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DB34DB34/T2813—2017梨炭疽病菌檢疫鑒定方法DetectionandidentificationofColletotrichumgloeosporioidesPenz.2017-03-30發(fā)布2017-04-30實(shí)施安徽省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I1GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)分類地位：真菌界（Fungi黑盤(pán)孢目（Melanconiales）,黑盤(pán)孢科（Melanconiace菌屬（Colletotrichum其有性階段為圍小叢殼（G根據(jù)梨炭疽病菌在寄主上的為害癥狀（參見(jiàn)附錄A），培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落、菌絲、分生孢子和分5.2.1除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純或生化試劑，實(shí)驗(yàn)用水20mmol/LEDTA-Na2蛋白酶5.2.4PCR試劑：10×PCRbuff），2在25℃~30℃,12h黑暗/12h光照（12h光暗交替）條件下培養(yǎng)，第3d開(kāi)始觀察，根據(jù)組織周殼暗褐色，燒瓶狀，直徑為85μm～300μm；子囊長(zhǎng)棍棒形，平行排列于子囊殼內(nèi)，大小為55μm~從檢測(cè)樣品中分離并鑒定為梨炭疽病菌的菌株，應(yīng)妥善保存。將菌株接種PDA培養(yǎng)基斜面上，25℃~30℃培養(yǎng)5d，然后4℃冰箱保存，或?qū)⒕z塊轉(zhuǎn)入20％滅菌甘油并混勻，-80℃長(zhǎng)期保存。345C.1.1.3加入等體積的苯酚：氯仿：異戊醇(25：24：1)溶液，顛倒混勻，12000rpm離心C.1.1.6棄上清液，室溫倒置于吸ACCTTTGAGGGCCTACATCAG-3'，預(yù)期擴(kuò)增產(chǎn)物為329bp。PCR反應(yīng)程序?yàn)?4℃PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系見(jiàn)表C.1。PCRbuffer(含25mmol/L

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