高中生物基因工程的基本操作程序練習(xí)題

高中生物基因工程的基本操作程序練習(xí)題

一、選擇題（本題共計(jì)10小題，每題3分，共計(jì)30分，）

1.基因工程中不能作為運(yùn)載體的是（）

A.細(xì)菌B.質(zhì)粒C.動(dòng)植物病毒D.噬菌體

2.下列有關(guān)基因文庫(kù)的敘述不正確的是（）

A.基因文庫(kù)包括基因組文庫(kù)和部分基因文庫(kù)

B.同一生物不同發(fā)育階段構(gòu)建的基因組文庫(kù)一般相同

C.基因組文庫(kù)中的所有基因都可在物種間進(jìn)行交流

D.在cDNA文庫(kù)和基因組文庫(kù)中，同一基因的長(zhǎng)度不同

3.下列不屬于基因工程的基本工具的是（）

A.限制酶B.DNA連接酶C.DNA聚合酶D.運(yùn)載體

4.人們?cè)噲D利用基因工程的方法，用乙種生物生產(chǎn)甲種生物的一種蛋白質(zhì)。生產(chǎn)流程

①②③④

是：形成甲生物的蛋白質(zhì)的mRNA-目的基因-與質(zhì)粒DNA重組導(dǎo)入乙細(xì)胞-獲得

甲生物的蛋白質(zhì)。下列說(shuō)法正確的是（）

A.①過(guò)程需要的酶是逆轉(zhuǎn)錄酶，原料是A、T、G、C四種核糖核甘酸

B.②要用限制酶切斷質(zhì)粒DNA,再用DNA聚合酶將目的基因與質(zhì)粒連接在一起

C.如果受體細(xì)胞是細(xì)菌，可以選用炭疽桿菌

D.④過(guò)程能說(shuō)明目的基因在受體細(xì)胞中完成了表達(dá)

5.藍(lán)色花具有很高的觀賞價(jià)值和商業(yè)價(jià)值，受基因資源的限制，傳統(tǒng)的育種手段很難

獲得藍(lán)色的新異色系，轉(zhuǎn)基因技術(shù)可以突破物種限制，從而實(shí)現(xiàn)藍(lán)色花的培育。下列

關(guān)于基因工程培育藍(lán)色花的敘述不正確的是0

A.藍(lán)色基因可通過(guò)T-DNA轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞染色體上

B.多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)可以擴(kuò)增該藍(lán)色基因的數(shù)量

C.可通過(guò)花色改變判斷目的基因是否成功表達(dá)

D.該藍(lán)色基因在供體和受體細(xì)胞中表達(dá)產(chǎn)物不同

6.科家運(yùn)用基因工程技術(shù)，將人凝血因子基因?qū)肷窖虻腄NA中，培育出羊乳腺生

物反應(yīng)器，使羊乳汁含人凝血因子。以下有關(guān)敘述，正確的是（）

A.可用顯微注射技術(shù)將含有人凝血因子基因的重組DNA分子導(dǎo)入羊的受精卵

B.在該轉(zhuǎn)基因羊中，人凝血因子存在于乳腺細(xì)胞，而不存在于其他細(xì)胞

C.人凝血因子基因開始轉(zhuǎn)錄后，DNA聚合酶以DNA分子一條鏈為模板合成mRNA

D.科學(xué)家將人凝血因子基因與乳腺蛋白基因重組在一起，從而使人凝血因子基因只在

乳腺細(xì)胞中特異表達(dá)

7.為了增加菊花的花色類型，研究者嘗試從其他植物中克隆出花色基因C,擬將其與

質(zhì)粒重組，再借助農(nóng)桿菌導(dǎo)入菊花中。下列操作與實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟环氖牵ǎ?/p>

I

A.用限制性酶EcoRI和DNA連接酶構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)無(wú)法保證定向連接

B.在添加潮霉素的培養(yǎng)基中，篩選出的菊花細(xì)胞未必均被轉(zhuǎn)化成功

C.在借助農(nóng)桿菌進(jìn)行轉(zhuǎn)化時(shí)，將基因C插人Ti質(zhì)粒的任何部位均可

D.用不同的分子水平雜交方法可分別檢測(cè)基因C是否導(dǎo)入受體細(xì)胞和表達(dá)

8.科學(xué)家利用基因工程培育出了耐鹽的轉(zhuǎn)基因棉花新品系，下列相關(guān)敘述不正確的

（）

A.可通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞

B.含耐鹽基因的棉花細(xì)胞可經(jīng)植物組織培養(yǎng)獲得完整植株

C.可用一定濃度的鹽水澆灌來(lái)鑒定棉花植株的耐鹽性

D.如果目的基因的核甘酸序列是全部未知的，可用PCR技術(shù)得到大量目的基因

9.所謂“實(shí)質(zhì)性等同“是指（）

A.轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物中的成分完全沒發(fā)生改變

B.轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物中的部分成分沒發(fā)生改變

C.轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物中只要某些重要成分沒有發(fā)生改變，就可以認(rèn)為與天然品種“沒有差別”

D.”實(shí)質(zhì)性等同”是對(duì)轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物安全性的最終評(píng)價(jià)

io.下列獲取目的基因的方法中需要模板鏈的是（）

①利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因

②從基因文庫(kù)中獲取目的基因

③反轉(zhuǎn)錄法

④通過(guò)DNA合成儀利用化學(xué)方法人工合成目的基因.

A.①②③④B.①②③C.①③D.②③④

二、填空題（本題共計(jì)6小題，每題3分，共計(jì)18分，）

11.為擴(kuò)大可耕地面積，增加糧食產(chǎn)量，黃河三角洲等鹽堿地的開發(fā)利用備受關(guān)注。

我國(guó)科學(xué)家應(yīng)用耐鹽基因培育出了耐鹽水稻新品系。

①獲得耐鹽基因后，構(gòu)建重組DNA分子所用的限制性核酸內(nèi)切酶作用于上圖中的

（填“a”或"b"）處，DNA連接酶作用于（填“a”或"b”）處。

②將重組DNA分子導(dǎo)入水稻受體細(xì)胞的常用方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、法和花粉

管通道法。

③為了確定耐鹽轉(zhuǎn)基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素標(biāo)記的作探

針進(jìn)行分子雜交檢測(cè)，又要用一定濃度鹽水澆灌的方法從個(gè)體水平鑒定水稻植株的耐

試卷第2頁(yè)，總20頁(yè)

鹽性。

a

a

12.限制性核酸內(nèi)切酶和DM4連接酶是兩類常用的工具，用前者可切割煙草花葉病毒

的核酸.(判斷對(duì)錯(cuò))

13.我們?nèi)粘３缘拇竺字需F含量極低，科研人員通過(guò)基因工程等技術(shù)，培育出了鐵含

量比普通大米高60%的轉(zhuǎn)基因水稻，改良了稻米的營(yíng)養(yǎng)品質(zhì).如圖為培育轉(zhuǎn)基因水稻

過(guò)程示意圖，請(qǐng)分析回答.

結(jié)合蛋白基因

導(dǎo)入農(nóng)桿菌涔77^含重組質(zhì)粒

潮霉素((月的農(nóng)桿菌

抗性基因炎丁/

重組石質(zhì)粒/加入培養(yǎng)基

開花后愈傷組織/愈傷組織

水稻未

成熟的.......—.一＞轉(zhuǎn)基因水

胚培養(yǎng)基2培養(yǎng)基3稻(T：代)

篩選培養(yǎng)

(1)鐵結(jié)合蛋白基因來(lái)自菜豆，且基因的脫氧核甘酸序列已知，可以用法獲得

此目的基因.

(2)構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒時(shí)，通常要用分別切割；再用將二者連

接.將重組"質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌時(shí)，可以用處理農(nóng)桿菌，使重組方質(zhì)粒易于導(dǎo)

入.

(3)通過(guò)培養(yǎng)基2的篩選培養(yǎng)，可以獲得.檢測(cè)培育轉(zhuǎn)基因水稻的目的是否達(dá)

到，需要檢測(cè)轉(zhuǎn)基因水稻.

14.為了增加菊花花色類型，研究者獲取其他植物的花色基因C,將其與質(zhì)粒重組為基

因表達(dá)載體，再借助農(nóng)桿菌導(dǎo)入菊花中?；卮鹣铝袉栴}。

(1)獲取花色素基因C的方法有。將花色素基因C與質(zhì)粒構(gòu)建為基因表達(dá)

載體時(shí)需要用到的工具酶有O

(2)基因表達(dá)載體中必須含有標(biāo)記基因。標(biāo)記基因的作用是o

(3)除農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法外，還可以采用等方法將基因表達(dá)載體導(dǎo)入菊花中。

(4)目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，可以采用DNA分子雜交技術(shù)檢測(cè)C基因是否整合到

菊花的DNA上。請(qǐng)簡(jiǎn)要描述檢測(cè)的操作過(guò)程：。

(5)檢測(cè)基因C是否翻譯成蛋白質(zhì)，是從轉(zhuǎn)基因菊花中提取出蛋白質(zhì)，進(jìn)行

雜交，若有雜交帶出現(xiàn)，表明基因C已形成蛋白質(zhì)產(chǎn)品。

15.人體細(xì)胞內(nèi)含有抑制癌癥發(fā)生的某基因，生物技術(shù)可對(duì)此類基因的變化進(jìn)行檢

測(cè).該基因含有800對(duì)堿基對(duì)(加)，用BamH/切割得到的400bp,200bp,200bp,用

EcoR/再次切割得到100bp,300bp,150bp,50bp,200bp,而患者體內(nèi)獲取的這段

基因，用BamH/切割得到的區(qū)段變?yōu)?00m4006p,用EcoR/再次切割得到lOObp,

300bp,150bp,250bp.在正常人體內(nèi)Bam"/和EcoR/識(shí)別序列分別有個(gè)和

個(gè)，患者體內(nèi)發(fā)生了.

16.基因工程的第二步，也是基因工程的核心是：.

三、解答題(本題共計(jì)10小題，每題10分，共計(jì)100分，)

17.通過(guò)基因工程將某種細(xì)胞的抗凍基因轉(zhuǎn)入番茄組織塊，可增強(qiáng)番茄植株的抗凍能力。

回答下列問題。

(1)在_______________酶的作用下，能以抗凍基因產(chǎn)生的mRNA為模板獲得cDNA

片段。為使抗凍基因在番茄細(xì)胞中表達(dá)，需要將目的基因插入載體的

和_____________之間O

(2)轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株的獲得是(填“定向”或"不定向”)變異的結(jié)果。

(3)質(zhì)粒作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有(答出兩點(diǎn)即可)；

DNA連接酶是將兩條DNA鏈連接起來(lái)的酶，常見的有和其

中只能連接黏性末端的是O

18.基因敲除技術(shù)已經(jīng)成為現(xiàn)代生命科學(xué)基礎(chǔ)研究和藥物研發(fā)領(lǐng)域不可或缺的重要技術(shù),

如圖是制備APOE基因敲除小鼠的常規(guī)過(guò)程，①?⑨表示相應(yīng)步驟。

備注：Neo基因是抗新心素的抗藥基因；APOE是指或M3［白E,參與脂蛋白的代謝與轉(zhuǎn)憶

請(qǐng)回答：

(1)在步驟①中，通常需要用相同的限制性核酸內(nèi)切酶分別切割A(yù)POE基因和載體

DNA,形成然后在DNA連接酶的作用下，形成重組質(zhì)粒。步驟②中的

Neo基因的作用是。步驟④同源重組指的是從而使小鼠正常胚胎

干細(xì)胞帶有被破壞的APOE基因。

(2)過(guò)程⑧為。純合的APOE基因敲除小鼠(填"能''或"不能”)表

達(dá)APOE,與正常小鼠相比，APOE基因敲除小鼠表現(xiàn)為0

試卷第4頁(yè)，總20頁(yè)

19.主要組織相容性復(fù)合體(MHC)是脊椎動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)的編碼免疫球蛋白樣受體的高

度多態(tài)的基因群，與機(jī)體抗病力和免疫應(yīng)答相關(guān)。其中MHCH分子存在于免疫細(xì)胞表

面，在細(xì)胞免疫和體液免疫中起重要作用?？蒲腥藛T首先利用基因工程在原核細(xì)胞中

表達(dá)出MHCH蛋白以便進(jìn)行深入研究，請(qǐng)回答下列問題。

(1)若想利用基因工程在原核細(xì)胞中表達(dá)出MHCU蛋白，需要從文庫(kù)中獲

得該目的基因。

(2)獲得MHCH基因后用技術(shù)可以在體外大量擴(kuò)增目的基因。在擴(kuò)增時(shí)將

溫度冷卻至55~60℃的目的是。

(3)基因工程的關(guān)鍵步驟是。通常用雙酶切的方法對(duì)目的基因和運(yùn)載體進(jìn)行

切割，其優(yōu)點(diǎn)是________。在構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)，需在目的基因的兩端加入。

(4)檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)用法。

20.請(qǐng)回答基因工程相關(guān)問題：

(1)基因工程的四個(gè)基本操作步驟：獲取目的基因----------將目的基因?qū)胧荏w

細(xì)胞、目的基因檢測(cè)與鑒定；獲取目的基因的兩條途徑為和O

(2)在基因表達(dá)載體中，啟動(dòng)子是聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位。若將真核基因

在原核細(xì)胞中表達(dá)，對(duì)該目的基因的基本要求是，?在獲得轉(zhuǎn)基因奶牛時(shí)，將

基因表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞所采用的方法是O

(3)假設(shè)以大腸桿菌質(zhì)粒作為運(yùn)載體，并以同一種限制性內(nèi)切酶切割運(yùn)載體與目的基

因?qū)⑶懈詈蟮倪\(yùn)載體與目的基因片段混合，并加入DNA連接酶。連接產(chǎn)物至少有

種環(huán)狀DNA分子，它們分別是o

21.請(qǐng)回答下列有關(guān)基因工程的問題：

(1)在基因工程中，獲取目的基因的方法包括：①?gòu)闹蝎@取目的基因，②利

用擴(kuò)增目的基因，③化學(xué)方法直接人工合成目的基因。

(2)獲取目的基因及目的基因和運(yùn)載體結(jié)合的過(guò)程需要用到的工具酶有o最

常用的運(yùn)載體是_______。

(3)在基因工程中，為使人凝血因子基因在牛乳腺中正確表達(dá)，需將目的基因與

等調(diào)控組件重組在一起。在分子水平上檢查凝血因子在牛乳腺細(xì)胞中是否成

功表達(dá)，常用的方法是O

(4)欲用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)氲街参锛?xì)胞中，需要將目的基因插入到農(nóng)桿菌

DNA中的________區(qū)域，為了讓目的基因更好的進(jìn)入農(nóng)桿菌細(xì)胞中，需要用

處理細(xì)胞，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。

22.科學(xué)工作者將某種海蜚的DNA分子上一段長(zhǎng)度為5170個(gè)堿基對(duì)的片段——綠色熒

光蛋白基因，轉(zhuǎn)入到夾竹桃細(xì)胞中，培育出一種夜間發(fā)光的夾竹桃。培育過(guò)程如下圖

所示，回答有關(guān)問題。

(1)構(gòu)建圖中的重組Ti質(zhì)粒，還需用到的基因工程基本工具是和

作為受體農(nóng)桿菌應(yīng)________(含/不含)抗青霉素基因，以方便篩選已導(dǎo)入重組Ti質(zhì)粒

的受體農(nóng)桿菌。在將重組Ti質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌之前，先要用Ca2+處理農(nóng)桿菌，其目的是

使其成為細(xì)胞。

(2)圖中將綠色熒光蛋白基因?qū)電A竹桃細(xì)胞的方法稱為o轉(zhuǎn)基因夾竹桃幼

苗對(duì)青霉素(填“具有”或“不具有")抗性，原因是________0

23.廣蕾香是一種藥用價(jià)值較高的熱帶作物，但容易患青枯病。某昆蟲中含有抗菌肽B

(AP-B)能夠殺死病菌，先利用昆蟲體內(nèi)的抗菌肽B基因來(lái)獲得轉(zhuǎn)基因抗病植物，

下圖為基因工程的操作程序以及三種限制酶的識(shí)別序列，請(qǐng)回答下列問題：

BamHI

農(nóng)桿菌一>與植物細(xì)胞共同培養(yǎng)

llin<lIII③④|

HindIII

B'3kl>-B鵬因I抗菌肽B篩選后?_轉(zhuǎn)移至含卡那褥素

表達(dá)檢測(cè)^增殖培養(yǎng)培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)

①⑦⑥⑤

III

GGATCC...AAGCIT.TGATCA

限制褥序列：BamH1:CCTAGGH,ndl":TTCGAABcl1:ACTAGT

(1)想要從重組質(zhì)粒中重新獲得抗菌肽B基因，不能再使用限制酶BamHI或BelI,

原因是O

(2)構(gòu)建②是基因工程的核心步驟，在其表達(dá)過(guò)程中，啟動(dòng)子需與

結(jié)合來(lái)啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄，在重組質(zhì)粒中應(yīng)含有的標(biāo)記基因是O

(3)過(guò)程⑤的目的是_____________________________若要檢測(cè)相關(guān)抗病基因是否導(dǎo)

入廣蕾香細(xì)胞中，應(yīng)選擇含有的片段作為探針。

(4)若提供青枯病菌液為材料，可用其對(duì)植物進(jìn)行灌根處理，如何驗(yàn)證轉(zhuǎn)基因植物獲

得抗青枯病能力，寫出實(shí)驗(yàn)思路、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

24.基因工程

試卷第6頁(yè)，總20頁(yè)

基因工程，又叫做或0通俗地說(shuō)，就是按照人們的意愿，把一種生

物的某種基因提取出來(lái)，加以然后放到另一種生物的細(xì)胞里，地

改造生物的遺傳性狀。

基因的“剪刀”指的是。一種限制酶只能識(shí)別一種特定的并在特定

的________上切割DNA分子。脫氧核糖和磷酸交替連接而構(gòu)成的DNA骨架上的缺口，

需要靠來(lái)“縫合要將外源基因送入受體細(xì)胞，還需要專門的運(yùn)輸工具，這

就是o目前常用的運(yùn)輸工具有和等。

質(zhì)粒存在于許多以及等生物的細(xì)胞中，是或外能

夠自主復(fù)制的很小的分子。

基因工程的操作一般要經(jīng)歷四個(gè)步驟：提取目的基因、將目的基因?qū)胧?/p>

體細(xì)胞、O

25.如圖為某質(zhì)粒表達(dá)載體簡(jiǎn)圖，小箭頭所指分別為限制酶EcoR［、BamHI的酶切位

點(diǎn)，amp，為青霉素抗性基因，為四環(huán)素抗性基因，P為啟動(dòng)子，T為終止子，。ri

為復(fù)制原點(diǎn)。又知植物甲具有極強(qiáng)的耐旱性，其耐旱性與某個(gè)基因有關(guān)。若從該植物

中獲得該耐旱基因，并將其轉(zhuǎn)移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。

已知耐旱基因兩端分別有包括EcoRI、BamHI在內(nèi)的多種酶的酶切位點(diǎn)。據(jù)圖回答：

&cRI

^■RamHI

(1)獲得耐旱基因常用基因文庫(kù)法。理論上，中含有該生物的全部基因；而

中含有生物的部分基因。將含有耐旱基因的DNA與該質(zhì)粒表達(dá)載體分別用

EcoRI酶切，酶切產(chǎn)物用DNA連接酶處理后，兩兩連接的產(chǎn)物有種。

(2)將上述連接產(chǎn)物導(dǎo)入無(wú)任何抗藥性的宿主細(xì)胞后，將這些宿主細(xì)胞接種到含四環(huán)

素的培養(yǎng)基中，能正常生長(zhǎng)的宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是O

(3)目的基因表達(dá)時(shí)，RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)是其合成的產(chǎn)物是

(4)在上述實(shí)驗(yàn)中，為了防止目的基因和質(zhì)粒表達(dá)載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意

連接，酶切時(shí)應(yīng)選用的酶是O

(5)假如用得到的二倍體轉(zhuǎn)基因耐旱植株自交，當(dāng)子代中耐旱植株與不耐旱植株的數(shù)

量比為3：1時(shí)，則可推測(cè)該耐旱基因整合到了(填“同源染色體的一條上”或

“同源染色體的兩條上”)。

26.用基因工程的方法，使外源基因得到高效表達(dá)的菌類細(xì)胞株系一般稱為“工程菌”。

如圖所示為培育工程菌的流程圖，其中轉(zhuǎn)染指用離體狀態(tài)的病毒核酸感染感受態(tài)的細(xì)

菌，從而起到改變細(xì)菌基因型的作用?；卮鹣铝袉栴}：

(1)圖中過(guò)程①所用工具酶中能破壞磷酸二酯鍵的是________該酶的作用特點(diǎn)為

(2)培育該工程菌時(shí)，外源DNA來(lái)自o在進(jìn)行轉(zhuǎn)染的過(guò)程中，首先要使用

處理細(xì)菌，使其處于感受態(tài)，其次將重組質(zhì)粒溶于中與感受態(tài)細(xì)胞

混合，在一定溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子，完成轉(zhuǎn)染過(guò)程。

(3)圖中②過(guò)程，重組DNA增殖時(shí)具有(答出兩點(diǎn)即可)特點(diǎn)。

(4)已知所用載體內(nèi)有青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因，若含重組質(zhì)粒的細(xì)菌

則說(shuō)明外源DNA插入了載體的四環(huán)素抗性基因內(nèi)部。

試卷第8頁(yè)，總20頁(yè)

參考答案與試題解析

高中生物基因工程的基本操作程序練習(xí)題

一、選擇題（本題共計(jì)10小題，每題3分，共計(jì)30分）

1.

【答案】

A

【考點(diǎn)】

基因工程的原理及技術(shù)

【解析】

此題暫無(wú)解析

【解答】

此題暫無(wú)解答

2.

【答案】

C

【考點(diǎn)】

基因工程的原理及技術(shù)

【解析】

此題暫無(wú)解析

【解答】

A.基因文庫(kù)包括基因組文庫(kù)和部分基因文庫(kù)，A正確；

B.同一生物不同發(fā)育階段的DNA一般相同、mRNA一般不同，因此，基因組文庫(kù)相

同、cDNA文庫(kù)不同，B正確；

C.根據(jù)基因組文庫(kù)的定義可知，基因組文庫(kù)中的部分基因可在物種間進(jìn)行交流，C錯(cuò)

誤；

D.cDNA是由mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的，比正常的基因要短一些，D正確。

故選C。

3.

【答案】

C

【考點(diǎn)】

基因工程的原理及技術(shù)

【解析】

本題比較基礎(chǔ)，考查轉(zhuǎn)基因技術(shù)的相關(guān)知識(shí)，只要考生識(shí)記基因工程常用的基本工具

即可正確答題，屬于考綱識(shí)記層次的考查。

【解答】

解：A.基因工程中，獲取目的基因和構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)需要限制酶，A不符合題意；

B.基因工程中，構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)需要DNA連接酶，B不符合題意；

C.DNA聚合酶不屬于基因工程的工具，C符合題意；

D.基因工程中，將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞時(shí)需要運(yùn)載體，D不符合題意。

故選：Co

4.

【答案】

D

【考點(diǎn)】

基因工程的原理及技術(shù)

【解析】

本題考查基因工程的相關(guān)內(nèi)容。

【解答】

A項(xiàng)，①過(guò)程是逆轉(zhuǎn)錄，需要的酶是逆轉(zhuǎn)錄酶，原料應(yīng)是四種脫氧核甘酸，A錯(cuò)誤；

B項(xiàng)，②過(guò)程中，在將目的基因與運(yùn)載體結(jié)合時(shí)，用DNA連接酶連接，B錯(cuò)誤；

C項(xiàng)，如果受體細(xì)胞是細(xì)菌，常用大腸桿菌，不可以選用枯草桿菌、炭疽桿菌等，因

為它們都是有害菌，對(duì)受體細(xì)胞有害，C錯(cuò)誤；

D項(xiàng)，④過(guò)程是獲得了甲種生物的蛋白質(zhì)，能說(shuō)明目的基因在受體細(xì)胞中完成了表達(dá),

D正確。

故選D。

5.

【答案】

D

【考點(diǎn)】

基因工程的原理及技術(shù)

【解析】

1、獲取目的基因的方法有：從基因文庫(kù)或cDNA中直接獲取、PCR擴(kuò)增、化學(xué)合成法

方法。

2、目的基因的檢測(cè)與鑒定方法：

①DNA分子雜交技術(shù)，檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物體的DNA上是否插入了目的基因；

②分子雜交技術(shù)，檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA；

③抗原抗體雜交，檢測(cè)目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì)；

④個(gè)體生物學(xué)水平鑒定。

【解答】

A、將藍(lán)色基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上，通過(guò)農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以把目的

基因整合到植物細(xì)胞中染色體的DNA上，A正確；

B、采用多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)可以在體外擴(kuò)增該藍(lán)色基因的數(shù)量，B正確；

C、可通過(guò)個(gè)體生物學(xué)水平，即是否出現(xiàn)藍(lán)色花判斷目的基因是否成功表達(dá)，C正確；

D、該藍(lán)色基因在供體和受體細(xì)胞中表達(dá)產(chǎn)物相同，D錯(cuò)誤。

6.

【答案】

A

【考點(diǎn)】

基因工程的原理及技術(shù)

【解析】

轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥物：

(1)基因來(lái)源：藥用蛋白基因+乳腺組織特異性表達(dá)的啟動(dòng)子(原理：基因的選擇性

表達(dá))。

(2)成果：乳腺生物反應(yīng)器。

(3)過(guò)程：將藥物蛋白基因與乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組在一起，導(dǎo)入哺

乳動(dòng)物的受精卵中，最終培育的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物進(jìn)入泌乳期后，可以通過(guò)分泌的乳汁生產(chǎn)

所需要的藥物。

注：只有在產(chǎn)下雌性動(dòng)物個(gè)體中，轉(zhuǎn)入的基因才能表達(dá)。

試卷第10頁(yè)，總20頁(yè)

【解答】

解：A.將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法，因此可用顯微注射技術(shù)

將含有人凝血因子基因的重組DNA分子導(dǎo)入羊的受精卵，A正確；

B.在該轉(zhuǎn)基因羊中，人凝血因子存在于所有細(xì)胞中，但只在乳腺細(xì)胞中表達(dá)，B錯(cuò)誤；

C.人凝血因子基因開始轉(zhuǎn)錄后，RNA聚合酶以DNA分子一條鏈為模板合成mRNA,C

錯(cuò)誤；

D.科學(xué)家將人凝血因子基因與乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組在一起，從而使

人凝血因子基因只在乳腺細(xì)胞中特異表達(dá)，D錯(cuò)誤。

故選：Ao

7.

【答案】

C

【考點(diǎn)】

基因工程的原理及技術(shù)

【解析】

解答此類題目的關(guān)鍵是牢固掌握基礎(chǔ)知識(shí)并能靈活運(yùn)用所學(xué)知識(shí)解釋實(shí)際問題。

【解答】

解：A.據(jù)圖分析可知，在目的基因的兩端、啟動(dòng)子和終止子之間都有限制酶EcoRI的

切割位點(diǎn)，因此可以用限制酶EcoRI切割目的基因和運(yùn)載體，之后再用DNA連接酶

連接形成基因表達(dá)載體，但由于基因C兩端的黏性末端相同，因此無(wú)法保證定向連接,

有可能出現(xiàn)反向連接，A正確。

B.在培養(yǎng)基中添加潮霉素，篩選被轉(zhuǎn)化的菊花細(xì)胞時(shí)，能生長(zhǎng)的細(xì)胞除導(dǎo)入了重組質(zhì)

粒外，還可能是導(dǎo)入了空質(zhì)粒，B正確。

C.在借助農(nóng)桿菌進(jìn)行轉(zhuǎn)化時(shí)，需要將基因C插入Ti質(zhì)粒的T-DNA內(nèi)，才能進(jìn)入受體

細(xì)胞并整合到其染色體DNA上，C錯(cuò)誤。

D.首先要采用DNA分子雜交技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基

因，然后要采用標(biāo)記的目的基因作探針與mRNA雜交來(lái)檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了

mRNA,最后用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原一抗體雜交以檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，D

正確。

故選：Co

8.

【答案】

D

【考點(diǎn)】

基因工程的原理及技術(shù)

【解析】

本題意在考查考生的識(shí)記能力和理解所學(xué)知識(shí)要點(diǎn)，把握知識(shí)間內(nèi)在聯(lián)系，形成知識(shí)

網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)，準(zhǔn)確判斷問題的能力，屬于考綱識(shí)記和理解層次

的考查。

【解答】

解：A.農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法常用來(lái)轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞，可通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體

細(xì)胞，A正確；

B.棉花細(xì)胞具有全能性，含耐鹽基因的棉花細(xì)胞可經(jīng)植物組織培養(yǎng)獲得完整植株，B

正確；

C.一定濃度的鹽水澆灌可以從性狀表現(xiàn)層次鑒定棉花植株的耐鹽性，C正確；

D.PCR技術(shù)要求知道目的基因的部分核音酸序列，D錯(cuò)誤。

故選：Do

9.

【答案】

C

【考點(diǎn)】

基因工程的原理及技術(shù)

【解析】

此題暫無(wú)解析

【解答】

A.轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物中含有目的基因，其成分發(fā)生了改變，A錯(cuò)誤；

B.轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物中部分成分沒有發(fā)生改變，但不是“實(shí)質(zhì)性等同”的概念，B錯(cuò)誤；

C.“實(shí)質(zhì)性等同“是指轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物中只要某些重要成分沒有改變，就可以認(rèn)為與天然

品種“沒有差別”，C正確；

D.“實(shí)質(zhì)性等同”是對(duì)轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物安全性評(píng)價(jià)的起點(diǎn)，而不是終點(diǎn)，D錯(cuò)誤。

故選C。

10.

【答案】

C

【考點(diǎn)】

基因工程的原理及技術(shù)

【解析】

獲取目的基因的方法主要有兩種：

(1)從供體細(xì)胞的DNA中直接分離基因，最常用的方法是“鳥槍法”又叫“散彈射擊法

t

(2)人工合成基因，這種方法有兩條途徑，一是以目的基因轉(zhuǎn)錄的信使RNA為模板,

反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)的單鏈DNA,再在酶的作用下合成雙鏈DNA,即目的基因；另一條途

徑是蛋白質(zhì)的氨基酸序列，推測(cè)出信使RNA序列，再推測(cè)出結(jié)構(gòu)基因的核甘酸序列，

然后用化學(xué)的方法以單核甘酸為原料合成.

【解答】

①利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因需要模板鏈，①正確；

②從基因文庫(kù)中獲取目的基因不需要模板鏈，②錯(cuò)誤；

③反轉(zhuǎn)錄法合成目的基因需要以模板鏈，③正確；

④通過(guò)DNA合成儀利用化學(xué)方法人工合成目的基因不需要模板鏈，④錯(cuò)誤。

二、填空題(本題共計(jì)6小題，每題3分，共計(jì)18分)

11.

【答案】

a,a,基因槍，耐鹽基因

【考點(diǎn)】

基因工程的原理及技術(shù)

【解析】

分析題圖：圖中a為磷酸二酯鍵，是限制酶、DNA連接酶的作用位點(diǎn)；1)為氫鍵，是

解旋酶的作用位點(diǎn)。

【解答】

試卷第12頁(yè)，總20頁(yè)

①獲得耐鹽基因后，構(gòu)建重組DNA分子所用的限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶都作

用于磷酸二酯鍵，即圖中的a處。

②將重組DNA分子導(dǎo)入植物細(xì)胞的常用方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道

法。

③探針是被放射性同位素標(biāo)記的目的基因(耐鹽基因)。

12.

【答案】

錯(cuò)

【考點(diǎn)】

基因工程的原理及技術(shù)

【解析】

基因工程至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)、DM4連接酶、運(yùn)載體.

(1)限制酶：能夠識(shí)別雙鏈DN4分子的某種特定核甘酸序列，并且使每一條鏈中特定部

位的兩個(gè)核甘酸之間的磷酸二酯鍵斷裂.形成黏性末端和平末端兩種.

(2)DN4連接酶：連接的是兩個(gè)核甘酸之間的磷酸二酯鍵.

(3)運(yùn)載體：常用的運(yùn)載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒.

【解答】

解：限制性核酸內(nèi)切酶是只能切。N4的酶，而煙草花葉病毒的核酸是RN4,所以不能

切.

故答案為：

錯(cuò)

13.

【答案】

化學(xué)合成，同種限制酶，質(zhì)粒和目的基因,DNA連接酶,Ca2+,含重組質(zhì)粒或抗潮霉素的愈傷

組織，種子(大米)中鐵含量

【考點(diǎn)】

基因工程的原理及技術(shù)

【解析】

分析題圖：重組"質(zhì)粒中鐵結(jié)合蛋白基因稱為目的基因，潮霉素抗性基因?yàn)闃?biāo)記基因；

將重組“質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；將開花后未成熟的胚進(jìn)行植物組

織培養(yǎng)，脫分化形成愈傷組織，作為受體細(xì)胞，最終培育形成轉(zhuǎn)基因水稻，過(guò)程中需

要生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素進(jìn)行調(diào)節(jié).

【解答】

解：。)獲取目的基因的方法有三種：①?gòu)幕蛭膸?kù)中獲??；②利用PCR技術(shù)擴(kuò)增；③

人工合成(化學(xué)合成).如果基因的脫氧核昔酸序列已知，可以用化學(xué)合成法獲得此

目的基因，再用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增.

(2)構(gòu)建重組質(zhì)粒的過(guò)程中，通常要用同一種限制酶分別切割質(zhì)粒和含目的基因的CM4

片段，使它們產(chǎn)生相同的黏性末端，然后再用0N4連接酶連接成重組質(zhì)粒.將重組幾

質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌時(shí)，可以用CaC%溶液處理農(nóng)桿菌使之成為感受態(tài)細(xì)胞，易于重組"質(zhì)

粒導(dǎo)入.

(3)質(zhì)粒上的標(biāo)記基因?yàn)槌泵顾乜剐曰颍虼送ㄟ^(guò)培養(yǎng)基2的篩選培養(yǎng)，可以獲得含

有重組質(zhì)粒或抗潮霉素的愈傷組織.檢測(cè)培育轉(zhuǎn)基因水稻的目的是否達(dá)到，需要檢測(cè)

轉(zhuǎn)基因水稻成熟種子中鐵含量.

故答案為：

(1)化學(xué)合成

(2)同種限制酶質(zhì)粒和目的基因DNA連接酶Ca2+

(3)含重組質(zhì)粒或抗潮霉素的愈傷組織種子(大米)中鐵含量

14.

【答案】

從基因文庫(kù)中獲取目的基因或利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因,限制性核酸內(nèi)切酶、DNA

連接酶

鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而篩選出含有目的基因的細(xì)胞

基因槍法或者花粉管通道法

提取出轉(zhuǎn)基因菊花的基因組，將花色素基因C用同位素等標(biāo)記作為探針，使探針與基

因組雜交

抗原-抗體

【考點(diǎn)】

基因工程的原理及技術(shù)

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

(1)目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸?kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

(2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟

動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。

(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基

因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)?/p>

動(dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)

胞法。

(4)目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA

是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--

分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水

平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

【解答】

獲取目的基因的方法有：從基因文庫(kù)中獲取目的基因、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因；

構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，首先需要用限制酶切割目的基因和運(yùn)載體，其次需要用DNA連

接酶將目的基因與運(yùn)載體連接形成重組DNAO

標(biāo)記基因的作用是鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而篩選出含有目的基因的細(xì)

胞。

將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞可采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法或者花粉管通道法。

檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，可采用DNA分子雜交技術(shù)，過(guò)程為：提取出轉(zhuǎn)基因

生物的基因組，將目的基因用同位素等標(biāo)記作為探針，使探針與基因組雜交。

檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，可采用抗原-抗體雜交法，即從轉(zhuǎn)基因菊花中提取

出蛋白質(zhì)，進(jìn)行抗原-抗體雜交，若有雜交帶出現(xiàn)，表明目的基因已形成蛋白質(zhì)產(chǎn)品。

15.

【答案】

2,2,基因突變

【考點(diǎn)】

基因工程的原理及技術(shù)

【解析】

關(guān)于限制酶，考生可以從以下幾方面把握：

(1)來(lái)源：主要從原核生物中分離純化出來(lái).

試卷第14頁(yè)，總20頁(yè)

(2)特異性：能夠識(shí)別雙鏈DN4分子的某種特定核音酸序列，并且使每一條鏈中特定部

位的兩個(gè)核甘酸之間的磷酸二酯鍵斷裂.

(3)結(jié)果：形成黏性末端或平末端.

【解答】

解：該基因用Bam"/切割得到的400bp,200bp,200如三種長(zhǎng)度的DM4片段，說(shuō)明在

正常人體內(nèi)Bam"/的識(shí)別序列有2個(gè)；用Bam"/切割得到的400加，200bp,200班后,

再用EcoR/再次切割得到100bp,300如，150bp,50bp,200bp,說(shuō)明400bp被切割

成lOObp,300dp,其中一個(gè)200bp被切割成150加,50bp,可見EcoR/識(shí)別序列也有2

個(gè).患者體內(nèi)獲取的這段基因，用BamH/切割得到的區(qū)段變?yōu)?00如，400bp,用

EcoR/再次切割得到lOObp,300fep,150bp,250bp,說(shuō)明有一個(gè)BamH/識(shí)別序列發(fā)

生了基因突變，不能被BamH/切割.

故答案為：

2個(gè)2個(gè)基因突變

16.

【答案】

基因表達(dá)載體的構(gòu)建

【考點(diǎn)】

基因工程的原理及技術(shù)

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

(1)目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸?kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成.

(2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)

子、終止子和標(biāo)記基因等.

(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣.將目的基因

導(dǎo)入植物細(xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱?dòng)

物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞

法.

(4)目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的。N4是否

插入目的基因一一DM4分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRM4-一分子

雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)-抗原-抗體雜交技術(shù).個(gè)體水平上的鑒

定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等.

【解答】

解：基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲?。虎诨虮磉_(dá)載體的

構(gòu)建；③將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞；④目的基因的檢測(cè)與表達(dá).其中，基因表達(dá)載體

的構(gòu)建是基因工程的核心步驟.

故答案為：基因表達(dá)載體的構(gòu)建

三、解答題(本題共計(jì)10小題，每題10分，共計(jì)100分)

17.

【答案】

(1)逆轉(zhuǎn)錄，啟動(dòng)子,終止子

(2)定向

(3)能自我復(fù)制、有標(biāo)記基因、有多個(gè)限制酶切割位點(diǎn),E.co〃DNA連接酶,7；DNA連

接酶,》co〃DNA連接酶

【考點(diǎn)】

基因工程的原理及技術(shù)

【解析】

1.基因文庫(kù)是指將含有某種生物不同基因的許多DNA片段，導(dǎo)入到受體菌的群體中儲(chǔ)

存，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同基因。包括基因組文庫(kù)(包含某種生物所有

的基因)和部分基因文庫(kù)(包含某種生物的部分基因，如cDNA文庫(kù))。

2.PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因(適用于目的基因的核甘酸序列已知的情況)。PCR全稱為聚

合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)，其原理是DNA復(fù)

制，需要模板DNA、四種脫氧核甘酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶)，以指

數(shù)的方式擴(kuò)增。

3.基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心。目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在

并且可以遺傳給下一代并表達(dá)和發(fā)揮作用?；虮磉_(dá)載體的組成：目的基因+啟動(dòng)子+

終止子+標(biāo)記基因。

4.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，如受體細(xì)胞是植物細(xì)胞，常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法(約80%的

轉(zhuǎn)基因植物都是用這種方法獲得的)。具體過(guò)程：目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上好

導(dǎo)入農(nóng)桿菌少導(dǎo)入植物細(xì)胞-目的基因整合到植物細(xì)胞染色體上好目的基因的遺傳特

性得以穩(wěn)定維持和表達(dá)。另外，還可用基因槍法和花粉管通道法；如果受體細(xì)胞是動(dòng)

物細(xì)胞，常用顯微注射技術(shù)；如果受體細(xì)胞是微生物細(xì)胞，用Ca2+處理細(xì)胞玲感受態(tài)

細(xì)胞玲表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合(在緩沖液中)玲一定溫度下，感受態(tài)細(xì)胞吸收

DNA分子，完成轉(zhuǎn)化。

【解答】

解：(D在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，能以抗凍基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA為模板獲得cDNA

片段。為使抗凍基因在番茄細(xì)胞中表達(dá)，需要將目的基因插入載體的啟動(dòng)子和終止子

之間。

(2)轉(zhuǎn)基因抗凍番茄植株的獲得是定向變異的結(jié)果。

(3)質(zhì)粒作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有能自我復(fù)制、有標(biāo)記基因、有多

個(gè)限制酶切割位點(diǎn)等；DNA連接酶是將兩條DNA鏈連接起來(lái)的酶，常見的有

F-co/tDNA連接酶和QDNA連接酶，其中只能連接黏性末端的是E-co〃DNA連接酶。

18.

【答案】

(1)相同的黏性末端，做標(biāo)記基因和破壞APOE基因,帶有被破壞的APOE基因的片段

與胚胎干細(xì)胞中相應(yīng)的片段發(fā)生交換

(2)胚胎移植，不能，脂蛋白的代謝和轉(zhuǎn)化異常

【考點(diǎn)】

基因工程的原理及技術(shù)

【解析】

本題考查基因工程的原理和技術(shù)。

【解答】

(1)在構(gòu)建重組DNA分子過(guò)程中，通常需要用相同的限制性核酸內(nèi)切酶分別切割

APOE基因和載體DNA,形成相同的黏性末端。Neo基因本身是抗新霉素的抗藥基因,

因此可以做標(biāo)記基因；同時(shí)Neo基因插入重組DNA分子中后又能破壞APOE基因。

(2)過(guò)程⑧為胚胎移植。純合的APOE基因敲除小鼠的APOE基因被破壞，不能表達(dá)

APOE。APOE是載脂蛋白E,參與脂蛋白的代謝和轉(zhuǎn)化，因此APOE基因敲除小鼠脂

蛋白的代謝和轉(zhuǎn)化異常。

19.

【答案】

(1)cDNA

(2)PCR,使引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA上

試卷第16頁(yè)，總20頁(yè)

(3)構(gòu)建基因表達(dá)載體，避免目的基因、運(yùn)載體的自身環(huán)化和反向連接，啟動(dòng)子、終止

子

(4)抗原一抗體雜交

【考點(diǎn)】

基因工程的原理及技術(shù)

【解析】

本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)。

【解答】

解：(1)該基因工程中，供體是真核生物的基因，受體是原核生物，由于真核生物基

因中通常有內(nèi)含子，而原核生物基因中沒有，所以要在原核細(xì)胞中表達(dá)出脊椎動(dòng)物

(真核生物)的主要組織相容性復(fù)合體(MHC)控制的MHCH蛋白，需要從不含內(nèi)

含子的cDNA文庫(kù)中獲得該目的基因。

(2)獲取目的基因后常采用PCR技術(shù)，在體外大量擴(kuò)增目的基因。PCR過(guò)程主要包

括高溫變性、低溫復(fù)性和中溫延伸，復(fù)性的目的是“使引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈上”。

(3)基因工程的關(guān)鍵步驟是構(gòu)建基因表達(dá)載體。通常用雙酶切的方法對(duì)目的基因和運(yùn)

載體進(jìn)行切割，可以避免目的基因、運(yùn)載體的自身環(huán)化和反向連接。一個(gè)基因表達(dá)載

體的組成除了目的基因外，還必須有啟動(dòng)子和終止子。

(4)檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)可用抗原一抗體雜交法，從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋

白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原一抗體雜交，若有雜交帶出現(xiàn)，表明目的基因已表達(dá)出

目的蛋白質(zhì)。

20.

【答案】

(1)基因表達(dá)載體的構(gòu)建，從生物材料中分離，人工合成

(2)RNA,除去內(nèi)含子，顯微注射法

(3)3,運(yùn)載體自連、目的基因片段自連、運(yùn)載體與目的基因片段相連的環(huán)狀DNA分

子

【考點(diǎn)】

基因工程的原理及技術(shù)

【解析】

基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲??；②基因表達(dá)載體的構(gòu)建；

③將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞；④目的基因的檢測(cè)與表達(dá)。

從分子水平上檢測(cè)目的基因的方法：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基

因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；

③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。

【解答】

解：(D基因工程的四步基本操作為獲取目的基因、基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基

因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因檢測(cè)與鑒定；獲取目的基因的兩個(gè)方法分別為從目標(biāo)生物

材料中分離獲取或人工合成。

(2)啟動(dòng)子是轉(zhuǎn)錄開始的信號(hào)位點(diǎn)，因此是RNA聚合酶的結(jié)合位點(diǎn)；由于原核細(xì)胞

中缺少對(duì)內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄出的片段進(jìn)行修飾的能力，所以需要在基因中去除內(nèi)含子；動(dòng)物

細(xì)胞進(jìn)行基因表達(dá)載體的導(dǎo)入時(shí)，常常選擇顯微注射法。

(3)同一種限制酶切割基因片段后得到的黏性末端相同，所以加入DNA連接酶后，

相同的黏性末端都有可能連接到一起，因此可能產(chǎn)生三種連接情況，分別為運(yùn)載體自

連、目的基因片段自連、運(yùn)載體與目的基因片段相連的環(huán)狀DNA分子。

21.

【答案】

基因文庫(kù),PCR

限制酶和DNA連接酶，質(zhì)粒

啟動(dòng)子和終止子，抗原-抗體雜交

T-DNA,CaCl2

【考點(diǎn)】

基因工程的原理及技術(shù)

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

(1)目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸?kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

(2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟

動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。

(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基

因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)?/p>

動(dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)

胞法。

(4)目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA

是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--

分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水

平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

【解答】

在基因工程中，獲取目的基因的方法包括：①?gòu)幕蛭膸?kù)中獲取目的基因，②利用

PCR擴(kuò)增目的基因，③化學(xué)方法直接人工合成目的基因。

獲取目的基因時(shí)需要使用限制酶，將目的基因與運(yùn)載體連接時(shí)需要使用限制酶(切割

運(yùn)載體)和DNA連接酶。最常用的運(yùn)載體是質(zhì)粒。

在基因工程中，為使人凝血因子基因在牛乳腺中正確表達(dá)，需將目的基因與啟動(dòng)子和

終止子等調(diào)控組件重組在一起。在分子水平上檢查目的基因是否成功表達(dá)，常用抗原

-抗體雜交法。

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的原理：農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合

到受體細(xì)胞染色體的DNA上。根據(jù)農(nóng)桿菌的這一特點(diǎn)，如果將目的基因插入到Ti質(zhì)

粒的T-DNA上，通過(guò)農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以把目的基因整合到植物細(xì)胞中染色

體的DNA上。因此，欲用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)氲街参锛?xì)胞中，需要將目的基

因插入到農(nóng)桿菌DNA中的T-DNA區(qū)域。將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞常用感受態(tài)細(xì)

胞法，即用Cad2處理細(xì)胞，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。

22.

【答案】

(1)限制性核酸內(nèi)切酶(或限制酶)，DNA連接酶，不含，感受態(tài)

(2)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，不具有,農(nóng)桿菌(或重組Ti質(zhì)粒)中只有T-DNA才能進(jìn)入夾竹桃

細(xì)胞，而抗青霉素基因沒有進(jìn)入夾竹桃細(xì)胞

【考點(diǎn)】

基因工程的原理及技術(shù)

【