太行菊組織培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程DB41-T 1103-2015

ICS65.020

B62

DB41

河南省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB41/T1103—2015

太行菊組織培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程

2015-08-13發(fā)布2015-11-13實(shí)施

河南省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

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前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。

本標(biāo)準(zhǔn)由河南省林業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：鄭州大學(xué)、河南省綠洲園林有限公司。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：史屹峰、黃進(jìn)勇、張建波、劉彬、趙志營、王景玉、李嬌。

本標(biāo)準(zhǔn)參加起草人：崔青艷、韓玉霞、喬林、張獻(xiàn)計(jì)、王俊、復(fù)鵬、田小娟、李幸紅、岳彩鵬、朱

世新。

I

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太行菊組織培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了太行菊組織培養(yǎng)的術(shù)語和定義、培養(yǎng)基的配制、組織培養(yǎng)、煉苗移栽。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于太行菊組織培養(yǎng)。

2術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

2.1

太行菊

太行菊(Opisthopapustaihangensis)，菊科菊蒿亞族太行菊屬多年生宿根草本植物，中國太行山區(qū)特

有珍稀物種。

3培養(yǎng)基的配制

3.1培養(yǎng)基選擇

選擇MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基（MS培養(yǎng)基參見附錄A）。

3.2母液與激素的配制

3.2.1大量元素母液的配制

大量元素母液按50倍配制。使用時(shí)再稀釋50倍，配好的母液放置于棕色瓶保存于4℃冰箱中備用。

3.2.2微量元素母液的配制

微量元素母液按100倍配制。使用時(shí)再稀釋100倍，配好的母液放置于棕色瓶保存于4℃冰箱中備

用。

3.2.3有機(jī)母液的配制

有機(jī)母液按100倍配制。使用時(shí)再稀釋100倍，配好的母液放置于棕色瓶保存于4℃冰箱中備用。

3.2.4鐵鹽母液的配制

分別溶解FeSO4·7H2O和Na2-EDTA，加熱并不斷攪拌，使完全溶解，冷卻后，將2種溶液混合，再

用蒸溜水加至所需容積，按100倍配制。使用時(shí)再稀釋100倍，配好的母液放置于棕色瓶保存于4℃冰箱

中備用。

3.2.56-芐氨基腺嘌呤配制

稱取100mg6-芐氨基腺嘌呤（6-BA），用少量0.1mol/LHCL加熱溶解，再用蒸餾水定容至100mL,

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濃度為1.0mg/L。

3.2.6萘乙酸配制

稱取10mg萘乙酸（NAA），用1mL無水乙醇溶解，再用蒸餾水定容至100mL，濃度為0.1mg/L。

3.3培養(yǎng)基配方

3.3.11/2MS基本培養(yǎng)基：1/2MS+30g/L白砂糖+10g/L瓊脂條；

3.3.2叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+0.1mg/LNAA+1.0mg/L6-BA+30g/L白砂糖+10g/L瓊脂條；

3.3.3生根培養(yǎng)基：1/2MS+0.2mg/LNAA+30g/L白砂糖+10g/L瓊脂條；

3.3.4無激素基本培養(yǎng)基：MS+30g/L白砂糖+10g/L瓊脂條。

3.4配制

以配制10L培養(yǎng)基為例，按順序進(jìn)行如下操作：

a)MS為基本培養(yǎng)基，取少量蒸餾水倒入容器內(nèi)，除了大量元素母液取200mL外，其余母液均取

100mL倒入容器內(nèi)；1/2MS為基本培養(yǎng)基時(shí)；取少量蒸餾水倒入容器內(nèi)，除了大量元素母液取

100mL外，其余母液均取50mL倒入容器內(nèi)；

b)稱取300g蔗糖倒入容器，攪拌溶解；

c)加蒸餾水定容至10L；

d)按照培養(yǎng)基配方，加入NAA和6-BA。叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基加10mLNAA和100mL6-BA；生根培養(yǎng)

基加20mLNAA；

e)稱取100g瓊脂條，倒入上面配好的溶液中，放在電爐上加熱至沸騰，直到瓊脂條熔化；

f)稍微冷卻后，用精密試紙或酸度計(jì)調(diào)整pH至5.7～5.8，分裝；

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g)對(duì)分裝好的培養(yǎng)基用高溫高壓蒸汽消毒，壓力1.1kg/cm、溫度121℃條件下保持25min，待滅

菌完成好，壓力為0的時(shí)候取出培養(yǎng)基，平放在地面上冷卻凝固。

4組織培養(yǎng)

4.1培養(yǎng)材料及消毒

4.1.1培養(yǎng)材料的選擇和確定

10月底至11月初，采集當(dāng)年飽滿太行菊的種子作為培養(yǎng)材料，存放于4℃冰箱。

4.1.2消毒滅菌

將種子用自來水沖洗2h后，在超凈工作臺(tái)內(nèi)用75%酒精漂洗15s，后用2%的次氯酸鈉浸泡8min（加2

滴聚山梨酯），蒸餾水沖洗2～3次。

4.2無菌播種

用無菌濾紙把種子表面附著的水分吸干凈，然后在在超凈工作臺(tái)內(nèi)用鑷子將種子接種到1/2MS培養(yǎng)

基上，置入溫度為20℃～25℃光照培養(yǎng)室內(nèi)誘導(dǎo)種子萌發(fā)，待種子發(fā)芽長出2片真葉，進(jìn)行光照處理，

光照強(qiáng)度2500lx，光照時(shí)間14h/d，培養(yǎng)30d～35d。

4.3誘導(dǎo)及分化

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切除長出來的無菌幼苗根部部分，把得到的無菌苗莖接種到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，放到光照培養(yǎng)室

培養(yǎng)30d。

4.4增殖繼代培養(yǎng)

將誘導(dǎo)出來的叢生芽分割成含2～3個(gè)小芽的芽叢，切去死葉和基部黃褐色疏松組織，繼續(xù)接種到叢

生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，放置于光照培養(yǎng)室進(jìn)行增殖繼代培養(yǎng)，30d為一個(gè)周期，如此循環(huán)。

4.5培養(yǎng)環(huán)境

溫度為25℃±1℃，光照時(shí)間14h/d，光照強(qiáng)度2500lx,相對(duì)濕度70%～80%。

4.6生根培養(yǎng)

4.6.1生根苗的選擇

從組培苗中切取生長健壯、葉色正常、葉片舒展的無根苗。

4.6.2誘導(dǎo)生根

在超凈工作臺(tái)內(nèi)，將無根苗上長至4cm以上的再生芽從基部切下，接種到生根培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)根原

基的形成，黑暗培養(yǎng)3d～5d。后將其接種到無激素MS培養(yǎng)基誘導(dǎo)根的伸長，光照培養(yǎng)20d～25d。

5煉苗移栽

5.1煉苗

待根長至3cm時(shí)開始煉苗，將培養(yǎng)瓶放置溫室自然散射光下，溫度控制在25℃±1℃，閉口煉苗2d～

3d，再打開瓶蓋，加入3mL800倍多菌靈溶液，煉苗3d～5d。

5.2移栽

用鑷子將生根苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗去基部培養(yǎng)基，在800倍多菌靈溶液中浸泡30min后移栽到基質(zhì)

中?；|(zhì)采用草炭土、蛭石、珍珠巖比例為3:1:1。溫度25℃±1℃，前3d～4d相對(duì)濕度保持在80%～90%，

后逐漸降低濕度，每天葉面噴水2～3次，當(dāng)試管苗根系發(fā)達(dá)、形成側(cè)須根后，可移栽到花盆中。

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A

附錄A

（資料性附錄）

MS培養(yǎng)基成分表

MS培養(yǎng)基成分見表A.1。

表A.1

單位為毫克每升

成分含量

硝酸鉀（KNO3)1900

硝酸銨（NH4NO3)1650

大量元素磷酸二氫鉀（KH2PO4)170

硫酸鎂（MgSO4·7H2O)370

氯化鈣（CaCl2·2H2O)440

碘化鉀（KI)0.83

硼酸（H3BO3)6.2

硫酸錳（MnSO4·4H2O)22.3

微量元素硫酸鋅（ZnSO4·7H2O)8.6

鉬酸鈉（Na2MoO4·2H2O)0.25

硫酸銅（CuSO4·5H2O)0.025

氯化鈷（CoCl2·6H2O)0.025

乙二胺四乙酸二鈉（Na2-EDTA)37.25

鐵鹽

硫酸亞鐵（FeSO4·7H2O)27.85

肌醇100

甘氨酸2

有機(jī)鹽酸硫胺素（VB1)0.1

鹽酸吡哆醇（VB6)0.5

煙酸（VB5)0.5

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前言

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本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：史屹峰、黃進(jìn)勇、張建波、劉彬、趙志營、王景玉、李嬌。

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