合等技術(shù)，從其他

生物那里獲得與高產(chǎn)淀粉酶有關(guān)的基因，進(jìn)而獲得相應(yīng)的高產(chǎn)性狀。

(4)

野生的農(nóng)桿菌沒(méi)有抗性基因，用于轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞的農(nóng)桿菌一般在其T—DNA中插入一種抗

生素抗性基因。抗生素的作用是抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，農(nóng)桿菌屬于細(xì)菌，在其侵染植物過(guò)程中，可

以用另一種抗生素抑制農(nóng)桿菌的生長(zhǎng)，從而達(dá)到在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中消除轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞中農(nóng)桿菌的

作用。具有T-DNA中抗性基因的細(xì)胞能在含有相應(yīng)抗生素的培養(yǎng)基上存活?當(dāng)培養(yǎng)基中抗

生素濃度過(guò)低時(shí)，很多沒(méi)有抗性的細(xì)胞也存活下來(lái)，因此出現(xiàn)假陽(yáng)性，故在轉(zhuǎn)基因前要對(duì)受

體進(jìn)行抗生素的敏感性檢測(cè)。

(5)

轉(zhuǎn)基因植株要經(jīng)過(guò)植物組織培育，要提高培育轉(zhuǎn)基因植株的成功率，應(yīng)該選再生能力和遺傳

穩(wěn)定性較強(qiáng)的受體，這種受體全能性較高，能保持生物的性狀。對(duì)培養(yǎng)的受體細(xì)胞遺傳穩(wěn)定

性的早期檢測(cè)，可通過(guò)觀察細(xì)胞核形態(tài)是否改變進(jìn)行判斷，也可以直接在光學(xué)顯微鏡下觀察

分裂期染色體的形態(tài)特征和數(shù)量，分析染色體組型是否改變。

(6)

植物轉(zhuǎn)基因受體全能性表達(dá)程度高低除了與受體基因型、培養(yǎng)環(huán)境、繼代次數(shù)有關(guān)外，還與

培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)短和受體的取材有關(guān)，受精卵是沒(méi)分化的細(xì)胞，分裂和分化能力都很強(qiáng)，故受體

為受精卵時(shí)全能性表達(dá)能力最高。

4.(2022年1月?浙江?高考真題)回答下列(一)、(二)小題：

(-)紅曲霉合成的紅曲色素是可食用的天然色素，具有防腐、降脂等功能。研究者進(jìn)行了

紅曲色素的提取及紅色素的含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)，流程如下：

(1)取紅曲霉菌種斜面，加適量____________洗下菌苔，制成菌懸液并培養(yǎng)，解除休眠獲得

____________菌種。經(jīng)液體發(fā)酵，收集紅曲霉菌絲體，紅曲霉菌絲體與70%乙醇溶液混合,

經(jīng)浸提、,獲得的上清液即為紅曲色素提取液。為進(jìn)一步提高紅曲色素得率,

可將紅曲霉細(xì)胞進(jìn)行處理。

(2)紅曲色素包括紅色素、黃色素和橙黃色素等，紅色素在390nm、420nm和505nm波長(zhǎng)處

均有較大吸收峰。用光電比色法測(cè)定紅曲色素提取液甲的紅色素含量時(shí)，通常選用505nm

波長(zhǎng)測(cè)定的原因是。測(cè)定時(shí)需用作空白對(duì)照。

(3)生產(chǎn)上提取紅曲色素后的殘?jiān)?jīng)處理后作為飼料添加劑或有機(jī)肥，這屬于

廢棄物的無(wú)害化和處理。

(-)我國(guó)在新冠疫情方面取得了顯著的成效，但全球疫情形勢(shì)仍然非常嚴(yán)峻、尤其是病毒

出現(xiàn)了新變異株一德?tīng)査?、奧密克戎，更是威脅著全人類(lèi)的生命健康。

(4)新冠病毒核酸定性檢測(cè)原理是：以新冠病毒的單鏈RNA為模板，利用酶合成

DNA,經(jīng)PCR擴(kuò)增，然后在擴(kuò)增產(chǎn)物中加入特異的,如果檢測(cè)到特異的雜交分

子則核酸檢測(cè)為陽(yáng)性。

(5)接種疫苗是遏制新冠疫情蔓延的重要手段。腺病毒疫苗的制備技術(shù)要點(diǎn)是：將腺病毒的

復(fù)制基因敲除；以新冠病毒的_________基因?yàn)槟０搴铣傻腄NA插入腺病毒基因組，構(gòu)建

重組腺病毒。重組腺病毒在人體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)產(chǎn)生新冠病毒抗原，從而引發(fā)特異性免疫反應(yīng)。

在此過(guò)程中，腺病毒的作用是作為基因工程中目的基因的。將腺病毒復(fù)制基因

敲除的目的是o

(6)單克隆抗體有望用于治療新冠肺炎。單克隆抗體的制備原理是：取免疫陽(yáng)性小鼠的

細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞混合培養(yǎng)，使其融合，最后篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤

細(xì)胞。與植物組織培養(yǎng)相比，雜交瘤細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)需要特殊的成分，如胰島素和

【答案】(1)無(wú)菌水活化離心破碎

(2)其它色素對(duì)該波長(zhǎng)光的吸收相對(duì)較少，干擾相時(shí)較小70%乙醇溶液

⑶滅菌資源化

(4)逆轉(zhuǎn)錄核酸探針

(5)抗原載體使腺病毒失去復(fù)制能力

(6)脾動(dòng)物血清

【解析】

【分析】

1、無(wú)菌操作包括滅菌和消毒兩種方式。消毒的方法有巴氏消毒法、酒精消毒、煮沸消毒法;

滅菌的方法有干熱滅菌、灼燒滅菌和高壓蒸汽滅菌。2、微生物接種：微生物接種的方法很

多，最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法，常用來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品活菌數(shù)目的方法是稀釋涂布

平板法。3、平板劃線法：通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌

種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。

(1)

防止污染，洗菌苔可加適量的無(wú)菌水，制成菌懸液并培養(yǎng)，解除休眠獲得活化菌種。紅曲霉

菌絲體與70%乙醇溶液混合，經(jīng)浸提、離心，獲得的上清液即為紅曲色素提取液。為進(jìn)一

步提高紅曲色素得率，可將紅曲霉細(xì)胞進(jìn)行破碎處理，使細(xì)胞內(nèi)的紅曲色素釋放出來(lái)。

(2)

用光電比色法測(cè)定紅曲色素提取液甲的紅色素含量時(shí)，通常選用505nm波長(zhǎng)測(cè)定的原因是

其它色素對(duì)該波長(zhǎng)光的吸收相對(duì)較少，干擾相對(duì)較小。由于提取紅曲色素是用的70%乙爵

溶液，故測(cè)定時(shí)需用70%乙醇溶液作空白對(duì)照。

(3)

生產(chǎn)上提取紅曲色素后的殘?jiān)?，?jīng)滅菌處理殘?jiān)?，作為飼料添加劑或有機(jī)肥，這屬于廢棄

物的無(wú)害化和資源化處理。

(4)

RNA做模板合成DNA,利用逆轉(zhuǎn)錄酶；PCR擴(kuò)增，然后在擴(kuò)增產(chǎn)物中加入特異的核酸探針,

檢測(cè)新冠病毒核酸。如果檢測(cè)到特異的雜交分子則核酸檢測(cè)為陽(yáng)性。

(5)

腺病毒疫苗的制備技術(shù)要點(diǎn)是：將腺病毒的復(fù)制基因敲除；以新冠病毒的抗原基因?yàn)槟０搴?/p>

成的DNA插入腺病毒基因組，構(gòu)建重組腺病毒。重組腺病毒在人體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)產(chǎn)生新冠病

毒抗原，從而引發(fā)特異性免疫反應(yīng)。在此過(guò)程中，腺病毒的作用是作為基因工程中目的基因

的載體。將腺病毒復(fù)制基因敲除的目的是使腺病毒失去復(fù)制能力。

(6)

單克隆抗體的制備原理是：取免疫陽(yáng)性小鼠的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞混合培養(yǎng)，使其融合，最

后篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。與植物組織培養(yǎng)相比，雜交瘤細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)需要特

殊的成分，如胰島素和動(dòng)物血清。

【點(diǎn)睛】

本題考查微生物的分離與培養(yǎng)等相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記培養(yǎng)基的成分、無(wú)菌技術(shù)、微生物

分離的過(guò)程，能正確理解圖形和表格中隱含的知識(shí)和結(jié)論。

2021年高考真題

1.(2021遼寧高考真題)下圖是利用體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆優(yōu)質(zhì)奶牛的簡(jiǎn)易流程圖，有關(guān)

敘述正確的是()

A.后代丁的遺傳性狀由甲和丙的遺傳物質(zhì)共同決定

B.過(guò)程①需要提供95%空氣和5%CO2的混合氣體

C.過(guò)程②常使用顯微操作去核法對(duì)受精卵進(jìn)行處理

D.過(guò)程③將激活后的重組細(xì)胞培養(yǎng)至原腸胚后移植

【答案】B

【解析】

【分析】

分析圖解：圖示過(guò)程為體細(xì)胞克隆過(guò)程，取乙牛體細(xì)胞，對(duì)處于減數(shù)第二次分裂中期的卵母

細(xì)胞去核，然后進(jìn)行細(xì)胞核移植；融合后的細(xì)胞激活后培養(yǎng)到早期胚胎，再進(jìn)行胚胎移植，

最終得到克隆牛。

【詳解】

A、后代丁的細(xì)胞核的遺傳物質(zhì)來(lái)自甲，細(xì)胞質(zhì)的遺傳物質(zhì)來(lái)自于乙牛，則丁的遺傳性狀由

甲和乙的遺傳物質(zhì)共同決定，A錯(cuò)誤；

B、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中需要提供95%空氣（保證細(xì)胞的有氧呼吸）和5%CC>2（維持培養(yǎng)液的

pH）的混合氣體，B正確；

C、過(guò)程②常使用顯微操作去核法對(duì)卵母細(xì)胞進(jìn)行處理，C錯(cuò)誤；

D、過(guò)程③將激活后的重組細(xì)胞培養(yǎng)至囊胚或桑植胚后移植，D錯(cuò)誤。

故選B<,

2.（2021遼寧高考真題）下列有關(guān)病毒在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用的敘述，錯(cuò)誤的是（）

A.滅活的病毒可用于誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合

B.用特定的病毒免疫小鼠可制備單克隆抗體

C.基因工程中常用噬菌體轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞

D.經(jīng)滅活或減毒處理的病毒可用于免疫預(yù)防

【答案】C

【解析】

【分析】

1、病毒是非細(xì)胞生物，只能寄生在活細(xì)胞中進(jìn)行生命活動(dòng)。病毒依據(jù)宿主細(xì)胞的種類(lèi)可分

為植物病毒、動(dòng)物病毒和噬菌體；根據(jù)遺傳物質(zhì)來(lái)分，分為DNA病毒和RNA病毒；病毒

由核酸和蛋白質(zhì)組成。

2、疫苗是將病原微生物（如細(xì)菌、立克次氏體、病毒等）及其代謝產(chǎn)物，經(jīng)過(guò)人工減毒、

滅活或利用轉(zhuǎn)基因等方法制成的用于預(yù)防傳染病的自動(dòng)免疫制劑。應(yīng)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)的疫

苗，主要成分是病毒的表面抗原蛋白，接種后能刺激機(jī)體免疫細(xì)胞產(chǎn)生抵抗病毒的抗體。

【詳解】

A、促進(jìn)動(dòng)物細(xì)胞的融合除了物理方法和化學(xué)方法外，還可以采用滅活的病毒，A正確；

B、病毒作為抗原可刺激機(jī)體發(fā)生特異性免疫，產(chǎn)生抗體，用特定的病毒免疫小鼠可制備單

克隆抗體，B正確：

C、基因工程中常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞，農(nóng)桿菌的特點(diǎn)是其細(xì)胞內(nèi)的Ti質(zhì)粒上的T-DNA

片段能夠轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞的染色體上，C錯(cuò)誤；

D、經(jīng)過(guò)滅活或減毒處理的病毒可以作為免疫學(xué)中的疫苗，用于免疫預(yù)防，D正確。

故選Co

3.（2021年江蘇高考真題）下圖是剔除轉(zhuǎn)基因植物中標(biāo)記基因的一種策略，下列相關(guān)敘述

錯(cuò)誤的是（）

無(wú)篩選標(biāo)記

轉(zhuǎn)基因植株

農(nóng)桿菌1

SMG

G01

農(nóng)桿菌2

A.分別帶有目的基因和標(biāo)記基因的兩個(gè)質(zhì)粒，都帶有T-DNA序列

B.該方法建立在高轉(zhuǎn)化頻率基礎(chǔ)上，標(biāo)記基因和目的基因須轉(zhuǎn)到不同染色體上

C.若要獲得除標(biāo)記基因的植株，轉(zhuǎn)化植株必須經(jīng)過(guò)有性繁殖階段遺傳重組

D.獲得的無(wú)篩選標(biāo)記轉(zhuǎn)基因植株發(fā)生了染色體結(jié)構(gòu)變異

【答案】D

【解析】

【分析】

將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA

可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上。根據(jù)農(nóng)桿菌的這種特點(diǎn)，如果

將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上，通過(guò)農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以使目的基因進(jìn)入植

物細(xì)胞，并將其插入到植物細(xì)胞中染色體的DNA匕使目的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持

和表達(dá)。

【詳解】

A、農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，井且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA

上，故分別帶有目的基因和標(biāo)記基因的兩個(gè)質(zhì)粒，都帶有T-DNA序列，進(jìn)而成功整合到受

體細(xì)胞染色體上，A正確：

B、該方法需要利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，在高轉(zhuǎn)化頻率的基礎(chǔ)上，將目的基因和標(biāo)記基因整合到

染色體上，由圖可知，標(biāo)記基因和目的基因位于細(xì)胞中不同的染色體上，B正確；

C、通過(guò)雜交分離結(jié)果可知，經(jīng)過(guò)有性繁殖階段遺傳重組后獲得了三種類(lèi)型細(xì)胞，其中包括

只含目的基因的，只含標(biāo)記基因的和既含目的基因又含標(biāo)記基因的，C正確；

D、獲得的無(wú)篩選標(biāo)記轉(zhuǎn)基因植株發(fā)生了基因重組，D錯(cuò)誤。

故選D。

4.（2021年江蘇高考真題）下列關(guān)于哺乳動(dòng)物胚胎工程和細(xì)胞工程的敘述，錯(cuò)誤的是

（）

A.細(xì)胞培養(yǎng)和早期胚胎培養(yǎng)的培養(yǎng)液中通常需要添加血清等物質(zhì)

B.早期胚胎需移植到經(jīng)同期發(fā)情處理的同種雌性動(dòng)物體內(nèi)發(fā)育成個(gè)體

C.猴的核移植細(xì)胞通過(guò)胚胎工程已成功地培育出了克隆猴

D.將骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞混合，經(jīng)誘導(dǎo)后融合的細(xì)胞即為雜交瘤細(xì)胞

【答案】D

【解析】

【分析】

1、胚胎移植的生理基礎(chǔ)（1）供體與受體相同的生理變化，為供體的胚胎植入受體提供了相

同的生理環(huán)境；（2）胚胎在早期母體中處于游離狀態(tài)，這就為胚胎的收集提供了可能；（3）

子宮不對(duì)外來(lái)胚胎發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，這為胚胎在受體內(nèi)的存活提供了可能；（4）胚胎遺傳

性狀不受受體任何影響。

2、漿細(xì)胞能夠分泌抗體，但是不具有增殖能力，而骨髓瘤細(xì)胞具有無(wú)限增殖的能力，因此

利用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)將漿細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合成雜交瘤細(xì)胞，利用該細(xì)胞制備單克隆抗

體。

【詳解】

A、細(xì)胞培養(yǎng)和下期胚胎培養(yǎng)的培養(yǎng)液中通常需添加血清等物質(zhì)，A正確；

B、早期胚胎需移植到經(jīng)同期發(fā)情處理的同種雌性動(dòng)物體內(nèi)發(fā)育成個(gè)體，B正確；

C、我國(guó)利用核移植技術(shù)成功培養(yǎng)出克隆猴“中中”和"華華”，C正確；

D、將骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞混合，經(jīng)誘導(dǎo)融合后的細(xì)胞不都是雜交瘤細(xì)胞，還有B細(xì)

胞自身融合的細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞自身融合的細(xì)胞等，D錯(cuò)誤。

故選D。

5.（2021年江蘇高考真題）植物組織培養(yǎng)技術(shù)常用于商業(yè)化生產(chǎn)：其過(guò)程一般為:無(wú)菌培養(yǎng)

物的建立一培養(yǎng)物增殖一生根培養(yǎng)一試管苗移栽及鑒定。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）

A.為獲得無(wú)菌培養(yǎng)物，外植體要消毒處理后才可接種培養(yǎng)

B.組織培養(yǎng)過(guò)程中也可無(wú)明顯愈傷組織形成，直接形成胚狀體等結(jié)構(gòu)

C.提高培養(yǎng)基中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比值，有利于誘導(dǎo)生根

D.用同一植株體細(xì)胞離體培養(yǎng)獲得的再生苗不會(huì)出現(xiàn)變異

【答案】D

【解析】

【分析】

1、離體的植物組織或細(xì)胞，在培養(yǎng)一段時(shí)間后，會(huì)通過(guò)細(xì)胞分裂形成愈傷組織。愈傷組織

的細(xì)胞排列疏松而無(wú)規(guī)則，是一種高度液泡化的呈無(wú)定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。由高度分化的植

物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過(guò)程，稱(chēng)為植物細(xì)胞的脫分化。脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)

行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官，這個(gè)過(guò)程叫做再分化。再分化形成的試管苗，移

栽到地里，可以發(fā)育成完整的植株體。

2、植物組織培養(yǎng)中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素使用比例對(duì)植物細(xì)胞發(fā)育的影響：生長(zhǎng)素用量比細(xì)

胞分裂素用量，比值高時(shí)，有利于根的分化、抑制芽的形成；比值低時(shí)，有利于芽的分化、

抑制根的形成。比值適中時(shí)，促進(jìn)愈傷組織的形成。

【詳解】

A、植物組織培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)注意無(wú)菌操作，為獲得無(wú)菌培養(yǎng)物，外植體要經(jīng)過(guò)表面消毒處理

后，才能進(jìn)行培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基必須徹底滅菌，A正確；

B、組織培養(yǎng)過(guò)程中也可無(wú)明顯愈傷組織形成，直接形成胚狀體等結(jié)構(gòu)，胚狀體若包裹上人

工種皮，可制作成人工種子，B正確；

C、生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比值高時(shí)，有利于根的分化、抑制芽的形成，因此提高培養(yǎng)基中

生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比值，有利于誘導(dǎo)生根，C1E確；

D、用同一植株體細(xì)胞離體培養(yǎng)獲得的再生苗會(huì)出現(xiàn)變異，如在愈傷組織的培養(yǎng)過(guò)程中可能

發(fā)生基因突變等變異，D錯(cuò)誤。

故選D。

6.（2021年湖北高考真題）某實(shí)驗(yàn)利用PCR技術(shù)獲取目的基因，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示除目的基因

條帶（引物與模板完全配對(duì)）外，還有2條非特異條帶（引物和模板不完全配對(duì)）。為了減

少反應(yīng)非特異條帶的產(chǎn)生，以下措施中有效的是（）

A.增加模板DNA的量B.延長(zhǎng)熱變性的時(shí)間

C.延長(zhǎng)延伸的時(shí)間D.提高復(fù)性的溫度

【答案】D

【解析】

【分析】

多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是一種體外迅速擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)，PCR過(guò)程一般經(jīng)歷下述三

循環(huán)：95℃下使模板DNA變性、解鏈―55℃下復(fù)性（引物與DNA模板鏈結(jié)合）-72℃下

引物鏈延伸（形成新的脫氧核甘酸鏈）。

【詳解】

A、增加模板DNA的量可以提高反應(yīng)速度，但不能有效減少非特異性條帶，A錯(cuò)誤；

BC、延長(zhǎng)熱變性的時(shí)間和延長(zhǎng)延伸的時(shí)間會(huì)影響變性延伸過(guò)程，但對(duì)于延伸中的配對(duì)影響

不大，故不能有效減少反應(yīng)非特異性條帶，BC錯(cuò)誤；

D、非特異性產(chǎn)物增加的原因可能是復(fù)性溫度過(guò)低會(huì)造成引物與模板的結(jié)合位點(diǎn)增加，故可

通過(guò)提高復(fù)性的溫度來(lái)減少反應(yīng)非特異性條帶的產(chǎn)生，D正確。

故選D。

7.（2021年湖北高考真題）限制性內(nèi)切酶EcoRI識(shí)別并切割5-"AU【C-3雙鏈DNA,

3,-CTTAAG-5,

t

用EcoRI完全酶切果蠅基因組DNA,理論上得到DNA片段的平均長(zhǎng)度（堿基對(duì)）約為

()

A.6B.250C.4000D.24000

【答案】C

【解析】

【分析】

限制性核酸內(nèi)切酶能識(shí)別特定的DNA序列，切割特定的位點(diǎn)，在特定的堿基之間切割磷酸

二酯鍵。

【詳解】

據(jù)圖可知，EcoRI的酶切位點(diǎn)有6個(gè)堿基對(duì)，由于DNA分子的堿基組成為A、T、G、C,

則某一位點(diǎn)出現(xiàn)該序列的概率為1/4x1/4x1/4x1/4x1/4x1/4=1/4096,即4096=4000個(gè)堿基對(duì)

可能出現(xiàn)?個(gè)限制酶EcoRI的前切位點(diǎn)，故理論上得到DNA片段的平均長(zhǎng)度（堿基對(duì)）約

為4000。C符合題意。

故選C。

8.（2021年湖北高考真題）月季在我國(guó)享有“花中皇后”的美譽(yù)。為了建立月季某新品種的

快速繁殖體系，以芽體為外植體，在MS培養(yǎng)基中添加不同濃度的6-BA和IBA進(jìn)行芽體增

殖實(shí)驗(yàn)，芽分化率（％）結(jié)果如表。

IBA/(mg-L1)

6-BA/(mg-L1)

0.10.20.30.40.5

1.03163584941

2.04095766950

3.03775645441

4.02535313025

5.08211284

關(guān)于上述實(shí)驗(yàn)，下列敘述錯(cuò)誤的是（）

A.6-BA濃度大于4.OmgL“時(shí)，芽分化率明顯降低

B.6-BA與IBA的比例為10：1時(shí)芽分化率均高于其他比例

C.在培養(yǎng)基中同時(shí)添加適量的6-BA和IBA,可促進(jìn)芽分化

D.2.OmgLGBA和0.2mgLFBA是實(shí)驗(yàn)處理中芽分化的最佳組合

【答案】B

【解析】

【分析】

本實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑橐匝矿w為外植體，在MS培養(yǎng)基中添加不同濃度的6-BA和1BA進(jìn)行芽體增殖

實(shí)驗(yàn)，自變量為不同濃度的6-BA和IBA,因變量為芽分化率，據(jù)表分析可知，隨著6-BA

濃度增加，芽分化率先增加后減少，隨著IBA濃度增加，芽分化率先增加后減少，據(jù)此作

答。

【詳解】

A、據(jù)表可知,6-BA濃度為從4.0mgL"到5.0mgL”時(shí),芽分化率降低非常明顯，故6-BA

濃度大于4.Omg-L”時(shí)，芽分化率明顯降低，A正確；

B、據(jù)表可知，當(dāng)6-BA與IBA的比例為10：I時(shí)-，芽分化率為31%、95%、64%、30%、

4%

,因此6-BA與IBA的比例為10：1時(shí)，芽分化率不一定都高于其他比例，B錯(cuò)誤；

C、據(jù)表可知，6-BA與IBA的比例會(huì)影響芽的分化率，因此在培養(yǎng)基中同時(shí)添加適量的6-BA

和IBA,可促進(jìn)芽分化，C正確；

D、據(jù)表可知,芽分化率為95%是最高的，此時(shí)6-BA和IBA分別為2.0mg-L"、O.2mg-L',

是實(shí)驗(yàn)處理中芽分化的最佳組合，D正確。

故選B。

9.（2021年北京高考真題）社會(huì)上流傳著一些與生物有關(guān)的說(shuō)法，有些有一定的科學(xué)依據(jù),

有些違反生物學(xué)原理。以下說(shuō)法中有科學(xué)依據(jù)的是（）

A.長(zhǎng)時(shí)間燉煮會(huì)破壞食物中的一些維生素

B.轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉能殺死害蟲(chóng)就一定對(duì)人有毒

C.消毒液能殺菌，可用來(lái)清除人體內(nèi)新冠病毒

D.如果孩子的血型和父母都不一樣，肯定不是親生的

【答案】A

【解析】

【分析】

血型分為四種，即A,B,AB,Oo血型是指紅細(xì)胞上所含的抗原不同而言，紅細(xì)胞上只含

A抗原的稱(chēng)A型，含有B抗原的稱(chēng)B型，既有A抗原又有B抗原的稱(chēng)為AB型，既沒(méi)有A

抗原也沒(méi)有B抗原的稱(chēng)為O型。ABO血型受ABO三種基因控制，A基因控制A抗原產(chǎn)生,

B基因控制B抗原產(chǎn)生，O基因控制不產(chǎn)生A和B兩種抗原，而基因都是成對(duì)存在，控制

ABO血型的基因可有六種不同組合，即AA,AO,BB,BO,AB,00,而每個(gè)人只有其

中一對(duì)。

【詳解】

A、維生素會(huì)受到高溫破壞，加熱、光照、長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存等都會(huì)造成維生素的流失和分解，A

正確；

B、轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉對(duì)非靶標(biāo)生物無(wú)毒性，B錯(cuò)誤；

C、消毒液只能殺死表面的病毒細(xì)菌，但無(wú)法清除體內(nèi)的病毒，C錯(cuò)誤；

D、如果孩子的血型和父母都不一樣，也可能是親生的，如A型血和B型血的父母也可以

生出0型血的孩子，D錯(cuò)誤。

故選Ao

10.（2021.6月浙江高考真題）采用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)可將增強(qiáng)型綠色熒光蛋白

（EGFP）基因定點(diǎn)插入到受精卵的Y染色體上，獲得轉(zhuǎn)基因雄性小鼠。該轉(zhuǎn)基因小鼠與野

生型雌性小鼠交配，通過(guò)觀察熒光可確定早期胚胎的性別。下列操作錯(cuò)誤的是（）

A.基因編輯處理的受精卵在體外培養(yǎng)時(shí)，不同發(fā)育階段的胚胎需用不同成分的培養(yǎng)液

B.基因編輯處理的受精卵經(jīng)體外培養(yǎng)至2細(xì)胞期，須將其植入同期發(fā)情小鼠的子官，才可

獲得表達(dá)EGFP的小鼠

C.分離能表達(dá)EGFP的胚胎干細(xì)胞，通過(guò)核移植等技術(shù)可獲得大量的轉(zhuǎn)基因小鼠

D.通過(guò)觀察早期胚胎的熒光，能表達(dá)EGFP的即為雄性小鼠胚胎

【答案】B

【解析】

【分析】

分析題意可知，通過(guò)基因編輯技術(shù)將EGFP基因定點(diǎn)插入到受精卵的Y染色體上，使含有

該Y染色體的小鼠能夠發(fā)出綠色熒光，轉(zhuǎn)基因鼠將Y染色體傳遞給子代的雄性個(gè)體，通過(guò)

觀察熒光可確定早期胚胎的性別。

【詳解】

A、依據(jù)胚胎在不同發(fā)育階段對(duì)培養(yǎng)條件的特定需要，受精卵在體外培養(yǎng)時(shí)，不同發(fā)育階段

的胚胎需用不同成分的培養(yǎng)液，A正確；

B、基因編輯處理的受精卵一般經(jīng)體外培養(yǎng)至桑根胚或囊胚階段，進(jìn)行胚胎移植，可獲得表

達(dá)EGFP的小鼠，B錯(cuò)誤；

C、分離能表達(dá)EGFP的胚胎干細(xì)胞，通過(guò)核移植、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植等技術(shù)，可獲

得大量的轉(zhuǎn)基因小鼠，C正確：

D、由分析可知，通過(guò)基因編輯技術(shù)將Y染色體用綠色熒光蛋白基因標(biāo)記，通過(guò)觀察早期胚

胎的熒光，能表達(dá)EGFP的個(gè)體含有Y染色體，即為雄性小鼠胚胎，D正確。

故選B。

11.（2021年山東卷）粗提取DNA時(shí)，向雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸儲(chǔ)水并攪拌，過(guò)濾

后所得濾液進(jìn)行下列處理后再進(jìn)行過(guò)濾，在得到的濾液中加入特定試劑后容易提取出DNA

相對(duì)含量較高的白色絲狀物的處理方式是（）

A.加入適量的木瓜蛋白酶

B.37?40C的水浴箱中保溫10-15分鐘

C.加入與濾液體積相等的、體積分?jǐn)?shù)為95%的冷卻的酒精

D.加入NaCl調(diào)節(jié)濃度至2moi/L-＞過(guò)濾―調(diào)節(jié)濾液中NaCl濃度至0.14mol/L

【答案】A

【解析】

【分析】

DNA粗提取和鑒定的原理：（DDNA的溶解性：DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度NaCl

溶液中溶解度不同：DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精：DNA對(duì)酶、

高溫和洗滌劑的耐受性。（2）DNA的鑒定：在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會(huì)被染成藍(lán)

色。

【詳解】

A、木瓜蛋白酶可以水解DNA中的蛋白質(zhì)類(lèi)雜質(zhì)，由于酶具有專(zhuān)一性，不能水解DNA,過(guò)

濾后在得到的濾液中加入特定試劑后容易提取出DNA相對(duì)含量較高的白色絲狀物，A正

確：

B、37?40℃的水浴箱中保溫10~15分鐘不能去除濾液中的雜質(zhì)，應(yīng)該放在60~75℃的水

浴箱中保溫1。?15分鐘，使蛋白質(zhì)變性析出，B錯(cuò)誤；

C、向雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸儲(chǔ)水并攪拌，過(guò)濾后在得到的濾液中加入勺濾液體積相

等的、體積分?jǐn)?shù)為95%的冷卻的酒精，此時(shí)DNA析出，不會(huì)進(jìn)入濾液中，C錯(cuò)誤；

D、加入NaCl調(diào)節(jié)濃度至2moi/LT過(guò)濾-調(diào)節(jié)濾液中NaCl濃度至0.14moI/L,DNA

在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度小，DNA析出，不會(huì)進(jìn)入濾液中，D錯(cuò)誤。

故選A。

12.（2021年1月浙江卷）下圖為動(dòng)物成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程示意圖。下列敘述正確的是（）

①切取組織②制備細(xì)胞懸浮液③原代培養(yǎng)④傳代培養(yǎng)

A.步驟①的操作不需要在無(wú)菌環(huán)境中進(jìn)行

B.步驟②中用鹽酸溶解細(xì)胞間物質(zhì)使細(xì)胞分離

C.步驟③到④的分瓶操作前常用胰蛋白酶處理

D.步驟④培養(yǎng)過(guò)程中不會(huì)發(fā)生細(xì)胞轉(zhuǎn)化

【答案】C

【解析】

【分析】

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程:取動(dòng)物組織塊一剪碎組織一用胰蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞一制成細(xì)胞

懸液T轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中（原代培養(yǎng)）一放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)T貼滿瓶壁的細(xì)胞用酶分散為

單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液一轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液（傳代培養(yǎng)）一放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

【詳解】

A、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程需要無(wú)菌操作，故步驟①的操作需要在無(wú)菌環(huán)境中進(jìn)行，A錯(cuò)誤；

B、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程需要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理動(dòng)物組織，分散成單個(gè)細(xì)胞，制成

細(xì)胞懸液，B錯(cuò)誤；

C、傳代培養(yǎng)時(shí)需要用胰蛋白酶處理貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞，使之分散成單個(gè)細(xì)胞，再分瓶培養(yǎng)，

C正確；

D、步驟④為傳代培養(yǎng)過(guò)程，該過(guò)程中部分細(xì)胞可能發(fā)生細(xì)胞轉(zhuǎn)化，核型改變，D錯(cuò)誤。

故選Co

13.（2021遼寧高考真題）PHB2蛋白具有抑制細(xì)胞增殖的作用。為初步探究某動(dòng)物PHB2

蛋白抑制人宮頸癌細(xì)胞增殖的原因，研究者從基因數(shù)據(jù)庫(kù)中獲取了該蛋白的基因編碼序列

（簡(jiǎn)稱(chēng)phb2基因），大小為0.9kb（lkb=1（）00堿基對(duì)），利用大腸桿菌表達(dá)該蛋白?；卮?/p>

下列問(wèn)題：

（1）為獲取phb2基因，提取該動(dòng)物肝臟組織的總RNA,再經(jīng)__________過(guò)程得到cDNA,將

其作為PCR反應(yīng)的模板，并設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物來(lái)擴(kuò)增目的基因。

（2）圖1為所用載體圖譜示意圖，圖中限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)見(jiàn)下表。為使phb2基因

（該基因序列不含圖1中限制酶的識(shí)別序列）與載體正確連接，在擴(kuò)增的phb2基因兩端分

別引入和兩種不同限制酶的識(shí)別序列。經(jīng)過(guò)這兩種酶酶切的phb2基

因和載體進(jìn)行連接時(shí)，可選用（填“E.coliDNA連接酶”或“T&DNA連接酶”）。

Hmdm

Pvit2

BajriHI啟動(dòng)子

兼外青毒素、,EcoRI

抗性基因終止子

PstI

制原點(diǎn)

KpnI

圖1

相關(guān)限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)

名稱(chēng)識(shí)別序列及切割位點(diǎn)名稱(chēng)識(shí)別序列及切割位點(diǎn)

HindlllA；AGCTTTTCGA|AEcoRIG；AATTCCTTAAtG

PvitIICAG|CTGGTCtGACPstICTGCjAGGATCGTC

KpnlGJGTACCCCATGTGBamHIGJGATCCCCTAGfG

注：箭頭表示切割位點(diǎn)

（3）轉(zhuǎn)化前需用CaCL處理大腸桿菌細(xì)胞，使其處于的生理狀態(tài)，以提高轉(zhuǎn)化效率。

（4）將轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌接種在含氨節(jié)青霉素的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，隨機(jī)挑取菌落（分別編

號(hào)為1、2、3、4）培養(yǎng)并提取質(zhì)粒，用（2）中選用的兩種限制酶進(jìn)行酶切，酶切產(chǎn)物經(jīng)電

分離，結(jié)果如圖2,號(hào)菌落的質(zhì)粒很可能是含目的基因的重組質(zhì)粒。

M234

樣

占

,吼

7

6kb

kb

4kb

kb

2kb

1

0.2kb

圖2

注：M為指示分子大小的標(biāo)準(zhǔn)參照物；小于0.2kb的DNA分子條帶未出現(xiàn)在圖中

⑸將純化得到的PHB2蛋白以一定濃度添加到人宮頸癌細(xì)胞培養(yǎng)液中，培養(yǎng)24小時(shí)后，檢

測(cè)處于細(xì)胞周期（示意圖見(jiàn)圖3）不同時(shí)期的細(xì)胞數(shù)量，統(tǒng)計(jì)結(jié)果如圖4。分析該蛋白抑制

人宮頸癌細(xì)胞增殖可能的原因是將細(xì)胞阻滯在細(xì)胞周期的（填“GL或"S”或

“G2/M"）期。

注：間期包括Gi期、S期和G：期

【答案】(1)逆轉(zhuǎn)錄

(2)EcoRIPvitIIT4DNA連接前

(3)感受態(tài)

(4)3

(5)G2/M

【解析】

【分析】

分析圖中質(zhì)粒含有多個(gè)限制成切位點(diǎn)，在啟動(dòng)子和終止子之間有三個(gè)能切位點(diǎn)，Kpnl在質(zhì)

粒上有兩個(gè)酶切位點(diǎn)，PvitH酶切后獲得平末端。

圖4中Gi期和S期細(xì)胞減少，而G2期細(xì)胞數(shù)目明顯增多。

將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞：Ca?+處理法。

(1)

利用RNA獲得cDNA的過(guò)程稱(chēng)為逆轉(zhuǎn)錄。

⑵

根據(jù)啟動(dòng)子和終止子的生理作用可知，目的基因應(yīng)導(dǎo)入啟動(dòng)子和終止子之間.圖中看出，兩

者之間存在于三種限制酶切點(diǎn)，但是山于Kpnl在質(zhì)粒上不止一個(gè)酶切位點(diǎn)，所以應(yīng)該選擇

EcoRI和PvitH兩種不同限制前的識(shí)別序列；根據(jù)PvitI［的酉句切序列，切出了平末端，所以

構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)該用T&DNA連接酶連接質(zhì)粒和目的基因。

(3)

轉(zhuǎn)化時(shí)用CaCb處理大腸桿菌細(xì)胞，使其處于感受態(tài)的生理狀態(tài)，以提高轉(zhuǎn)化效率。

(4)

山于這些菌落都可以生長(zhǎng)在含有氨芳青霉素的培養(yǎng)基中，因此都含有質(zhì)粒，重組質(zhì)粒包含了

目的基因和質(zhì)粒，如果用EcoRI和PvitH兩種酶切割重組質(zhì)粒電泳后將獲得含有質(zhì)粒和目的

基因兩條條帶，由于phb2基因大小為0.9kb,所以對(duì)應(yīng)電泳圖是菌落3。

(5)

比較圖4中Gi期和S期細(xì)胞減少，而G2期細(xì)胞數(shù)目明顯增多，說(shuō)明了Gi期和S期細(xì)胞可

以進(jìn)入G2期,而G，期的細(xì)胞沒(méi)有能夠完成分裂進(jìn)入GI期,因此PHB2蛋白應(yīng)該作用于G2/M

期。

【點(diǎn)睛】

本題考察基因工程的知識(shí)，需要考生分析質(zhì)粒的酶切位點(diǎn)，結(jié)合目的基因轉(zhuǎn)入的位置進(jìn)行分

析，結(jié)合題干中目的基因的大小分析電泳圖。

14.(2021年江蘇高考真題)某小組為研究真菌基因m的功能，構(gòu)建了融合表達(dá)蛋白M和

tag標(biāo)簽的質(zhì)粒，請(qǐng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)流程回答下列問(wèn)題：

上游同源序列下游同源序列

5,-GGATTCTAG4-ACTACTOGAr^CCCCCC：'Gi^AAAATrrATATTrrC.4.AG<}TCAAT-3,

31CCTAAGATCTtTGATCACCTAGCGGGGGd：CCCCTTTTAAATATAAAA1GTTCCAGTTA5

經(jīng)里演壩

添加同源序列的m

酬母笫選標(biāo)記基因，缺失該