實驗八 中性粒細胞吞噬功能檢測

實驗八中性粒細胞吞噬功能檢測實驗七思考題：為何常用密度為1.077土0.002的分層液分離人單個核細胞？答：這和人外周血中各類成分密度有關(guān)。血小板：1.030-1.035，淋巴細胞：1.075-1.090，粒細胞:1.092，紅細胞：1.093，因此將血液疊加在1.077土0.002的分層液上面，經(jīng)離心會單個核細胞會處于血漿和分離液中間，從而達到分離目的。實驗八中性粒細胞吞噬功能檢測臨床微生物及免疫學(xué)檢驗教研室一、實驗?zāi)康恼莆罩行粤＜毎淌晒δ茉囼灥脑?。熟悉中性粒細胞吞噬功能試驗的操作方法。二、實驗原理中性粒細胞具有吞噬細菌和異物顆粒的能力。在體外將中性粒細胞與細菌或異物顆粒共同孵育后，即可被中性粒細胞吞噬、攝入，顯微鏡觀察可見中性粒細胞內(nèi)有細菌或異物顆粒。二、實驗原理計算吞噬有細菌或異物顆粒的中性粒細胞數(shù)占中性粒細胞總數(shù)的百分率和每個中性粒細胞平均吞噬細菌或異物顆粒數(shù)，可反應(yīng)中性粒細胞的吞噬功能。三、實驗器材標本：人抗凝血被吞噬物：金黃色葡萄球菌培養(yǎng)基：肉湯培養(yǎng)基試劑：瑞－吉氏染液、無菌生理鹽水器材：枸櫞酸鈉抗凝管、試管、載玻片、

恒溫箱、顯微鏡等。制備被吞噬物：金葡菌接種于肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)12h后，置4℃?zhèn)溆谩?.準備被檢測標本：枸櫞酸鈉抗凝血1ml。四、實驗步驟實驗步驟混合培養(yǎng)：在1ml抗凝血中加入金葡菌懸液3-5滴，混勻，置37℃水浴箱中，孵育30min，期間每10min搖勻1次。制備細胞推片，瑞-吉染色：油鏡觀察：計數(shù)200個中性粒細胞，記錄吞噬細菌的細胞數(shù)和每個中性粒細胞吞入的細菌數(shù)。五、結(jié)果判斷中性粒細胞核深染且分葉，胞漿淡紅色，細菌呈紫色-吞噬百分率（%）=×100％吞噬指數(shù)=參考區(qū)間：吞噬率（91

+

5.8）%；吞噬指數(shù)大于1計數(shù)的中性粒細胞吞噬細菌總數(shù)計數(shù)的中性粒細胞總數(shù)吞噬細菌的中性粒細胞數(shù)計數(shù)的中性粒細胞總數(shù)

-六、注意事項1.抗凝劑的選擇：肝素抗凝時白細胞著色不佳，經(jīng)瑞-吉染色后易出現(xiàn)深藍色背景；EDTA影響

白細胞的吞噬功能；構(gòu)椽酸鈉抗凝最合適。2.細菌的濃度和孵育溫度：3.血涂片的質(zhì)量：七、應(yīng)用與評價本試驗可用于檢測有吞噬功能障礙的病癥，如結(jié)合NBT（硝基藍四氮唑還原試驗），在一定程度上可反映機體的免疫功能狀態(tài)，也可用于有免疫調(diào)節(jié)活性藥物的篩選。此法操作簡便，不需特殊設(shè)備