血液檢測(cè)技術(shù)（臨床輸血檢驗(yàn)課件）

臨床輸血檢驗(yàn)技術(shù)ABO血型系統(tǒng)基礎(chǔ)理論學(xué)習(xí)目標(biāo)掌握ABO血型系統(tǒng)的基因及遺傳、ABO血型系統(tǒng)抗體的特點(diǎn)及臨床應(yīng)用、臨床常見的ABO亞型。導(dǎo)入：血型是什么？廣義的血型：泛指高等動(dòng)物和人類血液中的紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板以及各種血漿蛋白質(zhì)的抗原型別。狹義的血型：僅指紅細(xì)胞抗原的型別。目前為止，已檢出30多個(gè)紅細(xì)胞血型系統(tǒng)，抗原近300個(gè)。其中，ABO血型系統(tǒng)是最常用也是最重要的血型系統(tǒng)。ABO血型基因ABO血型基因位于人類9號(hào)染色體的長(zhǎng)臂3區(qū)4帶，由A、B、O三個(gè)等位基因控制，其中A和B為顯性基因，O為隱性基因。A、B基因不直接編碼抗原，而是編碼連接糖所需的特異性轉(zhuǎn)移酶，這些酶能使糖分子與A、B抗原前體物質(zhì)（H抗原或H物質(zhì)）相連接，進(jìn)而合成AB抗原。A基因編碼產(chǎn)生N-乙酰基半乳糖胺基轉(zhuǎn)移酶1該酶將N-乙酰半乳糖胺（A抗原表位或抗原決定簇）連接到H抗原末端的半乳糖上，使之成為A抗原B基因編碼產(chǎn)生D-半乳糖糖基轉(zhuǎn)移酶2該酶將D-半乳糖（B抗原表位）連接到H抗原末端的半乳糖上，使之成為B抗原O基因產(chǎn)生的糖基轉(zhuǎn)移酶無活性，不能修飾H物質(zhì)，因此不產(chǎn)生A、B抗原但表面有大量H物質(zhì)。ABO血型基因ABH抗原主要存在于紅細(xì)胞上，但也可出現(xiàn)在除腦脊液外的分泌液中，唾液中最豐富，稱為血型物質(zhì)。意義在于：1.在紅細(xì)胞抗原弱表達(dá)個(gè)體中確定ABO血型；2.檢測(cè)唾液、羊水中的血型物質(zhì)，輔助鑒定血型和預(yù)測(cè)胎兒血型；3.能中和天然抗體（IgM），有助于鑒別抗體性質(zhì)。血型物質(zhì)ABO血型遺傳是常染色體顯性遺傳。每個(gè)子代均可從親代各得到一個(gè)單倍體，組合后共有6種基因型，4種表型。ABO血型遺傳（一）天然抗體

ABO抗體多為天然抗體，出生后開始產(chǎn)生，3-6個(gè)月時(shí)可能被檢出，5-10歲達(dá)到高峰，80歲降至6個(gè)月水平。天然抗體由環(huán)境中的與A、B抗原類似的物質(zhì)在無覺察的免疫刺激下產(chǎn)生，多為IgM，分子量大，不能通過胎盤，一般不會(huì)引起新生兒溶血病。ABO血型抗體（二）免疫抗體

免疫抗體不是天然存在血漿中，而是由于輸血或妊娠分娩時(shí)進(jìn)入受血者或母體的紅細(xì)胞抗原（母體缺乏的），使淋巴細(xì)胞致敏后免疫產(chǎn)生的抗體，免疫抗體多為IgG，IgG的分子量小，能透過胎盤，因此能引起新生兒溶血病。ABO血型抗體O型人血液中含抗A、抗B和（或）抗AB抗體，其中抗AB不是抗A和抗B的混合物，它識(shí)別的是A和B抗原上共同的結(jié)構(gòu)部位。抗AB以IgG為主，效價(jià)較高，可以通過胎盤，因此，O型母親親子血型不合，易發(fā)生新生兒溶血病。ABO血型抗體ABO血型抗體的臨床意義：1.ABO不相容的輸血可以引起嚴(yán)重的溶血性輸血反應(yīng)，一般為急性血管內(nèi)溶血反應(yīng)，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致DIC、急性腎功能衰竭甚至死亡。2.ABO抗體可引起新生兒溶血病，在器官移植、造血干細(xì)胞移植等方面都有重要意義。ABO血型抗體亞型是指雖屬同一血型抗原，但抗原結(jié)構(gòu)、性能或抗原表位數(shù)有一定差異的血型。1.A亞型常見的A亞型有A1與A2、A3、Ax、Am、Ay等，其中A1、A2亞型占全部A型血的99.9%。ABO血型亞型A1亞型A抗原A1抗原A2亞型A抗原tips1：由于A2型和A2B型血漿中含有抗A1，它們可能在輸血時(shí)去凝集A1型紅細(xì)胞，因此A2型的人接受A1型人的血，也可發(fā)生輸血反應(yīng)。tips2：A2型和A2B型紅細(xì)胞膜上的A抗原抗原性較弱，在血型鑒定時(shí)，不易與抗A反應(yīng)，容易將A2型和A2B型誤定為O型和B型，因此應(yīng)特別注意A亞型的存在。ABO血型亞型A1亞型A抗原A1抗原抗A1抗體2.B亞型B亞型要少于A亞型，包括B3、Bx、Bm和Bel等，鑒定技術(shù)與弱A亞型鑒定技術(shù)相同。亞型通常是在正反定型不符或凝集較弱時(shí)通過進(jìn)一步試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，不作為常規(guī)檢查。ABO血型亞型B細(xì)胞上有弱A抗原表達(dá)、A細(xì)胞上有弱B抗原表達(dá)B（A）及A（B）表型A與B基因位于同一條染色體上，兩個(gè)基因同時(shí)遺傳順式AB腸道細(xì)菌進(jìn)入血液后，其脫乙?；甘笰抗原的N-乙酰半乳糖胺變成半乳糖胺，與B抗原半乳糖相似獲得性B特殊ABO血型臨床輸血檢驗(yàn)技術(shù)ABO血型鑒定學(xué)習(xí)目標(biāo)1、常用紅細(xì)胞懸液的制備方法2、血型鑒定卡式法、試管法原理、結(jié)果判斷及質(zhì)量控制。卡式法1現(xiàn)推薦方法，靈敏度高、重復(fù)性好、可自動(dòng)化操作，但成本較高試管法2傳統(tǒng)方法，操作簡(jiǎn)便、設(shè)備簡(jiǎn)單、成本低廉，但影響因素多、靈敏度低ABO血型鑒定試管法包括鹽水凝集試驗(yàn)、低離子強(qiáng)度鹽水試驗(yàn)、酶試驗(yàn)、凝聚胺試驗(yàn)、抗人球蛋白試驗(yàn)等，本課以鹽水凝集試驗(yàn)為例。現(xiàn)目前兩種方法均在臨床使用中，故均需掌握。一、紅細(xì)胞懸液制備常用濃度：1%、2%、5%、10%。方法：①抗凝血移去上層血漿待測(cè)

②洗滌：剩余的紅細(xì)胞中加5MLNS，混勻，洗滌，棄上清，此步驟重復(fù)3次，最后一次上清應(yīng)清亮并全部棄去。

③配制懸液。（根據(jù)要求濃度）如5%：洗滌后壓積紅細(xì)胞1滴+19滴NS，混勻3000r/min5min3000r/min5min二、試管法血型鑒定正定型原理：

用特異性血型抗體檢測(cè)被檢RBC,在鹽水介質(zhì)中發(fā)生肉眼可見的凝集，從而測(cè)定被檢RBC膜上有無與特異性血型抗體相對(duì)應(yīng)的抗原，進(jìn)一步判定血型。正定型方法：加標(biāo)準(zhǔn)血清1滴（-A-B

）加紅細(xì)胞懸液1滴（5%）混勻，離心觀察結(jié)果-A-B1000r/min1min二、試管法血型鑒定正定型結(jié)果判定：試管法：輕輕搖動(dòng)（或捻動(dòng)）試管，使沉于管底的RBC浮起，觀察有無凝集或溶血，如上層清亮，管底有RBC凝塊，輕彈管底，凝塊無散開，為凝集（＋）；如上層清亮，管底有RBC沉積，邊緣整齊，輕彈管底，RBC浮起或成為均勻的RBC懸液，則為不凝集（一）；若不確定，可將反應(yīng)物倒在載玻片上，顯微鏡下觀察。注意：若上層為清亮的櫻紅色，考慮是否溶血二、試管法血型鑒定抗A抗B結(jié)果＋—A—＋B＋＋AB——O正定型結(jié)果判定：二、試管法血型鑒定二、試管法血型鑒定反定型原理：

原理：用標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞檢測(cè)被檢血清（血漿）,在鹽水介質(zhì)中發(fā)生肉眼可見的凝集，從而測(cè)定被檢血清（血漿）中有無與標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞相對(duì)應(yīng)的抗體，進(jìn)一步判定血型。二、試管法血型鑒定反定型方法：加待測(cè)血清2滴（-A-B

）加標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液2滴（5%）混勻，離心觀察結(jié)果-A-B1000r/min1min（方法同正定型）二、試管法血型鑒定抗A抗B結(jié)果＋—A—＋B＋＋AB——O正定型結(jié)果判定：結(jié)果判定：A(RBC)B(RBC)結(jié)果＋—B—＋A＋＋O——AB反定型結(jié)果判定：二、試管法血型鑒定注意：1、正反定型一致才能確定結(jié)果；

2、所用器材必須清潔干凈，避免溶血，專型專用；

3、控制離心速度和時(shí)間，防止假陽性和假陰性；

4、抗原抗體比例要適當(dāng)；

5、溶血時(shí)，注意結(jié)果的判定；

6、正反定型結(jié)果不一致時(shí)，不可輕易判定，需查明原因，可能有技術(shù)問題也可能有標(biāo)本問題。二、試管法血型鑒定檢測(cè)原理：

正定型原理：在事先包被好抗A與抗B的凝膠介質(zhì)中，加入待測(cè)的紅細(xì)胞懸液，抗原與抗體結(jié)合，經(jīng)低速離心，未與抗體結(jié)合的紅細(xì)胞沉于凝膠底部，而已經(jīng)結(jié)合的凝集的紅細(xì)胞，位于凝膠上部或懸浮與凝膠中。反定型原理：采用中性微柱凝膠，加入待測(cè)的血清與標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液，其余同正定型。三、卡式法血型鑒定卡的結(jié)構(gòu)：凝膠微柱：試管上端（反應(yīng)池）、柱體（分離池）過濾介質(zhì)：顆粒直徑26-103nm的葡聚糖100凝膠，凝膠間縫隙只允許游離紅細(xì)胞通過緩沖液：LISS（加或不加抗血清）三、卡式法血型鑒定卡式法方法：正定：將待測(cè)紅細(xì)胞懸液加在凝膠上部反應(yīng)，離心后觀察反定：將待測(cè)血清和標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞加在凝膠上部反應(yīng)，離心后觀察陽性：凝集的紅細(xì)胞，被阻擋在小柱中凝膠的上部或中央陰性：游離的紅細(xì)胞，被擠過裝有過濾介質(zhì)的小柱，而到達(dá)小柱的底部

三、卡式法血型鑒定結(jié)果判讀模式：三、卡式法血型鑒定結(jié)果判讀模式：三、卡式法血型鑒定卡式微柱凝膠試驗(yàn)就是利用實(shí)驗(yàn)中紅細(xì)胞在凝膠微柱中的移動(dòng)，來指示肉眼所不能見的紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體發(fā)生的血清學(xué)反應(yīng)，因此只需要更換不同的試劑卡，就能廣泛地應(yīng)用在：紅細(xì)胞血型鑒定、交叉配血、抗體篩查、新生兒溶血病的檢測(cè)等。三、卡式法血型鑒定臨床輸血檢驗(yàn)技術(shù)HLA分子生物學(xué)分型方法學(xué)習(xí)目標(biāo)掌握PCR-SSP檢測(cè)方法的基本原理、特點(diǎn)及其適應(yīng)范圍。原理PCR—序列特異引物法編碼HLA的基因具有高度的多態(tài)性，每一個(gè)基因座位上有眾多的復(fù)等位基因，而每一個(gè)等位基因都有其各自的DNA序列，因此可用相應(yīng)的序列特異性引物（sequencespecificprimers，SSP）進(jìn)行擴(kuò)增。通過控制PCR反應(yīng)條件，特異性引物僅擴(kuò)增與其相應(yīng)的等位基因，而不擴(kuò)增其他的等位基因。檢測(cè)材料PCR—序列特異引物法——以B27檢測(cè)為例

1、血樣：0.2mlEDTA抗凝血

2、紅細(xì)胞裂解液

3、白細(xì)胞裂解液

4、PCR混合液PCRbufferHLA-B27SSPTaqdNTPinternalpositivereferenceprimersetc操作流程一、DNA的提取1、取1ml紅細(xì)胞裂解液入血樣管中混勻，裂解紅細(xì)胞;2、離心4000rpm2min;3、重復(fù)步驟1-2兩次，最后用棉簽吸干管壁液體；4、取50ul白細(xì)胞裂解液入上述白細(xì)胞管中混勻；5、將白細(xì)胞管于60℃水浴消化20min；6、取出白細(xì)胞管再于100℃，3-5min，滅活蛋白酶K；7、離心10000rpm2min。上清即為富含DNA的PCR模板。PCR—序列特異引物法——以B27檢測(cè)為例操作流程PCR擴(kuò)增1、吸2ul模板DNA入裝有PCR混合液的小管中；2、將小管置于PCR儀內(nèi)進(jìn)行擴(kuò)增。（需80min）

×12×2394oC2min

94oC12sec

65oC1min94oC12sec61oC50sec72oC30sec

37oC10sec

HLA-B27擴(kuò)增程序PCR—序列特異引物法——以B27檢測(cè)為例擴(kuò)增產(chǎn)物電泳PCR—序列特異引物法——以B27檢測(cè)為例擴(kuò)增產(chǎn)物電泳制膠使用電泳緩沖液在制膠器上配制1.0%的瓊脂糖凝膠?；鞓?μL載樣緩沖液、2μL核酸熒光染料，10μLPCR產(chǎn)物混勻。點(diǎn)樣將上步混好的樣10μL加到凝膠孔中。電泳90V電壓下電泳10~20min。PCR—序列特異引物法——以B27檢測(cè)為例結(jié)果觀察HLA-B27(+)標(biāo)本電泳結(jié)果觀察

PCR—序列特異引物法——以B27檢測(cè)為例試劑操作：提取DNA最后一步，乙醇要揮發(fā)干凈防止PCR污染質(zhì)量控制PCR—序列特異引物法——以B27檢測(cè)為例方法學(xué)評(píng)價(jià)方法評(píng)價(jià)PCR-SSP該方法操作簡(jiǎn)單、快速，耗時(shí)較短，結(jié)果判斷簡(jiǎn)便，但可能出現(xiàn)漏孔或假性條帶現(xiàn)象，為實(shí)驗(yàn)室最常用方法之一。PCR-SSOP操作較復(fù)雜，耗時(shí)較長(zhǎng)，結(jié)果較準(zhǔn)確，部分探針易出現(xiàn)干擾。目前被Luminex檢測(cè)技術(shù)所替代。Luminex檢測(cè)技術(shù)靈敏度高，操作簡(jiǎn)便，快速，結(jié)果較準(zhǔn)確，是目前實(shí)驗(yàn)室中最常用的方法之一。PCR-SBT能夠直接檢測(cè)基因的核苷酸序列，屬于高分辨方法，結(jié)果準(zhǔn)確性最高，但需要特殊的儀器設(shè)備，耗時(shí)較長(zhǎng)，成本較高。基因芯片技術(shù)具有超高速、高通量、低成本和高效益等優(yōu)點(diǎn)，但分型可能存在一定的偏差。PCR—序列特異引物法——以B27檢測(cè)為例臨床輸血檢驗(yàn)技術(shù)HLA抗體檢測(cè)技術(shù)學(xué)習(xí)目標(biāo)熟悉淋細(xì)胞毒交叉配合試驗(yàn)的原理、方法及質(zhì)量控制。HLA血清學(xué)分型試驗(yàn)的原理及質(zhì)量控制。淋巴細(xì)胞毒交叉配合試驗(yàn)+補(bǔ)體臺(tái)盼藍(lán)染液抗原與抗體結(jié)合當(dāng)特異性抗體與待檢淋巴細(xì)胞表面HLA分子結(jié)合后，激活補(bǔ)體，使細(xì)胞膜通透性增加或細(xì)胞死亡，加入染料后在顯微鏡下可見結(jié)合補(bǔ)體的細(xì)胞被活性染料著色。分離淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞毒交叉配合試驗(yàn)供者淋巴細(xì)胞+受者血清37℃孵育30分鐘兔補(bǔ)體2%臺(tái)盼藍(lán)死細(xì)胞體積大，著黑色，無折光性；活細(xì)胞大小正常，未著色，折光性強(qiáng)，較透亮；抗體測(cè)定-試管法37℃孵育60分鐘淋巴細(xì)胞毒交叉配合試驗(yàn)質(zhì)量控制HLA抗原抗體最好選用單克隆抗血清抗體效價(jià)適宜存在劑量效應(yīng)淋巴細(xì)胞要求活性和純度高濃度為2～4×106/mL病理狀態(tài)下HLA可能會(huì)表達(dá)異常孵育溫度和時(shí)間嚴(yán)格掌握孵育時(shí)間最適溫度為20-25℃其他補(bǔ)體染液應(yīng)進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)；用甲醛固定設(shè)置陽性和陰性對(duì)照淋巴細(xì)胞毒交叉配合試驗(yàn)淋巴細(xì)胞毒交叉配合試驗(yàn)<10%或?yàn)殛幮圆拍苁┬心I移植。如果受體以前曾經(jīng)接受過輸血、有過妊娠或接受過同種異體移植，很可能在其血清內(nèi)已產(chǎn)生抗淋巴細(xì)胞抗體，對(duì)人類白細(xì)胞抗原（HLA）敏感。此時(shí)，淋巴細(xì)胞毒交叉配合試驗(yàn)可為陽性，器官移植術(shù)后將可能發(fā)生超急性排斥反應(yīng)。臨床應(yīng)用臨床輸血檢驗(yàn)技術(shù)HLA抗原檢測(cè)技術(shù)學(xué)習(xí)目標(biāo)1.熟悉HLA血清學(xué)分型試驗(yàn)的原理及質(zhì)量控制。2.淋巴細(xì)胞毒交叉配合試驗(yàn)的原理及質(zhì)量控制。3.HLA分子生物學(xué)分型方法HLA血清學(xué)分型試驗(yàn)+補(bǔ)體臺(tái)盼藍(lán)染液抗原與抗體結(jié)合當(dāng)特異性抗體與待檢淋巴細(xì)胞表面HLA分子結(jié)合后，激活補(bǔ)體，使細(xì)胞膜通透性增加或細(xì)胞死亡，加入染料后在顯微鏡下可見結(jié)合補(bǔ)體的細(xì)胞被活性染料著色。分離淋巴細(xì)胞HLA血清學(xué)分型試驗(yàn)待檢淋巴細(xì)胞懸液靜置30-40分鐘兔補(bǔ)體靜置60-70分鐘5%伊紅死細(xì)胞體積大，著黑色，無折光性；活細(xì)胞大小正常，未著色，折光性強(qiáng)，較透亮；微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)HLA血清學(xué)分型試驗(yàn)質(zhì)量控制HLA抗原抗體最好選用單克隆抗血清抗體效價(jià)適宜存在劑量效應(yīng)淋巴細(xì)胞要求活性和純度高濃度為2～4×106/mL病理狀態(tài)下HLA可能會(huì)表達(dá)異常孵育溫度和時(shí)間嚴(yán)格掌握孵育時(shí)間最適溫度為20-25℃其他補(bǔ)體染液應(yīng)進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)；用甲醛固定設(shè)置陽性和陰性對(duì)照HLA血清學(xué)分型試驗(yàn)

臨床輸血檢驗(yàn)技術(shù)

Rh血型鑒定

Rh（D）血型鑒定原理：IgM型抗D標(biāo)準(zhǔn)血清與被檢者RBC表面D抗原在室溫條件下鹽水介質(zhì)中產(chǎn)生特異性反應(yīng)，根據(jù)是否出現(xiàn)凝集判斷是否有D抗原的存在。加抗D血清1滴加紅細(xì)胞懸液1滴（5%）輕輕搖動(dòng)玻片混勻，2min內(nèi)判斷結(jié)果，有凝集（＋），無凝集需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)確認(rèn)是否為陰性

Rh（D）血型鑒定臨床輸血檢驗(yàn)技術(shù)Rh血型系統(tǒng)基礎(chǔ)理論學(xué)習(xí)目標(biāo)掌握Rh血型系統(tǒng)的命名方法、Rh抗原、抗體的各類。Rh血型系統(tǒng)概述Rh系統(tǒng)的發(fā)現(xiàn)：1940LandsteinerWiener

恒河猴。Rh血型的抗原：已發(fā)現(xiàn)40多種，D、E、C、c、e等。Rh系統(tǒng)的命名:Fisher-Race；Wiener；Rosenfield。Rh系統(tǒng)的遺傳:遵循常染色體共顯性連鎖遺傳規(guī)律。Rh血型連鎖遺傳規(guī)律Rh血型系統(tǒng)的抗原及亞型抗原性強(qiáng)度僅次于A及B抗原；已發(fā)現(xiàn)的Rh血型抗原達(dá)48個(gè)；D抗原抗原性最強(qiáng),以下依次E、C、c、e；臨床將D抗原陽性的個(gè)體稱為Rh陽性，反之為Rh陰性。Rh血型系統(tǒng)的抗體主要為IgG，應(yīng)答早期可有部分IgM?？笵與D紅細(xì)胞產(chǎn)生嚴(yán)重的溶血反應(yīng)。不同個(gè)體對(duì)Rh＋抗原刺激存在差異。RBC刺激或輸血、妊娠后產(chǎn)生，偶見天然抗E、抗CW。臨床輸血檢驗(yàn)技術(shù)白細(xì)胞抗原系統(tǒng)基礎(chǔ)理論學(xué)習(xí)目標(biāo)1.什么是HLA？HLA等位基因的命名應(yīng)遵循哪些原則？2.HLA-Ⅰ類、Ⅱ類及Ⅲ類基因的結(jié)構(gòu)怎樣？HLA復(fù)合體的遺傳特點(diǎn)有哪些？3.HLA分子的結(jié)構(gòu)怎樣？如何命名？HLA復(fù)合體HLA復(fù)合體的遺傳特點(diǎn)單體型遺傳

多態(tài)性遺傳共顯性遺傳復(fù)等位基因連鎖不平衡（linkagedisequilibrium）基因頻率連鎖不平衡現(xiàn)象的可能原因HLA復(fù)合體HLA-I類基因位于6號(hào)染色頂端經(jīng)典HLA-I類基因：包括A、B、C三個(gè)基因座位，編碼三組高免疫性、高度多態(tài)性的HLA-A、HLA-B、HLA-C糖蛋白分子。非經(jīng)典HLA-I類基因：免疫功能關(guān)基因，包括E、F、G、H、J基因座位，編碼免疫性和多態(tài)性均較低的分子HLA復(fù)合體HLA-II類基因位于6號(hào)染色著絲點(diǎn)經(jīng)典HLA-II類基因（DP、DQ、DR）編碼HLA-II類分子；非經(jīng)典的HLA-II類基因（LMP、TAP、DM）為與抗原加工和遞呈有關(guān)的基因。HLA復(fù)合體HLA-III類基因位于II類和I類基因中段經(jīng)典HLA-III類基因編碼產(chǎn)生C4、C2、B因子等HLA復(fù)合體HLA等位基因命名HLA-A*02：101：01：02N連字符基因座位分隔符基因組字段分隔符特異性HLA蛋白編碼區(qū)DNA同義突變非編碼區(qū)DNA差異指示表達(dá)發(fā)生變化HLA復(fù)合體按基因位點(diǎn)的產(chǎn)物分別命名抗原特異性用基因位點(diǎn)后的數(shù)字表示由細(xì)胞學(xué)技術(shù)及淋巴細(xì)胞試驗(yàn)確定的特異性的表示HLA抗原裂解后寬特異性的表示抗原特異性及基因位點(diǎn)之間的表示HLA分子組織分布HLA分子HLA分子分布HLA-Ⅰ類分子廣泛分布在所有有核細(xì)胞表面HLA-Ⅱ類分子主要表達(dá)在如樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞等細(xì)胞表面HLA分子也分布在血、尿、唾液及精液中檢出HLA分子臨床輸血檢驗(yàn)技術(shù)白細(xì)胞抗原系統(tǒng)檢測(cè)的臨床應(yīng)用學(xué)習(xí)目標(biāo)掌握HLA分型在移植醫(yī)學(xué)、輸血醫(yī)這和法醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用白細(xì)胞抗原系統(tǒng)檢測(cè)的臨床應(yīng)用在移植醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用造血干細(xì)胞移植HLA相合同胞（ＭＲＤ）ＨＬＡ相合非血緣（MUD）單倍體臍體器官移植HLA－AHLA-BHLA-DR白細(xì)胞抗原系統(tǒng)檢測(cè)的臨床應(yīng)用在輸血醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用HLA與非溶血性輸血反應(yīng)(1)臨床輸血中發(fā)熱性非溶血性輸血反應(yīng)多數(shù)是由于HLA抗體破壞白細(xì)胞后釋放出熱源物質(zhì)引起；(2)表現(xiàn)為頭暈、面紅、惡心、寒戰(zhàn)，體溫可高達(dá)39℃以上，嚴(yán)重者可并發(fā)肺部綜合征，呼吸困難；(3)采用白細(xì)胞濾器過濾后的血液輸注，非溶血性輸血反應(yīng)明顯減少。

白細(xì)胞抗原系統(tǒng)檢測(cè)的臨床應(yīng)用在輸血醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用HLA與血小板輸注

(1)30％的HLA抗體陽性者對(duì)隨機(jī)獻(xiàn)血者的血小板輸注無效；(2)在血小板輸注中HLA抗體的產(chǎn)生很少由血小板引起，多數(shù)由血小板血液中的白細(xì)胞引起；(3)輸血小板進(jìn)行治療時(shí)，最好測(cè)定HLA-A、B抗原，防止由于患者產(chǎn)生針對(duì)血小板膜HLA抗原的抗體。白細(xì)胞抗原系統(tǒng)檢測(cè)的臨床應(yīng)用在法醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用HLA與親子鑒定(1)由于HLA復(fù)合體的高度多態(tài)性，在無關(guān)個(gè)體間HLA表型全相同的機(jī)率極低，故HLA復(fù)合體被看作是伴隨個(gè)體終生的特異性遺傳標(biāo)記；(2)借助HLA基因型和（或）表型檢測(cè)，可用于法醫(yī)上的個(gè)體識(shí)別，使HLA分型成為鑒定親子關(guān)系的重要手段。白細(xì)胞抗原系統(tǒng)檢測(cè)的臨床應(yīng)用臨床輸血檢驗(yàn)技術(shù)血小板血型檢測(cè)的臨床應(yīng)用學(xué)習(xí)目標(biāo)掌握血小板血型系統(tǒng)檢測(cè)的臨床應(yīng)用。血小板血型與臨床血小板抗原同種異體抗原

HLA-I,HPA,ABH同種抗原

GPⅡb/Ⅲa,CD36自身抗原

GPⅡb/Ⅲa,GPⅠb/Ⅸ藥物依賴性抗原肝素、奎寧等非特異性抗原血小板免疫性疾病血小板輸注無效癥新生兒血小板減少癥輸血后紫癜自身免疫性血小板減少癥藥物引起的血小板減少癥移植相關(guān)的血小板減少癥臨床病癥淤點(diǎn)淤斑流產(chǎn)（顱內(nèi)）出血死亡血小板血型與臨床輸血妊娠骨髓移植致敏血小板并引起破壞抗供者血小板抗體抗父親血小板抗體抗供者血小板抗體出血/紫癜流產(chǎn)/死胎移植排斥血小板血小板血型與臨床采取預(yù)防和治療措施避免流產(chǎn)、出血等減少血小板輸注無效避免紫癜、出血和死亡血小板相容性檢測(cè)抗原定型抗體檢測(cè)交叉配型建立血小板供者庫(kù)篩選基因型相容的供者避免血小板抗體的產(chǎn)生診斷血小板免疫性疾病篩查血小板相容性供者臨床輸血檢驗(yàn)技術(shù)血小板血型檢測(cè)技術(shù)學(xué)習(xí)要求掌握簡(jiǎn)易致敏紅細(xì)胞小板血清學(xué)試驗(yàn)的原理、方法及質(zhì)量控制。簡(jiǎn)易致敏紅細(xì)胞血小板血清學(xué)試驗(yàn).cn患者血小板反應(yīng)板（固相化血小板）血小板單層陽性反應(yīng)陰性反應(yīng)患者血清/血漿PBS指示紅細(xì)胞（IgG抗RealhD致敏紅細(xì)胞）甲醛固定20分鐘洗滌5次50μl/孔陽性陰性25μl/孔各25μl/孔原理簡(jiǎn)易致敏紅細(xì)胞血小板血清學(xué)試驗(yàn).cn患者血小板反應(yīng)板（固相化血小板）甲醛固定20分鐘洗滌5次50μl/孔制備固相化血小板血液7mlACD-A液1ml100g*10min富血小板血漿ACD-A液101g*15min生理鹽水洗滌5次調(diào)整血小板濃度簡(jiǎn)易致敏紅細(xì)胞血小板血清學(xué)試驗(yàn).cn血小板單層陽性反應(yīng)陰性反應(yīng)PBS指示紅細(xì)胞（IgG抗D抗體致敏紅細(xì)胞）患者血清25μl/孔洗滌2次室溫濕盒靜置1小時(shí)陽性陰性各25μl/孔靜置4小時(shí)靜置4小進(jìn)間接試驗(yàn)（檢查患者血清中的抗血小板抗體）PBS25ul簡(jiǎn)易致敏紅細(xì)胞血小板血清學(xué)試驗(yàn).cn陽性反應(yīng)陰性反應(yīng)PBS指示紅細(xì)胞（IgG抗D抗體致敏紅細(xì)胞）各25μl/孔靜置4小時(shí)靜置4小進(jìn)直接試驗(yàn)（檢查血小板表面結(jié)合的抗血小板抗體）簡(jiǎn)易致敏紅細(xì)胞血小板血清學(xué)試驗(yàn).cn質(zhì)量控制1．待檢的血清或血漿標(biāo)本檢測(cè)前應(yīng)充分離心以去除顆粒及聚焦物，否則會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果；標(biāo)本脂類含量高或微生物污染也會(huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果。纖維蛋白原未充分析出的血清標(biāo)本也會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果。2．血小板懸液的濃度要符合要求，血小板數(shù)量太少、濃度過低將會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果；特別注意不能將血小板置于4℃冰箱儲(chǔ)存。3．待檢測(cè)的標(biāo)本只能用血清或血小板，檢查前需2800×g離心10分鐘以上以去除沉淀，以免顆粒及微聚物造成假陽性；高脂血或微生物污染也會(huì)造成假陽性結(jié)果。4．指示紅細(xì)胞使用前未充分混勻或試驗(yàn)中微孔板離心不充分，可導(dǎo)致假陽性結(jié)果；過度離心會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果。5．為防止靜電干擾，操作過程需在室溫濕盒中水濕潤(rùn)狀態(tài)下進(jìn)行。簡(jiǎn)易致敏紅細(xì)胞血小板血清學(xué)試驗(yàn).cn方法學(xué)評(píng)價(jià)方法評(píng)價(jià)簡(jiǎn)易致敏紅細(xì)胞血小板血清學(xué)試驗(yàn)簡(jiǎn)便快速，可用于血小板抗體（HLA，HPA）檢測(cè)和交叉配血試驗(yàn)，也可用于血小板抗原的鑒定以及血小板自身和藥物依賴性抗體檢測(cè)。微柱凝膠血小板相容性試驗(yàn)操作簡(jiǎn)便、快速、敏感性強(qiáng)，結(jié)果易于觀察，屬于微柱凝膠間接血凝試驗(yàn)?？捎糜谘“褰徊媾溲囼?yàn)、血小板抗體篩檢和致敏血小板檢測(cè)等。單克隆抗體特異的血小板抗原固定試驗(yàn)敏感性強(qiáng)，可以檢測(cè)出血小板膜上微量表達(dá)的HPA-5抗原?？捎糜阼b定血小板抗原和血小板同種特異性HPA抗體，以及血小板交叉配血試驗(yàn)。但由于HPA定型血清來源困難，本方法主要用于對(duì)部分HPA基因定型結(jié)果的驗(yàn)證。改進(jìn)的抗原捕獲酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)特異性較高，血小板無需氯喹或酸預(yù)處理就能區(qū)分血清中的HLA和HPA抗體。主要用于血小板抗體特異性鑒定試驗(yàn)，以便血小板抗體陽性患者輸注對(duì)應(yīng)抗原表達(dá)陰性的供血者血小板。流式細(xì)胞術(shù)可用于鑒定血小板抗原，也可用于檢測(cè)血小板抗體和交叉配合試驗(yàn)，雖然敏感性很高，但需要特殊儀器和專業(yè)操作人員，成本較高。分子生物學(xué)檢測(cè)PCR-SSP是最簡(jiǎn)單常用的測(cè)定血小板HPA基因型的方法。PCR-RELP法比較簡(jiǎn)單，DNA純度要求不高，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好，適合大批量檢測(cè)。PCR-ASO特異性強(qiáng)，但雜交過程費(fèi)時(shí)、繁瑣，雜交背景較強(qiáng)或雜交信號(hào)較弱時(shí)，結(jié)果難以判斷。

血小板血型系統(tǒng)基礎(chǔ)理論學(xué)習(xí)要求掌握血小板血型系統(tǒng)相關(guān)抗原與特異性抗原、血小板抗體的特征。血小板血型系統(tǒng)抗原.cn血小板：D:2~5μm