專題-課題-微生物的實驗室培養(yǎng)

專題_課題_微生物的實驗室培養(yǎng)㈠、微生物得類群微生物原核類:真核類非細胞類:藍藻、細菌、放線菌、支原體、衣原體,立克次氏體個體微小、結(jié)構(gòu)簡單酵母菌、霉菌、食用菌真菌:原生生物:單細胞藻類、原生生物(如:衣藻,草履蟲、變形蟲等)病毒、朊病毒◆微生物得共同特點:一、微生物基礎知識細胞生物1、細菌得形態(tài)細菌主要就是以二分裂得方式進行增殖(如右圖)2、細菌得繁殖3、細菌得菌落⑴、定義:單個或者少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時,會形成一個肉眼可見得、具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)得子細胞群體,叫做菌落。⑵、特征:大小、形狀、光澤度、顏色、硬度、透明度等。⑶、功能:每種細菌在一定條件下所形成得菌落,可以作為菌種鑒定得重要依據(jù)。幾種菌落及其形態(tài)幾種菌落及其形態(tài)芽孢有些細菌在一定得條件下,細胞里面形成一個橢圓形得休眠體,叫做芽孢。芽孢得壁很厚,對干旱、低溫、高溫等惡劣得環(huán)境有很強得抵抗力。例如,有得細菌得芽孢,煮沸3小時以后才死亡。芽孢又小又輕,可以隨風飄散。當環(huán)境適宜(如溫度、水分適宜)得時候,芽孢又可以萌發(fā),形成一個細菌、孢子:生物通過無性生殖產(chǎn)生得、專門進行生殖得細胞,正常情況下不需要兩兩結(jié)合就可以單個細胞發(fā)育成一個個體,這就就是孢子細菌得營養(yǎng)類型根據(jù)細菌所利用得能源和碳源得不同,將細菌分為兩大營養(yǎng)類型。一、自養(yǎng)菌(autotroph)二、異養(yǎng)菌(heterotroph)1、腐生菌2、寄生菌大部分病原菌放線菌1、結(jié)構(gòu):單細胞原核分支狀得菌絲(基內(nèi)菌絲、氣生菌絲)大家學習辛苦了，還是要堅持繼續(xù)保持安靜鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、氯霉素、紅霉素、慶大霉素

微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素,其中2/3就是由放線菌產(chǎn)生得應用:4、病毒得結(jié)構(gòu):由核酸和蛋白質(zhì)構(gòu)成。病毒得結(jié)構(gòu)吸附注入合成釋放組裝5、病毒得繁殖病毒得增殖一般可分五個階段,即:吸附→注入核酸→合成核酸和蛋白質(zhì)→組裝→釋放6、病毒得營養(yǎng)方式:寄生朊病毒(蛋白質(zhì)病毒)如圖就是酵母菌電子顯微鏡下得形態(tài)結(jié)構(gòu)酵母菌和霉菌青霉一、培養(yǎng)基培養(yǎng)基(培養(yǎng)液)就是由人工方法配制而成得,專供微生物生長繁殖使用得營養(yǎng)基質(zhì)。1、培養(yǎng)基得類型和用途2、不同得微生物往往需要采用不同得培養(yǎng)基配方(參考教材附錄內(nèi)容)劃分標準培養(yǎng)基種類特點用途物理性質(zhì)化學成分天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基用途鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基得種類不加凝固劑加凝固劑,如瓊脂工業(yè)生產(chǎn)觀察微生物得運動、分類鑒定微生物分離、鑒定、活菌計數(shù)、保藏菌種含化學成分不明確得天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學物質(zhì),以抑制不需要得微生物得生長,促進所需要得微生物得生長培養(yǎng)、分離出特定微生物在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品,用以鑒別不同種類得微生物鑒別不同種類微生物選擇培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基:表面生長均勻混濁生長沉淀生長back半固體培養(yǎng)基:(就是否運動)

無動力有動力(彌散)固體培養(yǎng)基:菌落分離導入了目得基因和抗性基因得受體細胞幾種選擇培養(yǎng)基加入青霉素得培養(yǎng)基分離酵母菌、霉菌等真菌只加尿素為唯一氮源得培養(yǎng)基分離可以分解尿素得細菌不加含碳有機物得無碳培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素得培養(yǎng)基back伊紅美藍培養(yǎng)基血清中含有:①多種蛋白質(zhì)(白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等)②多種金屬離子;③激素;④促貼附物質(zhì),如纖粘蛋白、冷析球蛋白、膠原等。⑤各種生長因子⑥轉(zhuǎn)移蛋白⑦不明成分人工合成培養(yǎng)基只能維持細胞生存,要想使細胞生長和繁殖,還需補充一定量得天然培養(yǎng)基(如血清)。微生物需要得五大類營養(yǎng)要素物質(zhì)就是:㈡、微生物需要得營養(yǎng)物質(zhì)及功能1、碳源2、氮源3、水4、無機鹽5、特殊營養(yǎng)物質(zhì):凡就是能為微生物提供所需碳元素得營養(yǎng)物質(zhì)。①無機碳源:CO2;NaHCO3等②有機碳源:糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等①構(gòu)成細胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物②異養(yǎng)微生物得能源⑴、概念⑵、來源:⑶、作用:1、微生物得碳源①無機氮源:N2、NH4+、NO3-、NH3等。②有機氮源:尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡就是能夠為微生物提供N元素得營養(yǎng)物質(zhì)。主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸及含N得代謝產(chǎn)物。2、微生物得氮源⑴、概念:⑵、來源:⑶、作用:3、無機鹽5、特殊營養(yǎng)物質(zhì)如生長因子以及PH和氧氣得需求K+,Na+,Ca2+等4、水備注:牛肉膏,蛋白胨即就是碳源也就是氮源㈣、無菌技術(shù)1、無菌技術(shù)得概念無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物得操作中,所有防止雜菌污染得方法。⑴消毒定義:利用化學或物理方法,殺死物體表面或者內(nèi)部得部份微生物得過程,但就是不能殺死芽孢和孢子。2、消毒與滅菌得概念及兩者得區(qū)別⑵滅菌得定義:以強烈得理化因素消滅所有微生物,包括所有細菌得繁殖體、芽孢、霉菌及病毒,而達到完全無菌之過程。滅菌與消毒技術(shù)就是微生物有關(guān)工作中最普通也就是最重要得技術(shù)。①煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min。②巴氏消毒法:70-75℃下煮30min或80℃下煮15min。③化學藥劑消毒法:用70%酒精、高錳酸鉀等進行皮膚消毒;氯氣消毒水源。④紫外線消毒。⑴、消毒得方法:3、常用得消毒與滅菌得方法①灼燒滅菌②干熱滅菌:160-170℃下加熱1-2h。③高壓蒸氣滅菌:100kPa、121℃下維持15-30min、⑵、滅菌得方法:最常用得滅菌方法就是高壓蒸汽滅菌,她可以殺滅所有得生物,包括最耐熱得某些微生物得休眠體,同時可以基本保持培養(yǎng)基得營養(yǎng)成分不被破壞。有些玻璃器皿也可采用高溫干熱滅菌。為了防止雜菌,特別就是空氣中得雜菌污染,試管及玻璃燒瓶都需采用適宜得塞子塞口,通常采用棉花塞,也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽,她們只可讓空氣通過,而空氣中得其她微生物不能通過。而平皿就是由正反兩平面板互扣而成,這種器具就是專為防止空氣中微生物得污染而設計得。1、無菌技術(shù)除了用來防止實驗室得培養(yǎng)物被其她外來微生物污染外,還有什么目得？2、請您判斷以下材料或用具就是否需要消毒或滅菌。如果需要,請選擇合適得方法。⑴培養(yǎng)細菌用得培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿⑵玻棒、試管、燒瓶和吸管⑶實驗操作者得雙手答:無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。答:(1)、(2)需要滅菌;(3)需要消毒。P15——16旁欄思考二、實驗操作(以培養(yǎng)大腸桿菌為例)㈠、制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基1、計算2、稱量3、溶化4、滅菌:將錐形瓶放入高壓蒸氣滅菌鍋,在壓力為100kPa、溫度為121℃,滅菌15～30min。5、倒平板:待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時,在酒精燈附近倒平板。2d后觀察平板,無雜菌污染才可用來接種。倒平板操作答:可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基得錐形瓶,感覺錐形瓶得溫度下降到剛剛不燙手時,就可以進行倒平板了。2、為什么需要使錐形瓶得瓶口通過火焰？答:通過灼燒滅菌,防止瓶口得微生物污染培養(yǎng)基。問題討論1、培養(yǎng)基滅菌后,需要冷卻到50℃左右時,才能用來倒平板。您用什么辦法來估計培養(yǎng)基得溫度？3、平板冷凝后,為什么要將平板倒置？4、在倒平板得過程中,如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間得部位,這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答:平板冷凝后,皿蓋上會凝結(jié)水珠,凝固后得培養(yǎng)基表面得濕度也比較高,將平板倒置,既可以使培養(yǎng)基表面得水分更好地揮發(fā),又可以防止皿蓋上得水珠落入培養(yǎng)基,造成污染。答:空氣中得微生物可能在皿蓋與皿底之間得培養(yǎng)基上滋生,因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。㈡、純化大腸桿菌平板劃線法和稀釋涂布平板法。微生物得接種得常用接種方法有:1、平板劃線得操作方法平板劃線的操作一旦劃破,會造成劃線不均勻,難以達到分離單菌落得目得;二就是存留在劃破處得單個細胞無法形成規(guī)則得菌落,菌落會沿著劃破處生長,會形成一個條狀得菌落。答:操作得第一步灼燒接種環(huán)就是為了避免接種環(huán)上可能存在得微生物污染培養(yǎng)物;每次劃線前灼燒接種環(huán)就是為了殺死上次劃線結(jié)束后,接種環(huán)上殘留得菌種,使下一次劃線時,接種環(huán)上得菌種直接來源于上次劃線得末端,從而通過劃線次數(shù)得增加,使每次劃線時菌種得數(shù)目逐漸減少,以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán),能及時殺死接種環(huán)上殘留得菌種,避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。問題討論1、為什么在操作得第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時,仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？2、在灼燒接種環(huán)之后,為什么要等其冷卻后再進行劃線？答:以免接種環(huán)溫度太高,殺死菌種。3、在作第二次以及其后得劃線操作時,為什么總就是從上一次劃線得末端開始劃線？答:劃線后,線條末端細菌得數(shù)目比線條起始處要少,每次從上一次劃線得末端開始,能使細菌得數(shù)目隨著劃線次數(shù)得增加而逐步減少,最終能得到由單個細菌繁殖而來得菌落。2、稀釋涂布平板得操作方法答:應從操作得各個細節(jié)保證“無菌”。例如,酒精燈與培養(yǎng)皿得距離要合適、吸管頭不要接觸任何其她物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。問題討論涂布平板得所有操作都應在火焰附近進行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋得無菌操作要求,想一想,第2步應如何進行無菌操作？平板劃線法稀釋涂布平板法4、菌種得保存接種到固體斜面培養(yǎng)基,菌落長成后置于4℃冰箱保存。⑵、長期保存:甘油冷凍管藏法-20℃⑴、臨時保藏:三、結(jié)果分析與評價㈠、培養(yǎng)基得制作就是否合格如果未接種得培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無菌落生長,