常規(guī)組織病理技術(shù)

常規(guī)組織病理技術(shù)

寧波明州醫(yī)院病理科主講人：周曉龍2016年2月3號病理標本的接收病理標本的接收是在取材、固定組織前首先要做的第一步工作，它是臨床與病理科交接的一個重要環(huán)節(jié)，它為開展病理學檢查、病理檔案的保存奠定了基礎(chǔ)。

1．首先核對病理申請單與標本上的紅色號碼是否一致。

2．核查病理申請單上寫明的送檢標本及數(shù)目是否與實際送檢標本一致。

3．觀察送檢標本的大小及固定液比例是否合適。

(1)穿刺活檢及纖支鏡所取的小標本，4％中性甲醛(10％中性福爾馬林)固定組織的量應在6～10倍。

(2)對于較大的手術(shù)切除標本，應及時切開固定；核對后將病理申請單和標本編上病理標本號。

4．將病人姓名、性別、年齡、病歷號、科別、臨床診斷、部位、標本來源、標本例數(shù)等逐項錄入電腦存儲。

5．作為病理資料不僅要做好計算機錄入工作，還須進行文字登記，以便病理檔案長期保存。常規(guī)石蠟切片制作程序組織固定取材固定脫水

透明浸臘包埋切片染色封片

顯微鏡觀察

一固定1.組織固定的意義①防止組織細胞自溶和腐?、诒３纸M織細胞正常生活時的形態(tài)結(jié)構(gòu)③沉淀和凝固各種物質(zhì),硬化組織便于制片和染色后的觀察2.固定的注意事項①一般應在離體30分鐘內(nèi)固定,越及時越好,并將組織上的血液,分泌物沖洗干凈②固定劑的量一般不少于組織塊總體積的4倍以上③固定的時間應視組織的不同和大小決定,一般小組織4-6小時,大組織18-24小時或更長④有特殊要求的須用特殊的固定劑⑤不同組織在固定時應注意特殊的處理方法3.常用的固定劑①甲醛(10%福爾馬林)甲醛100ml水900ml②中性甲醛甲醛100mlNa2HPO46.5gNaH2PO4H2O4g蒸餾水至900ml

③乙醇-甲醛(AF液)甲醛100ml95%乙醇850ml冰醋酸50ml④其他

4%多聚甲醛:多聚甲醛4g,加蒸餾水50ml,加熱至60度,攪拌加入1mol/LNaoH數(shù)滴,直至溶液變清,冷卻后用0.1mol/LPBS(PH7.4)加至100ml.Carnoy氏液(糖原,DNA,RNA,尼氏小體固定用,小組織20-40分鐘,不超過3-4小時)冰醋酸10ml氯仿30ml無水乙醇60ml

二取材1.外科的活體組織取材①臨床手術(shù)取材(大標本)注意腫瘤的部位形狀大小顏色及周邊組織的關(guān)系,有無完整包膜,測量體積,包括長度寬度高度.手術(shù)大標本必須進行預取材預固定.②活體小組織(小標本)組織標本體積小,在取材時應特別小心,用伊紅讓標本著色,并用插鏡紙包裹,以防丟失,應標明粒數(shù).多瓶組織應將附號標清楚.組織塊的面積通常為2.0

cmX

1.5cm，厚度不超過3.0mm。太大太厚的組織塊常會固定不充分，而影響脫水和制片。組織塊的數(shù)量依具體情況而定，一般以滿足診斷和相關(guān)研究需要為準。

三脫水脫水的目的:組織最終將包埋在石蠟中,才能進行切片,為達到這一目的,首先須將組織內(nèi)的水分置換出來,以利于透明劑滲入,這一過程為脫水.(一般情況下,應將大小標本分別脫水.標本脫水從低濃度開始,一般人標本從70%或75%乙醇,動物標本從50%乙醇開始)脫水方法及注意事項:常用試劑為乙醇,某些情況下用丙酮.快速石蠟切片常用丙酮為脫水劑,尸體解剖標本一般在無水乙醇后加丙酮因為脫水劑的新舊影響脫水時間,必須靈活掌握,根據(jù)本實驗室情況,定時更換脫水劑.四透明

透明的目的:因為大多數(shù)脫水劑不能和石蠟相混合,組織內(nèi)的水份脫干凈后,必須通過透明劑的作用,才能便于浸蠟包埋.常用透明劑種類及注意事項:二甲苯、甲苯、松節(jié)油、苯透明要注意的關(guān)鍵是時間,透明時間不夠,石蠟不能完全進入組織,影響到包埋切片.但是如果透明過度,組織發(fā)硬發(fā)脆影響切片質(zhì)量.特別是肝脾等組織.

五浸蠟

目的和注意事項組織經(jīng)過透明后要浸入石蠟(火棉膠碳蠟明膠)內(nèi),目的是去除組織中的透明劑(二甲苯)而代之以石蠟,并滲入組織內(nèi)部,把軟組織變?yōu)橛羞m當?shù)挠捕?以利切片.一般浸蠟須經(jīng)過2到3次,石蠟的溶點為56-58度左右,目前常用的脫水機上是兩個蠟缸.浸蠟時要注意掌握好石蠟的溫度和浸蠟的時間

六包埋

注意事項:控制好包埋用石蠟的溫度和組織塊的溫度,注意組織塊包埋的方向,切面朝下,組織應盡量平整.蠟塊冷卻后將組織外圍的石蠟進行修整,以便利于連續(xù)切片.

七切片

1.準備工作:清洗干凈的玻片恒溫烤片箱毛筆眼科彎鑷染片架鋒利的切片刀、石蠟塊預先冷卻2.注意事項:

①熟練掌握切片機的性能②展片箱的水溫控制在45度左右③固定好蠟塊和切片刀④切片附貼好后,放入65-70度烤箱中烤片20-30分鐘

八染色

目的:將組織切片浸入染色劑內(nèi),使組織或細胞等成分染上不同的顏色產(chǎn)生不同的折射,以便在光學顯微鏡下觀察..

HE染色：蘇木素-伊紅染色HE染色是石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一。其原理為蘇木精染液為堿性，主要使細胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍色；伊紅為酸性染料，主要使細胞質(zhì)和細胞外基質(zhì)中的成分著紅色。步驟:1.將切好的組織切片經(jīng)烤片后入二甲苯ⅠⅡ脫蠟各約10分鐘左右,然后入無水乙醇洗去二甲苯,約1-2分鐘,依次入95%乙醇,80%乙醇70%乙醇至自來水,蒸餾水.2.將切片浸入配置好的蘇木素液內(nèi)5-10分鐘左右,自來水洗1分鐘,75%鹽酸乙醇分化約30秒,返藍1-2分鐘自來水洗5-10分鐘3.95%乙醇1分鐘后入酸化的伊紅10秒至1分鐘,入95%乙醇ⅠⅡ各1分鐘無水乙醇ⅠⅡ各1分鐘,電吹風吹干.

染色結(jié)果:胞核呈藍色,胞漿淡紅色,結(jié)締組織鮮紅色,紅細胞橙紅色.染色液配置:蘇木素是世界上唯一較好的常規(guī)細胞核染色劑,配置方法很多,各有特點,常用的有:Harris蘇木素Ehrlich蘇木素Mayer蘇木素等.在日常工作中,用Gill改良蘇木素:蘇木素2g溶于無水乙醇250ml中,再將硫酸鋁17.6g溶于蒸餾水750ml中,兩液溶解后將其混勻,加入碘酸鈉0.2g,最后加入冰醋酸20ml

特點:配置簡單,色澤鮮艷,染液耐用..染色注意事項:1