1.2.2微生物的選擇培養(yǎng)與計數(shù)課件高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修3

1.2.2微生物的選擇培養(yǎng)與計數(shù)課題背景自然界中微生物數(shù)量繁多，種類龐雜，要想從中分離出需要的特定微生物并不容易，尤其當(dāng)要分離的微生物在混合菌群中不是優(yōu)勢種群時，更難實現(xiàn)。稀釋涂布平板法呈現(xiàn)的雜菌群那么我們又如何達(dá)成這一目標(biāo)呢？科學(xué)家們應(yīng)用選擇性培養(yǎng)基解決了這一難題。二、微生物的選擇培養(yǎng)1.方法:對樣品進(jìn)行充分稀釋,然后將_____涂布到制備好的_____培養(yǎng)基上。2.稀釋涂布平板法的操作過程:(1)_________稀釋操作:菌液選擇系列梯度(2)涂布平板操作。①取菌液:取______菌液,添加到___________。

②涂布器滅菌:取出浸在_____中的涂布器,放在_____上燃燒,酒精燃盡后,_____涂布器。③涂布過程:用涂布器將菌液_____地涂布在培養(yǎng)基表面,涂布時可_____培養(yǎng)皿,使菌液分布_____。3.培養(yǎng):待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后,將平板_____,放入___________中培養(yǎng),觀察。0.1mL培養(yǎng)基表面酒精火焰冷卻均勻轉(zhuǎn)動均勻倒置恒溫培養(yǎng)箱

【激疑】在進(jìn)行稀釋操作時,需要在酒精燈火焰附近操作嗎?解釋原因。提示:需要。在進(jìn)行稀釋操作時,如果不在酒精燈火焰附近進(jìn)行,就有可能造成雜菌污染。核心點二、微生物的選擇培養(yǎng)如果想知道1g土壤中有多少能分解尿素的細(xì)菌，可以如何操作？2、實驗的具體操作：

1、稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。對土壤菌液進(jìn)行稀釋及科學(xué)的微生物數(shù)量測定方法---稀釋涂布平板法。1.梯度稀釋①鏟取土樣，將樣品裝入紙袋中1ⅹ101ⅹ1071ⅹ1061ⅹ1031ⅹ1021ⅹ1041mL1mL1mL1mL1mL1ⅹ105注意：取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的紙袋在使用前都要滅菌②將10g土樣加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中，充分搖勻，制成菌液。取1mL上清液加入盛有9mL無菌水的試管中，依次等比稀釋。90mL無菌水9mL無菌水1mL稀釋涂布平板法操作過程③取0.1mL菌液，滴加到培養(yǎng)基表面。④將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。⑤將涂布器放在火焰上灼燒，待酒精燃盡、涂布器冷卻后，再進(jìn)行涂布。⑥用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使涂布均勻。注意：各濃度分別涂布3個平板（重復(fù)實驗）注意：多余的酒精在燒杯中滴盡，然后再放在火焰上灼燒。2.涂布平板1071061031021041mL1mL1mL1mL9mL無菌水1mL1051.梯度稀釋移液槍稀釋涂布平板法操作過程1、將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中滴2、取少量稀釋液（不超過0.1ml

），滴加到培養(yǎng)基表面灼3、將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8-10s。涂4、用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使涂布均勻各梯度分別涂布3個平板1個不涂布作空白對照浸3.取樣涂布平板：主要方法稀釋涂布平板法平板劃線法主要步驟系列梯度稀釋操作和涂布平板操作接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線接種工具涂布器接種環(huán)菌體獲取從適宜稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體在具有顯著的菌落特征的區(qū)域挑取菌體能否用于計數(shù)可以計數(shù)不能計數(shù)共同點都能將微生物分散到固體培養(yǎng)基表面，以獲得單細(xì)胞菌落，達(dá)到分離純化微生物的目的，也可以觀察菌落特征。知識歸納比較稀釋涂布平板法和平板劃線法核心點三、微生物的數(shù)量測定顯微鏡直接計數(shù)法：①原理：利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板，在顯微鏡下觀察、計數(shù)，然后再計算一定體積的樣品中微生物的數(shù)量。②方法：用計數(shù)板計算。③計算公式：每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)＝每小格平均細(xì)菌數(shù)x400x103x稀釋倍數(shù)。④缺點：不能區(qū)分死菌與活菌，造成統(tǒng)計值比實際值偏大。1.統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法：間接計數(shù)法（活菌計數(shù)法）①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個單菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。②操作注意事項：a.設(shè)置重復(fù)組，增強實驗的說服力與準(zhǔn)確性。b.為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計數(shù)。③計算公式：每毫升樣品中的菌株數(shù)=(C÷V)xM,其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL)，M代表稀釋倍數(shù)。④缺點：當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，造成統(tǒng)計值比實際值偏小。1.如表所示為某微生物培養(yǎng)基的配方。下列說法中不正確的是()成分NaNO3K2HPO4KClMgSO4·7H2O含量3g1g0.5g0.5g成分FeSO4（CH2O）H2O青霉素含量0.01g30g定容至1000mL0.1萬單位A.此培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基，其中的碳源是（CH2O）B.配制培養(yǎng)基時，溶化后必須要進(jìn)行的是調(diào)整pH和滅菌C.接種時應(yīng)在酒精燈火焰附近操作D.若用該培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)纖維素分解菌，應(yīng)除去青霉素，加入纖維素粉課堂練習(xí)D2.下圖是研究人員從紅棕壤中篩選高效分解尿素細(xì)菌的示意圖,有關(guān)敘述錯誤的是()A.在配制步驟②、③的培養(yǎng)基時,應(yīng)先調(diào)pH值后高壓蒸汽滅菌B.步驟③純化分解尿素的原理是將聚集的細(xì)菌分散,可以獲得單細(xì)胞菌落C.步驟③采用涂布平板法接種,并需向牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入尿素D.步驟④挑?、壑胁煌N的菌落分別接種,比較細(xì)菌分解尿素的能力C3.下列與纖維素分解菌及其分離實驗的有關(guān)說法，錯誤的是()A.纖維素酶至少包括三種組分：C1酶、CX酶、葡萄糖苷酶B.正確的操作流程：土壤取樣→選擇培養(yǎng)→梯度稀釋→挑選菌落C.剛果紅可與纖維素形成透明復(fù)合物，所以可通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌D.通過定時測定葡萄糖產(chǎn)量的變化來衡量纖維素分解菌培養(yǎng)液中纖維素酶產(chǎn)量C課堂小結(jié)微生物的數(shù)量測定選擇培養(yǎng)基的作用微生物選擇培養(yǎng)獲取純培養(yǎng)物的方法-稀釋涂布平板法微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)科學(xué)實例篩