精液檢驗（臨床檢驗技術課件）

精液一般性狀檢查01外觀正常：剛排出時呈灰色或乳白色，不透明膠凍狀；自行液化后為灰白色，半透明液體紅色血性：生殖系統(tǒng)炎癥、結核、結石或腫瘤黃色膿性：精囊炎或前列腺炎02酸堿度（pH）應在精液液化后，且在60分鐘內完成正常精液為弱堿性，pH值7.2～8.0堿性的精囊腺分泌液和酸性前列腺分泌液的平衡pH＜7.0并有精液量減少：輸精管道阻塞、射精管和精囊腺缺如或發(fā)育不良pH＞8.0：急性前列腺炎、精囊炎或附睪炎03量一次排精量1.5~6ml，與射精頻度呈負相關WHO推薦樣本容器稱重法檢測量03液化時間精液液化時間：精液排出后，由膠凍狀轉變?yōu)榱鲃訝钜后w所需的時間精囊腺凝固酶前列腺蛋白水解酶剛排出的精液03液化時間1、測定方法接收標本，觀察→37℃孵育→每5min觀察（1）肉眼觀察法：由膠凍狀變?yōu)榫鶆蛄鲃訝钜后w，停止計時（2）滴管法：用口徑較細的滴管吸取精液，若很容易被吸取且未見精液呈條索狀，停止計時03液化時間2、質量保證（1）排精后立即準確記錄排精時間，盡快送檢（2）觀察應保持在37℃恒溫環(huán)境中，每5min觀察1次（3）正常精液可以含有少量不液化的膠凍狀顆粒，無臨床意義（4）60min仍未液化的，報告液化時間大于60min03液化時間3、方法學評價肉眼觀察法操作簡單、實用，臨床常用，不足之處是結果判斷缺乏客觀標準，受經(jīng)驗和主觀因素影響。滴管法操作簡單、實用，臨床常用，結果準確性和重復性好于肉眼觀察法。03液化時間3、方法學評價正常：精液離體后5~10min開始液化，30min內完全液化。液化時間＜60min04液化時間3、方法學評價正常：精液離體后5~10min開始液化，30min內完全液化。液化時間＜60min05黏稠度精液黏稠度：指精液完全液化后的黏度測定方法：（1）滴管法：用口徑約1.5mm的塑料吸管緩慢地將液化精液吸入，觀察在重心作用下精液形成黏液絲的長度。（更容易觀察結果）（2）玻棒法：用玻璃棒插入液化精液，觀察提起后形成黏液絲的長度。05黏稠度正常：拉絲長度＜2cm，呈水樣滴管法測定時，形成不連續(xù)的小滴顯微鏡檢驗取混勻、液化的精液涂片，觀察有無精子及是否運動與運動狀態(tài)等。若未見精子，將標本3000r/min離心15min，取沉淀物重新檢查。仍未見精子，則不必繼續(xù)檢查，可報告離心后未發(fā)現(xiàn)精子。前言顯微鏡檢查方法01精子活動力指精子運動的能力，反映精子質量WHO將精子活動力分為3級：PR、NP、IM分級特點運動活躍型（PR）精子運動活躍、線性運動或者在較大的范圍內運動（不考慮運動的速度）非運動活躍型(NP)精子運動但不活躍，如精子在較小的范圍內運動，精子頭部輕微移位或盡有鞭毛擺動完全不動型（IM）精子完全不動01精子活動力1、測定方法取混勻液化精液1滴加于載玻片上，覆蓋蓋玻片→低倍鏡觀察→高倍鏡觀察并計數(shù)。01精子活動力2、質量保證（1）標本：立即送檢，注意保溫

液化后立即檢查

最好在30min內，不能超過1h（2）器材：采用22mm×22mm蓋玻片

推薦使用帶有網(wǎng)線和網(wǎng)格的目鏡01精子活動力（6）高倍鏡計數(shù)：建議計數(shù)2次至少在5個不同區(qū)域計數(shù)計數(shù)總數(shù)≥200個（3）溫度：標本37℃條件下孵育

使用預熱的載玻片和蓋玻片使用帶加熱37℃載物臺的顯微鏡（4）混勻：充分混勻標本（5）制片：制成厚度約20μm的檢查涂片

避免產生氣泡01精子活動力3、方法學評價方法評價顯微鏡檢查臨床常用，但人為影響因素大，質量控制難度大，誤差較大，重復性較差連續(xù)攝影法WHO推薦方法，直觀、準確度高，但需要高精度設備精子質量分析儀操作簡便，但影響因素多，需要專用設備01精子活動力3、方法學評價正常：總活力精子(PR＋NP)≥40%，

前向運動精子(PR)≥32%減低：精索靜脈曲張、靜脈血回流不暢；

生殖系統(tǒng)非特異性感染、使用某些藥物等02精子活動率指在顯微鏡下直接觀察活動精子所占精子總數(shù)的百分率正常：排精60min內，為80~90%，至少>60%減低：精索靜脈曲張、生殖系統(tǒng)感染、理化因素、免疫因素等精子活動率<60%，可使生育力下降03精子存活率即精子活率，主要用于評估精子膜的完整程度（1）原理：活精子細胞膜完整，加入染料后不著色

死精子細胞膜缺損，染料可進入精子（2）操作步驟：染色→加蓋玻片→靜置→低倍鏡觀察→高倍鏡觀察1、伊紅染色法03精子存活率精子頭部呈白色或淡粉紅色，則為活精子精子頭部呈紅色或暗粉紅色，則為死精子如果染色僅限于頸部區(qū)域，剩余的頭部未染色，則可認為是“頸部細胞膜不全”如果難以辨識淺染的頭部，可使用苯胺黑以增加背景的對比度1、伊紅染色法03精子存活率原理：活精子膜完整，將精子加入低滲溶液，水分進入精子，精子尾部腫脹/彎曲操作步驟：取低滲膨脹液1ml，37℃預溫5min→加液化精液0.1ml，混勻→37℃孵育30min→取精液涂片、加蓋玻片→相差顯微鏡下觀察、計數(shù)2、低滲腫脹精子活率試驗03精子存活率（1）原理：活精子膜完整，將精子加入低滲溶液，水分進入精子，精子尾部腫脹/彎曲（2）操作步驟：取低滲膨脹液1ml，37℃預溫5min→加液化精液0.1ml，混勻→37℃孵育30min→取精液涂片、加蓋玻片→相差顯微鏡下觀察、計數(shù)2、低滲腫脹精子活率試驗03精子存活率（3）結果判斷：精子尾部未膨脹為死精子精子尾部膨脹為活精子2、低滲腫脹精子活率試驗03精子存活率（1）每個標本至少要計數(shù)200個精子，同時檢測兩次（2）液化后盡快評估，排精后1h內完成3、質量保證03精子存活率4、方法學評價方法評價染色法操作簡便、快速，結果準確，重復性較好，但背景對比度不佳，淡染精子分辨不清低滲腫脹精子活率試驗設備復雜，試驗結果與精子功能試驗有良好的相關性03精子存活率4、方法學評價參考區(qū)間：精子存活率≥58%（低滲腫脹試驗）精子存活率降低是男性不育的重要因素之一，正常有生殖能力的男性活精子率一般≥75%。精子存活率＜50%，即可診斷為死精子癥04精子凝集活動精子以不同方式，如頭對頭、尾對尾或混合型相互粘附在一起的現(xiàn)象等級凝集情況Ⅰ零散凝集，每個凝集<10個精子，有很多自由活動的精子Ⅱ中等凝集，每個凝集10~50個精子，存在自由活動的精子Ⅲ大量凝集，每個凝集>50個精子，仍有一些自由活動的精子Ⅳ全部凝集，所有精子聚集，數(shù)個凝集又粘附在一起頭對頭尾對尾尾端對尾端混合型糾結型04精子凝集參考區(qū)間：無凝集~Ⅰ級存在凝集并不能充分證實不育的原因系免疫性，但暗示有抗精子抗體的存在，應進一步檢查以明確診斷嚴重的精子凝集影響精子活力和密度的評估05精子計數(shù)精子濃度：單位體積內的精子數(shù)量單次排出的精子絕對數(shù)量：精子濃度×本次精液量1、顯微鏡計數(shù)法（1）原理：改良牛鮑計數(shù)板（2）精液稀釋液：NaHCO3（破壞精液粘稠性）、甲醛（殺死和固定精子）（3）操作步驟：精液稀釋液0.38ml→加液化精液20μl，混勻→充池，靜置→高倍鏡計數(shù)05精子計數(shù)2、質量保證（1）檢測標本必須完全液化，吸取精液量必須準確（2）直接涂片未發(fā)現(xiàn)精子，離心后兩次檢測均無精子，則報告“無精子”（3）計數(shù)時以頭部為基準，應計數(shù)完整結構的精子，在10~15min內計數(shù)完，每次至少計數(shù)200個05精子計數(shù)3、方法學評價顯微鏡計數(shù)法：檢測簡便，成本低，但誤差較大計算機輔助精液分析：快速，重復性好，但易受其他物質的干擾精子質量分析儀：簡單快速，重復性較好，但易受光電性能的影響05精子計數(shù)4、參考區(qū)間精子密度≥15X106/ml；精子總數(shù)≥39X106精子/1次射精5、臨床意義精子總數(shù)是衡量睪丸生成精子的能力及男性生殖道是否通暢的指標精子密度持續(xù)＜15X106/ml或精子總數(shù)＜39X106精子/1次射精為少精子癥精液多次檢查無精子時為無精子癥（連續(xù)檢查3次，離心后沉淀物中仍無精子）05精子計數(shù)精子濃度減低或無精子癥的臨床意義06精子形態(tài)1、正常精子形態(tài)06精子形態(tài)1、正常精子形態(tài)06精子形態(tài)2、異常精子形態(tài)06精子形態(tài)06精子形態(tài)3、精子形態(tài)檢查方法：濕片法：精子高倍計數(shù)后，再觀察精子形態(tài)涂片染色法;WHO推薦使用巴氏染色法

涂片→干燥→固定、染色→油鏡下計數(shù)200個精子形態(tài)06精子形態(tài)3、精子形態(tài)檢查方法：正常男性精液中正常形態(tài)精子≥30%；畸形精子＜20%?；尉釉龆嘁娪诟腥尽⑼鈧?、高溫、放射線、酒精中毒、藥物、工業(yè)廢物、環(huán)境污染、激素失調或遺傳因素等導致睪丸異常、精索靜脈曲張等。07非精子細胞非精子細胞指精液中的上皮細胞、白細胞和不成熟的生精細胞等。檢查法：WHO推薦采用正甲苯胺藍過氧化酶染色法，白細胞呈陽性，生精細胞呈陰性。正常不成熟的生精細胞＜1%，白細胞＜5/HP，偶見紅細胞。若睪丸受損，精液中不成熟的生精細胞增多；精液中紅細胞與白細胞增多見于生殖系統(tǒng)炎癥、結核等，若白細胞＞1.0×109/L稱為白細胞精子癥。精液化學與免疫學檢查01化學檢查枸櫞酸、鋅、谷氨酰轉肽酶、酸性磷酸酶→前列腺功能果糖、前列腺素→精囊功能游離左旋肉毒堿、甘油磷酸膽堿、中性α-葡萄糖苷酶→附睪功能01化學檢查1、果糖精液中的果糖來自精囊液，由精囊所分泌。它是精子活動的能源。若精液果糖濃度減低將使精子活動力減弱，影響受精率。在先天性精囊缺如、逆行射精等時無果糖；在精囊腺炎和雄激素分泌不足時果糖減低。［參考值］吲哚比色法：≥13μmol/一次射精01化學檢查2、酶類（1）酸性磷酸酶（acidphosphatase，ACP）精漿中的酸性磷酸酶幾乎全部來自前列腺，屬前列腺酸性磷酸酶。前列腺炎時ACP活性減低，可使精子活動減弱，受精率下降；前列腺癌和前列腺肥大時，ACP活性可增高。［參考值］磷酸苯二鈉比色法：48.8~208.6U/ml01化學檢查2、酶類（2）乳酸脫氫酶-X（LD-X），是存在于精母細胞、精子細胞和精子線粒體中的特異酶，具有組織特異性，對精子生成、代謝、獲能、活動能力和受精過程均有重要作用。

LD-X活性與精子濃度特別是活精子濃度呈良好的正相關，活性減低可致生育力下降。［參考值］聚丙烯酰胺電泳法：相對活性≥42.6%01化學檢查2、酶類（3）精子頂體酶存在于精子項體內，是一種蛋白水解酶，在受精過程中起重要作用?；钚詼p低將致生育力下降，常作為病人精子受精能力和診斷男性不育癥的參考指標。［參考值］BAWW-ADH法（X±s）36.72±21.43U/L01化學檢查3、鋅精液中含多種微量元素，其中鋅能促進生殖器官發(fā)育，維持正常生精功能，提高精子濃度和活力。精液鋅減低可致生殖器官發(fā)育不良、精子生成減少、死精癥等。嚴重缺陷鋅可致不育癥。精漿鋅測定可作為評價男性生育功能和診治不育癥的參考指標之一。［參考值］Zn（X±s）24μmol/一次射精檢測項目檢測方法及參考區(qū)間臨床意義酸性磷酸酶（現(xiàn)臨床上被PSA代替）磷酸苯二鈉比色法：48.8~208.6U/ml減低：見于前列腺炎，可使精子活動減弱，受精率下降增高：見于前列腺癌和前列腺肥大乳酸脫氫酶-X聚丙烯酰胺電泳法：相對活性≥42.6%；絕對活性（1430±940）U/L減低：見于少精液癥或無精液癥中性α-葡萄糖苷酶比色法：≥20mU/1次射精其活性與精子密度、精子活力呈正相關，有助于鑒別輸精管阻塞、睪丸生精障礙所致的無精子癥精子頂體精氨酸酰胺酶比色法：48.2~217.7μU/106精子其活性與精子計數(shù)、精子頂體完整率呈正相關。活性減低可導致不育枸櫞酸紫外比色法：50nmol/1次射精吲哚比色法：≥13μmol/1次射精與睪酮水平相關，可以評價雄激素分泌狀態(tài)。顯著減少見于前列腺炎果糖間苯二酚比色法：9.11~17.67mmol/L吲哚比色法：≥13μm