超臨界萃取技術(shù)課件

超臨界萃取技術(shù)

一、超臨界萃取技術(shù)臨界溫度：32℃一、超臨界萃取技術(shù)

1、三相點(diǎn)和臨界點(diǎn)臨界點(diǎn)：液、氣兩相呈平衡狀態(tài)的點(diǎn)。臨界溫度：在臨界點(diǎn)時(shí)的溫度。臨界壓力：在臨界點(diǎn)時(shí)的壓力。2、超臨界流體

物體處于其臨界溫度和臨界壓力以上時(shí)的狀態(tài)。氣體：粘稠度、表面張力低，溶解能力強(qiáng)，萃取功能高。壓力↑，溶解能力↑。液體：體積小。流體名稱分子式臨界壓力(bar)臨界溫度(℃)臨界密度(g/cm3)二氧化碳CO272.931.20.433水H2O217.6374.20.332氨NH3112.5132.40.235乙烷C2H648.132.20.203氧化二氮N2O71.736.50.4503、超臨界流體的性質(zhì)4、特點(diǎn)⑴在35～40℃下提?、聘蓛舻奶崛》椒á荂O2是一種不活潑的氣體。⑷循環(huán)使用，降低成本。⑸參數(shù)可以調(diào)節(jié)流動相二、微波萃取微波金屬水分二、微波萃取二、微波萃取1、微波頻率：300—300000MHz的電磁波。穿透：玻璃、塑料、陶瓷等絕緣體。當(dāng)微波作用于水和酸性物質(zhì)時(shí)，將被極性分子所吸收，因而物質(zhì)很快被加熱。2、工作原理吸收微波→細(xì)胞內(nèi)部溫度↑，→細(xì)胞內(nèi)部壓力超過細(xì)胞壁膨脹承受能力→細(xì)胞破裂→有效成分自由流出。3、影響因素㈠萃取溫度的影響㈡萃取溶劑的影響㈢樣品杯：聚四氟乙烯三、超聲波輔助萃取能量→外部向內(nèi)部→傳遞。超聲波使溶液形成氣泡（空化效應(yīng)）→爆裂→溫度和壓力↑，→增強(qiáng)化學(xué)反應(yīng)能力。三、超聲波輔助萃取優(yōu)點(diǎn)：價(jià)廉快速，簡便安全，批量處理樣品。四、衍生化技術(shù)化學(xué)反應(yīng)→定量生成→適于分析。1、衍生化的目的①靈敏度與選擇性②改善色譜分離：揮發(fā)性、降低與色譜材料的相互作用③理化穩(wěn)定性2、分類柱前衍生化：為了分離柱后衍生化：為了檢測3、氣相色譜的衍生化（1）硅烷化衍生化方法（2）酯化衍生化方法（3）鹵化衍生化方法（4）酚化衍生化方法方法（1）、硅烷化衍生化方法利用醇，酚，酸，胺等與硅烷化試劑反應(yīng)，形成揮發(fā)性的硅烷衍生物R3Si—X+H—R`R3Si—R`+H—X（2）酯化衍生化方法大多數(shù)有機(jī)酸揮發(fā)性、熱穩(wěn)定性差。在GC分析之前衍生為相應(yīng)的酯。①甲醇法②重氮甲烷法③三氟乙酸配法①甲醇法甲醇法有機(jī)酸與甲醇在催化劑的存在下加熱，可以發(fā)生酯化反應(yīng)，生成有機(jī)酸的甲酯RCOOH+CH3OH催化劑RCOOCH3+H2O△②重氮甲烷法與有機(jī)酸反應(yīng)，生成有機(jī)酸的甲酯，重氮甲烷不穩(wěn)定，有爆炸性，有毒。RCOOH+CH2N2RCOOCH3+N2（3）、鹵化衍生化方法引入鹵原子→ECD檢測器→也改善揮發(fā)性和穩(wěn)定性。

鹵素的作用是加成或取代

4、液相色譜的衍生化1.紫外衍生化反應(yīng)2．熒光衍生化反應(yīng)3．電化學(xué)衍生化反應(yīng)（1）紫外衍生化反應(yīng)苯甲酰氯+胺、醇、酚→苯甲酸酯類衍生物（２００～３６０ｎｍ）

苯甲酰化反應(yīng)（2）熒光衍生化反應(yīng)在目標(biāo)化合物上接上能發(fā)出熒光的生色基團(tuán)，如熒光素。5、制備衍生物的反應(yīng)罐瓶五、生物大分子的細(xì)胞破碎與蛋白質(zhì)的去除（一）、生物樣品植物：營養(yǎng)成分、農(nóng)藥殘留等動物：體內(nèi)的藥物及代謝產(chǎn)物、糖類、維生素、氨基酸等微生物：待測物的位置體液或細(xì)胞外：采用萃取方法。也可將干擾組分（如蛋白質(zhì)、DNA、多糖等等）沉淀除去。生物細(xì)胞內(nèi)：首先將細(xì)胞破碎，再采用萃取或沉淀等方法。（二）、細(xì)胞的破碎目的：就是為了破壞細(xì)胞的外殼，使細(xì)胞內(nèi)含物有效地釋放出來，獲得有效的提取。1、細(xì)胞的破碎方法①組織較柔軟：勻漿器研磨②組織較韌：鉸碎→勻漿③纖維組織：搗碎器破碎或加砂研磨。④微生物堅(jiān)韌的細(xì)胞壁：用自溶、冷熱交替、加砂研磨、超聲波和加壓處理。1、細(xì)胞的破碎方法2、機(jī)械法（機(jī)械切力）①高速組織搗碎機(jī)：20000r／min。對象：動植物組織②勻漿器：鉸碎組織。對生物大分子破壞較少。③研磨：玻璃砂。3、物理法（物理作用）①反復(fù)凍融法：-15～-20℃。②冷熱交替法：90℃維持?jǐn)?shù)分鐘，立即置于冰浴中冷卻。③超聲波處理法：用于微生物。④加壓破碎法：加氣壓或水壓，可使90％以上細(xì)胞被壓碎。4、化學(xué)及生物化學(xué)法（化學(xué)試劑或酶）①自溶法：在一定條件（pH、溫度），利用自身的酶系將細(xì)胞破壞。②溶菌酶處理：具有專一地破壞細(xì)菌細(xì)胞壁的功能。Antifungalactivity例：溶菌酶處理（三）、蛋白質(zhì)的去除目的：蛋白質(zhì)的存在，常常嚴(yán)重干擾分析1、加熱法2、鹽析法3、膜分離法4、高速離心5、有機(jī)溶劑沉淀法1、加熱法欲測組分熱穩(wěn)定性好時(shí)采用。加熱到90℃。蛋白沉淀后可用離心或過濾除去，能除去熱變性蛋白。2、鹽析法原理：利用不同蛋白質(zhì)在高濃度的鹽溶液中溶解度不同程度的降低來沉淀除去蛋白質(zhì)。在低鹽濃度下，蛋白質(zhì)溶解度隨著鹽濃度升高而增加，稱為鹽溶作用。當(dāng)鹽濃度不斷升高時(shí)，不同蛋白質(zhì)的溶解度又以不同程度下降，并先后析出沉淀，稱為鹽析作用。3、膜分離法超濾：靠薄膜兩側(cè)壓力差作為推動力來分離不同分子量的物質(zhì)。將欲測小分子化合物和大分子蛋白質(zhì)分離。4、高速離心物質(zhì)沉降系數(shù)、