分子生物學(xué)考試復(fù)習(xí)重點

分子生物學(xué)重點1.將外源基因?qū)氲姆椒ǔＳ玫幕蚬こ陶婧思毎ń湍讣毎?、動物細胞和植物細胞。?）外源基因?qū)虢湍讣毎涸趯湍讣毎M行外源DNA轉(zhuǎn)化時，一般先需要用酶將其細胞壁消化水解，變成原生質(zhì)體。蝸牛消化酶具有纖維素酶、甘露聚糖酶、葡萄糖酸酶以及幾丁質(zhì)酶等，對酵母菌細胞壁有良好水解作用。原生質(zhì)體在氯化鈣和聚乙二醇存在下，重組DNA能容易地被宿主細胞吸收，轉(zhuǎn)化的原生質(zhì)體懸浮在營養(yǎng)瓶中，即可再生出新的細胞壁。（2）外源基因?qū)雱游锛毎Ｓ玫姆椒ㄓ校?.磷酸鈣共沉淀法。2.DEAE-葡聚糖或聚陽離子，它們能結(jié)合DNA并促使細胞吸收；3.脂質(zhì)體法4.脂質(zhì)轉(zhuǎn)染法5.電穿孔法6.顯微注射法（3）外源基因?qū)胫参锛毎Ｓ玫姆椒ㄓ校?.轉(zhuǎn)化法2.電穿孔和脂質(zhì)體法3.顯微注射法5.基因槍法4.農(nóng)桿菌感染法：根瘤農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上有一段T-DNA，又稱轉(zhuǎn)移DNA，能攜帶外源基因轉(zhuǎn)移到植物細胞內(nèi)，并整合到染色體DNA中，因此Ti質(zhì)粒是目前植物基因工程中最常用的理想的基因載體。2.核糖體活性中心（核糖體的活性位點）（1）mRNA結(jié)合位點（2）P位點（3）A位點（4）肽基轉(zhuǎn)移酶活性位點（轉(zhuǎn)肽酶中心）（5）5SrRNA位點（50S上）（6）E位點（50S上）與氨?；璽RNA釋放有關(guān)。大小亞基在合成中的分工小亞基：對mRNA特殊序列的識別（SD序列）密碼子與反密碼子的相互作用。大亞基：AA-tRNA，肽基－tRNA的結(jié)合，肽鍵的形成等。3.凝膠電泳（操作的主要因素）技術(shù)原理流程圖目的：分離不同的DNA分子電泳遷移率：電泳分子在電場作用下的遷移速度。影響遷移率的因素：（1）與電場強度、電泳分子凈電荷成正比；（2）與電泳分子的摩擦系數(shù)成反比分子摩擦系數(shù)為分子大小、極性、介質(zhì)粘度的函數(shù)。.DNA和RNA在電場中為多聚陰離子，電泳時向正極移動。速度在于分子大小和構(gòu)型。.電泳介質(zhì)：一般用瓊脂糖和聚丙烯酰胺，濃度與所分離的DNA和RNA的大小有關(guān)。（表）.染色劑：溴乙錠4.噬菌體，cDNA文庫建立的基本過程：cDNA：以mRNA為模板，利用逆轉(zhuǎn)錄酶（反轉(zhuǎn)錄酶）合成的DNAcDNA文庫（過程）：由cDNA的一套隨機片段構(gòu)成，其中每個片斷連在一個單獨的載體分子上，儲存在宿主（大腸桿菌、噬菌體等）中。建立cDNA文庫的意義：含有生物大部分基因，不含內(nèi)含子序列，方便基因的篩選、克??；特別可以獲得特殊器官、組織和特殊時期表達的基因等。主要技術(shù)步驟：（1）高質(zhì)量mRNA的制備（2）反轉(zhuǎn)錄生成cDNA（3）與噬菌體載體分子連接（4）噬菌體的包裝3．DNA和cDNA文庫的建立A基因組DNA文庫：將某生物的基因組DNA切成適當(dāng)大小，分別與載體組合，導(dǎo)入微生物細胞形成克隆。匯集包含基因組中所有DNA序列的克隆的匯總，就謂之。用途：基因組測序，特定基因的分離等。步驟：1.制備大小合適的隨機DNA片段；2.將這些片段與適當(dāng)載體結(jié)合形成重組子；3.轉(zhuǎn)化到微生物細胞中；4.篩選有目的片段的克隆。（圖）要求：全部克隆所含的DNA片段必需覆蓋整個基因組。隨機切割和增加克隆數(shù)目可以提高代表性。載體與克隆能力：λ噬菌體15～20kb柯斯質(zhì)粒45kb細菌人工染色體（BAC）酵母人工染色體（YAC）等70～1000kbRACE技術(shù)基因敲除技術(shù)：基因敲除又稱基因打靶，該技術(shù)通過外源DNA與染色體DNA之間的同源重組，進行精確的定點修飾和基因改造，具有專一性強、染色體DNA可與目的片段共同穩(wěn)定遺傳等特點基因芯片：在一微小基片的表面集成大量DNA分子探針，能夠在同一時間內(nèi)平行分析大量的基因，進行大信息量的篩選與檢測分析。（指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接將大量的DNA探針以顯微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后對雜交信號的監(jiān)測分析，即可獲得樣品的遺傳信息。）RNAi技術(shù)原理乳糖操縱子。、、反式作用因子順式作用元件13.DNA的大小溝的作用P34形成溝狀結(jié)構(gòu)是DNA與蛋白質(zhì)相互作用所必需的，這樣DNA結(jié)合蛋白與DNA修飾蛋白中特定的氨基酸才能與對應(yīng)的堿基相互作用。前導(dǎo)鏈，后隨鏈：RNA引物合成物質(zhì)mRNA修飾填空題1.已知核糖體上有哪些活性部位？它們在多肽合成中各起什么作用？答：核糖體上具有一系列與蛋白質(zhì)合成有關(guān)的結(jié)合位點與催化位點：①與mRNA的結(jié)合位點；②與新?lián)饺氲陌滨RNA的結(jié)合位點――氨?；稽c，又稱A位點，又叫受位；③與延伸中的肽酰tRNA的結(jié)合位點――肽酰基位點，又稱P位點，也叫供位；④肽酰轉(zhuǎn)運后與即將釋放的tRNA的結(jié)合位點――E位點，是中間聽靠站；⑤與肽酰tRNA從A位點轉(zhuǎn)移到P位點有關(guān)的轉(zhuǎn)移酶(即延伸因子EF-G)的結(jié)合位點；⑥肽酰轉(zhuǎn)移酶的催化位點。此外還有與蛋白質(zhì)合成有關(guān)的其他起始因子、延伸因子和終止因子的結(jié)合位點。核糖體的活性位點（1）mRNA結(jié)合位點位于30S亞基的頭部，16S3’（2）P位點由30亞基（大部）＋50亞基（小部）組成，供肽酰－tRNA結(jié)合。亦可與起始tRNA即fMet-tRNA相結(jié)合。（3）A位點主要由50S亞基上的活性部位組成，供AA-tRNA結(jié)合。（4）肽基轉(zhuǎn)移酶活性位點（轉(zhuǎn)肽酶中心）位于P位與A位連接處。（5）5SrRNA位點（50S上）靠近轉(zhuǎn)移酶位點，可能與tRNA進入有關(guān)。（6）E位點（50S上）與氨?；璽RNA釋放有關(guān)。2.原核生物基因組特點：（1）結(jié)構(gòu)簡練。除必要的間隔，不轉(zhuǎn)錄的序列極少。（2）存在轉(zhuǎn)錄單元。多順反子mRNA和操縱子。（3）有重組基因。a基因套另一個基因，b部分重疊c只有一個堿基重疊，閱讀框相同和不相同。真核生物基因組特點：（1）真核基因組龐大。（2）真核基因組存在大量的重復(fù)序列。（3）真核基因組大部分為非編碼序列，占90%以上。（4）真核基因組的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子。（5）真核基因組是斷裂基因，有內(nèi)含子結(jié)構(gòu)。（6）真核基因組存在大量的順式作用元件。（7）真核基因組中存在大量的DNA多態(tài)性。（8）真核基因組具有端粒結(jié)構(gòu)。3.用于基因克隆的常用酶：脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、DNA聚合酶、末端轉(zhuǎn)移酶、TaqDNA聚合酶、同尾酶、同裂酶。一、限制性內(nèi)切酶二、甲基化酶三、T4-DNA連接酶四、核酸酶五、聚合酶六、DNA修飾酶表1基因工程常用的工具酶酶主要用途限制性核酸內(nèi)切酶識別DNA特定序列，DNA聚合酶I或其大片段（1）缺口平移制作標記DNA探針（2）合成cDNA第二鏈（3）填補雙鏈DNA3′凹端（4）DNA序列分析耐熱DNA聚合酶聚合酶鏈反應(yīng)DNA連接酶連接兩個DNA分子或片段多核苷酸激酶催化多核苷酸5′羥基末端磷酸化，制備末端標記探針末端轉(zhuǎn)移酶在3′末端加入同質(zhì)多聚物尾SI核酸酶降解單鏈DNA或RNA，使雙鏈DNA突出端變?yōu)槠蕉薉NA端酶I降解DNA，在雙鏈DNA上產(chǎn)生隨機切口RNA酶A降解去除RNA磷酸酶切除核酸末端4.DAN的結(jié)構(gòu)DNA的二級結(jié)構(gòu)是指兩條多核苷酸鏈反向平行盤繞所生成的雙螺旋結(jié)構(gòu)。通常情況下,DNA的二級結(jié)構(gòu)分兩大類:右手螺旋(A-DAN,B-DNA)和左手螺旋(Z-DNA).DNA的兩條反向平行的多核苷酸鏈圍繞同一中心軸構(gòu)成螺旋結(jié)構(gòu).多核苷酸的方向由核苷酸間的磷酸二酯鍵的走向決定,一條從5'→3',另一條從3'→5'.鏈間有螺旋型的凹槽,其中一條較淺,叫小溝;一條較深,叫大溝.兩條鏈上的堿基以氫鍵相連,DNA的高級結(jié)構(gòu)是指DNA雙螺旋進一步扭曲盤繞所形成的特定空間結(jié)構(gòu).超螺旋結(jié)構(gòu)是DNA高級結(jié)構(gòu)的主要形式,可分為正超螺旋與負超螺旋兩大類.5.真核生物染色體的結(jié)構(gòu)（1）真核細胞染色體的組成

真核細胞的染色體由DNA,組蛋白,非組蛋白及部分RNA組成,其蛋白質(zhì)與相應(yīng)DNA的質(zhì)量比約為2:1.（2）染色體上的蛋白質(zhì)主要包括組蛋白和非組蛋白.組蛋白是染色體的結(jié)構(gòu)蛋白,它與DNA組成核小體（3）真核細胞基因組的最大特點是它含有大量的重復(fù)序列,而且功能DNA序列大多被不編碼蛋白質(zhì)的非功能DNA所隔開.許多DNA序列不編碼蛋白質(zhì),是無生理功能的.真核細胞DNA序列大致上可被分為3類:(1)不重復(fù)序列(2)中度重復(fù)序列(3)高度重復(fù)序列――衛(wèi)星DNA（4）染色質(zhì)和核小體

由DNA和組蛋白組成的染色質(zhì)纖維細絲是許多核小體連成的念珠狀結(jié)構(gòu).核小體是由H2A,H2B,H3,H4各兩個分子生成的8聚體和由大約200bpDNA組成的6原核生物聚合酶的結(jié)構(gòu)及各部分功能答：聚合酶全酶＝核心酶＋σ因子核心酶又由2個α亞基，一個β亞基，一個β’亞基和一個ω亞基組成。功能：核心酶催化轉(zhuǎn)錄的延長過程；σ因子辨別轉(zhuǎn)錄起點。核心酶各部分功能：α亞基：使酶專一識別模板上的啟動子；幫助核心酶選擇模板鏈。β亞基和β’亞基：β和β’共同形成RNA合成的活性中心。mRNA的剪接方式答：組成型剪接：有序的，固定的剪接方式。特異性剪接：有選擇的，非固定的剪接方式，內(nèi)含子的變位剪接。果蠅性別分化相關(guān)基因的特異性剪接（圖）真核生物DNA分類答：（1）不重復(fù)序列：這些序列一般只有一個或幾個拷貝，它占DNA總量的大多數(shù)；基因擴增（放大作用）；一般為結(jié)構(gòu)基因。（2）中度重復(fù)序列：這些序列的重復(fù)次數(shù)在10-104，占總DNA的10%-40%。例如，tRNA基因；rRNA基因；組蛋白基因等。（3）高度重復(fù)序列_——衛(wèi)星DNA這類DNA只在真核生物中發(fā)現(xiàn)；離心時可顯示出多個峰；是異染色質(zhì)的組成部分。9細胞RNA種類答：RNA可分成多種類型，除信使RNA（mRNA），轉(zhuǎn)移RNA（tRNA）和核糖體RNA（rRNA）外，還有真核生物結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA前體分子，因分子大小很不均一，稱核內(nèi)不均一RNA(hnRNA)。許多種小分子RNA，如核內(nèi)小RNA(snRNA)，反義RNA(asRNA)等。10原核基因的調(diào)節(jié)機制及特點。（不確定，僅供參考。原題是原核細胞調(diào)節(jié)特點）答：負調(diào)節(jié)（負轉(zhuǎn)錄調(diào)控）：調(diào)節(jié)物為抑制物，使轉(zhuǎn)錄關(guān)閉，解除抑制的物質(zhì)稱為誘導(dǎo)物。正調(diào)節(jié)（正轉(zhuǎn)錄調(diào)控）：調(diào)節(jié)物為激活物，使轉(zhuǎn)錄開放。正、負調(diào)節(jié)可以同時在一個調(diào)節(jié)系統(tǒng)中起作用。11、常見的DNA結(jié)合域結(jié)構(gòu)形式包括：鋅指結(jié)構(gòu)、螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋結(jié)構(gòu)、堿性-螺旋-環(huán)-螺旋、堿性-亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)12、基因表達調(diào)控可在多個層次上進行，包括基因（染色體）水平、轉(zhuǎn)錄水平、轉(zhuǎn)錄后（RNA加工成熟）水平、翻譯水平、翻譯后（蛋白質(zhì)加工）水平13、原核生物RNA聚合酶的組分：核心酶（2個α亞基、一個β亞基、一個β’亞基、和一個ω亞基組成）+σ亞基14、真核生物染色體的基本成分：DNA、組蛋白、非組蛋白、部分RNA;核小體的組成：由H2A、H2B、H3、H4各兩個分子生成的八聚體和大約200bp的DNA組成。簡答題DNA變性復(fù)性的含義和條件DNA變性：在加熱或強酸或堿性作用的條件下，DNA雙螺旋的氫鍵斷裂，雙鏈解離，形成單鏈DNA的過程。DNA復(fù)性：在解除變性的條件后，變性的單鏈DNA重新結(jié)合起來，形成雙鏈，其原有的特性和活性可以恢復(fù)的過程。２、mRNA在總RNA所占比例少的原因（１）mRNA的半衰期。短轉(zhuǎn)錄開始1min后，降解可能就已經(jīng)開始。一般半衰期為2min。轉(zhuǎn)錄蛋白的量取決于轉(zhuǎn)錄和翻譯的起始效率。（2）DNA轉(zhuǎn)錄的mRNA少(3)容易降解3、蛋白質(zhì)的合成所需蛋白因子起始因子：IF-1促進IF-2，IF-3的功能；IF-2協(xié)助fMet-tRNAfmet與30S亞基結(jié)合，進而進入P位;IF-3促進70S核糖體解離（對前一次合成），促進mRNA與30S亞基結(jié)合。延伸因子：EF-Tu協(xié)助將AA-tRNA帶入A位，不能與起始tRNA作用;EF-Ts使行使功后的EF-Tu.GDP重新活化，再生位EF-Tu.GTPEF-G負責(zé)延伸過程中的移位、耗能，肽基－tRNA從A→P,mRNA移動一個密碼子的距離。終止因子：識別終止密碼，終止合成，釋放核糖體。RF-1：識別UAA，UAGRF-2：識別UAA，UGA;RF-3：協(xié)助上述兩個因子。4、原核生物代謝作用：葡萄糖對其他糖代謝的影響（葡萄糖效應(yīng)）葡萄糖在糖酵解途徑中產(chǎn)生的某些代謝物是腺苷酸環(huán)酶活性的抑制劑，腺苷酸環(huán)酶活性是ATP轉(zhuǎn)化成cAMP的催化劑。當(dāng)原核生物內(nèi)有葡萄糖時，在葡萄糖代謝的影響下cAMP的量減少，cAMP－CRP復(fù)合物減少而無法啟動乳糖操縱子的正調(diào)節(jié)，乳糖操縱子不表達5、不同堿基合成核苷酸鏈破譯密碼子理論上的推測：mRNA有四種核苷酸，而蛋白質(zhì)中有20種氨基酸。若二聯(lián)子：排列方式有42＝16種，不夠代表20種氨基酸。若三聯(lián)子：排列方式有43＝64種，即有64種密碼子，可以滿足20種氨基酸的需要。6、組蛋白與非組蛋白有哪些生物特性組蛋白的生物特性：1）進化上的保守性（2）無組織特異性（3）氨基酸分布不對稱（4）化學(xué)修飾：磷酸化甲基化乙酰化（5）組蛋白H5具有種特異性非組蛋白的生物特性：（1）多樣性（2）組織專一性（3）種屬專一性7.操縱子（lac,trp弱化）原核生物中為功能相關(guān)的幾個蛋白質(zhì)編碼的一組結(jié)構(gòu)基因，加上啟動序列、操縱序列以及其它調(diào)節(jié)序列串聯(lián)組成的轉(zhuǎn)錄單位稱為操縱子。乳糖操縱子的組成和功能結(jié)構(gòu)基因lacZ、lacY、lacA。編碼利用乳糖的三個酶（β-半乳糖苷酶、透性酶、乙?；D(zhuǎn)移酶）；啟動基因lacP。RNA聚合酶識別位點；操縱基因lacO。阻遏蛋白結(jié)合位點；調(diào)節(jié)基因lacI。編碼阻遏蛋白，阻遏蛋白與lacO結(jié)合，使操縱子受阻遏而處于轉(zhuǎn)錄抑制；在lacP上游還有一個分解（代謝）物基因激活蛋白CAP結(jié)合位點。乳糖操縱子的調(diào)控機制阻遏蛋白的負性調(diào)節(jié)：lacI表達的阻遏蛋白與lacO結(jié)合，阻止RNA聚合酶起始轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)基因，異構(gòu)糖可結(jié)合阻遏蛋白，使其變構(gòu)而與lacO解離。CAP的正性調(diào)節(jié)：cAMP與CAP結(jié)合，啟動正性調(diào)節(jié)，CAP-cAMP復(fù)合物結(jié)合在乳糖啟動序列附近的CAP位點，促進結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄。協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)：當(dāng)阻遏蛋白封閉轉(zhuǎn)錄時，CAP對該系統(tǒng)不能發(fā)揮作用；但如果沒有CAP來加強轉(zhuǎn)錄活性，即使阻遏蛋白從操縱序列上解離仍無轉(zhuǎn)錄活性。色氨酸操縱子包括：啟動子、調(diào)節(jié)基因及五個結(jié)構(gòu)基因，分別編碼色氨酸合成有關(guān)的5種酶。色氨酸操縱子具有負控阻遏調(diào)節(jié)系統(tǒng)：環(huán)境中有色氨酸時，色氨酸與輔阻遏蛋白結(jié)合形成有活性的阻遏物，與操縱子結(jié)合關(guān)閉色氨酸mRNA的轉(zhuǎn)錄。色氨酸操縱子還具有弱化子調(diào)控系統(tǒng)：弱化子是具有終止作用的DNA序列，這種終止作用是可以被調(diào)節(jié)的。（4）弱化子調(diào)控的過程：色氨酸操縱子具有前導(dǎo)序列，弱化子位于前導(dǎo)序列上。前導(dǎo)序列可分為1、2、3、4區(qū)，其中可出現(xiàn)1區(qū)和2區(qū)配對，區(qū)和4區(qū)配對或2區(qū)和3區(qū)配對兩種情況。當(dāng)出現(xiàn)1區(qū)與2區(qū)配對，3區(qū)和4區(qū)配對時是終止轉(zhuǎn)錄信號，而2區(qū)與3區(qū)配對是可以繼續(xù)轉(zhuǎn)錄下去的。當(dāng)環(huán)境中色氨酸濃度高時，形成1區(qū)與2區(qū)配對，3區(qū)和4區(qū)配對，RNA聚合酶可以通過弱化子，使轉(zhuǎn)錄繼續(xù)進行。這個階段是trp操縱子的細微調(diào)控。8.構(gòu)建分子克隆載體所需的條件？分子克隆的步驟？分子克隆載體所需條件：①能在宿主細胞內(nèi)獨立進行高效的自我復(fù)制。②具備比較容易識別的篩選標志。③分子量大小適當(dāng)，與載體的外源基因大小有關(guān)。④容易進入宿主細胞。⑤具有適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切酶的單一酶切位點，即多克隆位點，該位點通常不能位于選擇性標記基因內(nèi)。⑥高拷貝。分子克隆步驟：①目的基因的制備。②基因載體的選擇。③目的基因和載體的剪切。④目的基因和載體的連接。⑤宿主細胞的轉(zhuǎn)化（重組DNA分子導(dǎo)入宿主細胞，從而獲得新的遺傳特性）。⑥重組體的篩選和鑒定。⑦克隆基因的表達及表達產(chǎn)物的檢測和分離純化。可簡單地概述為：分、切、接、轉(zhuǎn)、篩、撿。9.基因定點突變的技術(shù)原理對已知基因序列設(shè)計突變位點，合成短核苷酸引物，突變的核苷酸包含其中。與原基因進行分子雜交，再復(fù)制擴增，成為帶有突變位點的新基因（或基因片段）。10．真核生物內(nèi)含子被剪切（剪切類型、接口類型等）序列分析表明，幾乎每個內(nèi)含子5’端起始的兩個堿基都是GT，而3’端最后兩個堿基總是AG，由于這兩個堿基的高度保守性和廣泛性，有人把它稱為GT-AG法則，即：5’GT……AG3’。由于內(nèi)含子兩末端的序列不同，可定向表明內(nèi)含子的兩個末端，根據(jù)剪接加工過程沿內(nèi)含子自左向右進行的原則，一般將內(nèi)含子11.原核基因轉(zhuǎn)錄能精確進行相關(guān)的序列、結(jié)構(gòu)必不可少的三個序列：-35(RNA聚合酶結(jié)合位點)、-10(RNA榮合酶起始位點)啟動子序列和終止子；12.安慰性誘導(dǎo)物、作用、例子、定義。答：安慰誘導(dǎo)物是一種與天然誘導(dǎo)物結(jié)構(gòu)相似的化合物，它雖然能誘導(dǎo)操縱子表達，但是它不能被操縱子基因產(chǎn)生的酶分解。在lac操縱子中異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是乳糖的類似物能代替異乳糖作為誘導(dǎo)物，但不能作為β-半乳糖苷酶的底物進入代謝途徑。

為了證實誘導(dǎo)物的作用是誘導(dǎo)新酶合成，而不是將已存在于細胞中的酶前體轉(zhuǎn)化成有活性的酶，科學(xué)家設(shè)計了同位素示蹤實驗。他們把大腸桿菌細胞放在有放射性35S標記的氨基酸但沒有任何半乳糖苷誘導(dǎo)物的培養(yǎng)基中繁殖幾代，然后再將這些帶有放射活性的細菌轉(zhuǎn)移到不含35S、無放射性的培養(yǎng)基中，隨著培養(yǎng)基中誘導(dǎo)物的加入。β-半乳糖苷酶便開始合成。分離純化β-半乳糖苷酶，發(fā)現(xiàn)這種酶無35S標記，說明酶的合成不是由前體轉(zhuǎn)化而來的，而是加入誘導(dǎo)物后新合成的。P23913.DNA的大小溝的作用P34形成溝狀結(jié)構(gòu)是DNA與蛋白質(zhì)相互作用所必需的，這樣DNA結(jié)合蛋白與DNA修飾蛋白中特定的氨基酸才能與對應(yīng)的堿基相互作用。14轉(zhuǎn)座子分類，轉(zhuǎn)移特點P57轉(zhuǎn)座子是存在于染色體DNA上可自我復(fù)制和移位的基本單位。轉(zhuǎn)座子分為兩大類：插入序列和復(fù)合型轉(zhuǎn)座子。復(fù)合式轉(zhuǎn)座子：帶有抗藥基因或其他宿主基因的轉(zhuǎn)座子，其兩翼是兩個IS。形成復(fù)合轉(zhuǎn)座子后，兩側(cè)的IS不可再單獨移動。轉(zhuǎn)移特點來源參考書可能的答案：1.保守型轉(zhuǎn)座，即插入序列從原位點移至新位點2.復(fù)制型轉(zhuǎn)座，即插入序列復(fù)制后，其中的一個拷貝移至新位點，另一個仍保留在原位點。15真DNA甲基化（增強，減弱）構(gòu)象變化P293DNA甲基化導(dǎo)致某些區(qū)域DNA構(gòu)象變化，從而影響了蛋白質(zhì)與DNA的相互作用，抑制了轉(zhuǎn)錄因子與啟動區(qū)DNA的結(jié)合效率。研究表明，當(dāng)組蛋白H1與含CCGG序列的甲基化或非甲基化DNA分別形成復(fù)合體時，DNA的構(gòu)型存在著很大的差別，甲基化達到一定程度時會發(fā)生從常規(guī)的B－DNA向Z—DNA的過渡。由于Z-DNA結(jié)構(gòu)收縮，螺旋加深，使許多蛋白質(zhì)因子賴以結(jié)合的元件縮入大溝而不利于基因轉(zhuǎn)錄的起始。有實驗用序列相同但甲基化水平不同的ＤＮＡ為材料，比較其作為ＲＮＡ聚合酶轉(zhuǎn)錄模板的活性，發(fā)現(xiàn)甲基的引入不利于模板與ＲＮＡ聚合酶的結(jié)合，降低了其體外轉(zhuǎn)錄活性。16調(diào)控分子:e.g激素(激素受體蛋白)17.色氨酸操縱子作用機理可能的答案:（1）色氨酸操縱子包括啟動子,調(diào)節(jié)基因及五個結(jié)構(gòu)基因,分別編碼色氨酸合成有關(guān)的5種酶。（2）色氨酸操縱子具有負控阻礙調(diào)節(jié)系統(tǒng)環(huán)境中有色氨酸時，色氨酸與輔阻遏蛋白結(jié)合形成有活性的阻遏物，與操縱區(qū)結(jié)合關(guān)閉色氨酸mRNA的轉(zhuǎn)錄。（3）色氨酸操縱子還具有弱化子調(diào)控系統(tǒng)弱化子是具有終止作用的DNA序列，這種終止作用是可以被調(diào)節(jié)的。色氨酸主要利用翻譯轉(zhuǎn)錄的偶聯(lián)作用對基問答題1真核啟動子的順勢作用元件及反式作用因子:(1)順式作用元件（啟動子、增強子），是啟動子上下游的特定序列；A啟動子核心啟動子＋上游啟動子元件＝啟動子a.核心啟動子:-25～-30的TATA區(qū)（TATAbox），是控制轉(zhuǎn)錄起始精確性和基礎(chǔ)水平的轉(zhuǎn)錄的序列。b.上游啟動子元件（UPE）或上游激活序列（UAS）:-70～-80CCAAT區(qū)（CAATbox），-80～-110GCCACACCC區(qū)，或GGGCGG區(qū)（GCbox），控制轉(zhuǎn)錄的頻率的序列。其他UPE:ATGCAAAT等；所有的UPE的序列都與特定的轉(zhuǎn)錄因子有關(guān)。并非每一個基因的啟動子區(qū)都包含這三個區(qū)。RNA聚合酶與UPE結(jié)合，機理尚不明。B增強子：是增加轉(zhuǎn)錄速率的DNA序列。結(jié)構(gòu)：增強子的亞單位謂之增強子元（單元）。一個增強子必需要兩個或以上的亞單位（正向重復(fù)序列），而且緊密相連才有功能。特點：a增強效應(yīng)明顯，10～200倍b遠距離作用，無方向性，上游活下游都有作用c大多重復(fù)序列，一般50bp，核心序列為TGGA/TA/TA/T(G),與蛋白因子結(jié)合d有組織特異性，與特異轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合才有功能e沒有基因的專一性,可以在不同的基因組合上表現(xiàn)增強效應(yīng)例子：人巨大細胞病毒經(jīng)增強子增強后的珠蛋白基因表達頻率比該基因正常轉(zhuǎn)錄高600-1000倍增強子可能有以下三種作用機理：a影響模板附近DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致DNA雙螺旋彎折或在反式作用因子的參與下，以蛋白質(zhì)之間的相互作用為媒介形成增強子與啟動子成環(huán)連接，活化轉(zhuǎn)錄基因b將模板固定在細胞核內(nèi)特定位置，入連接在核基質(zhì)上，有利于DNA拓撲異構(gòu)酶改變DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的張力，促進RNA聚合酶Ⅱ在DNA鏈上的結(jié)合和滑動c增強子區(qū)可以作為反式作用因子或RNA聚合酶Ⅱ進入染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的“入口”（2）反式作用因子A基因的所有順式作用元件包括UPE和增強子都要和相應(yīng)的反式作用因子結(jié)合，并通過蛋白質(zhì)之間的相互作用才能實現(xiàn)對轉(zhuǎn)錄的調(diào)控。B功能性結(jié)構(gòu)①螺旋－轉(zhuǎn)折－螺旋（H-T-H）結(jié)構(gòu)（圖）結(jié)構(gòu)特點：兩個α螺旋，中間以“轉(zhuǎn)折”相連。與DNA結(jié)合區(qū)：近羧基端的α螺旋。②鋅指（zinefinger）結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)特點：一對半胱氨酸（Cys）和一對半胱氨酸，或一對半胱氨酸和一對組氨酸（His）與鋅原子以配位鍵結(jié)合；半胱氨酸和半胱氨酸，或半胱氨酸與組氨酸之間的氨基酸殘基數(shù)目基本恒定；鋅原子為中心，一邊是α螺旋，一邊是反向平行的β片層。多個鋅指可結(jié)合一起。③堿性－亮氨酸拉鏈（bZIP）結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)特點：蛋白羧基端35個氨基酸殘基形成α螺旋，每隔6個有一個亮氨酸殘基，形成亮氨酸位于一邊的α螺旋（相當(dāng)于拉鏈的一半），與另一相同的蛋白的α螺旋結(jié)合，由兩個α螺旋的亮氨酸一側(cè)形成疏水區(qū)（形成拉鏈）；蛋白的氨基端20～30富含堿性氨基酸。④堿性－螺旋－環(huán)－螺旋（bHLH）結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)特點：蛋白羧基端有2個α螺旋，中間隔以非螺旋的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，氨基端是堿性區(qū)。⑤同源域蛋白結(jié)構(gòu)特點：60個保守氨基酸序列，具有H-T-H結(jié)構(gòu)C幾種