微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù) 課件 33-5綜合技能訓(xùn)練：尿液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)

綜合技能實(shí)訓(xùn)五尿液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)學(xué)習(xí)目標(biāo)1．掌握尿液標(biāo)本的正確采集、運(yùn)送和微生物檢驗(yàn)程序。2．熟悉泌尿道感染的常見(jiàn)致病菌。3．了解尿液標(biāo)本中常見(jiàn)致病菌的臨床意義。4．具有正確采集尿液標(biāo)本和進(jìn)行尿培養(yǎng)操作的能力。5．能正確選擇試驗(yàn)項(xiàng)目對(duì)尿培養(yǎng)標(biāo)本進(jìn)行微生物檢驗(yàn)，能正確判斷和分析試驗(yàn)結(jié)果并發(fā)出檢驗(yàn)報(bào)告。綜合技能訓(xùn)練五尿液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)思維導(dǎo)圖綜合技能訓(xùn)練五尿液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)一、尿液標(biāo)本常見(jiàn)病原菌綜合技能訓(xùn)練五尿液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)1、球菌革蘭陽(yáng)性：金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、B群鏈球菌、腸球菌革蘭陰性：淋病奈瑟菌

綜合技能訓(xùn)練五尿液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)2、桿菌革蘭陽(yáng)性：結(jié)核分枝桿菌革蘭陰性：大腸埃希菌、產(chǎn)氣腸桿菌、銅綠假單胞菌、變形桿菌

綜合技能訓(xùn)練五尿液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)3、其他白假絲酵母菌、鉤端螺旋體、支原體、衣原體

綜合技能訓(xùn)練五尿液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)二、檢驗(yàn)方法與程序綜合技能訓(xùn)練五尿液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)?zāi)蛞簶?biāo)本的檢驗(yàn)操作程序見(jiàn)下圖尿液涂片定量培養(yǎng)分離培養(yǎng)淋病奈瑟菌培養(yǎng)直接涂片革蘭染色鏡檢離心沉淀涂片特殊細(xì)菌鏡檢菌落計(jì)數(shù)血瓊脂平板和中國(guó)藍(lán)或麥康凱瓊脂平板TM/MTM瓊脂平板觀察菌落涂片、染色、鏡檢生化試驗(yàn)藥敏試驗(yàn)報(bào)告結(jié)果綜合技能訓(xùn)練五尿液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)1、尿液標(biāo)本的采集與運(yùn)送中段尿采集法膀胱穿刺法導(dǎo)尿法集尿法

綜合技能訓(xùn)練五尿液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)2、尿液標(biāo)本的運(yùn)送和保存尿液標(biāo)本采集后應(yīng)立即置于無(wú)菌帶蓋容器中送檢、及時(shí)接種，室溫下保存時(shí)間不能超過(guò)2h，4℃冷藏時(shí)間不能超過(guò)8h，疑為淋病奈瑟菌感染患者的尿液標(biāo)本不能冷藏保存。

綜合技能訓(xùn)練五尿液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)三、培養(yǎng)及鑒定1、涂片檢查普通細(xì)菌檢查：取沉淀物涂片行革蘭染色鏡檢。如發(fā)現(xiàn)革蘭陽(yáng)性或陰性細(xì)菌，即可做出初步報(bào)告“找到革蘭陽(yáng)（陰）性桿菌或球菌”；見(jiàn)到革蘭陽(yáng)性，卵圓形的芽生孢子和管狀假菌絲，報(bào)告“找到假絲酵母細(xì)菌，形似白假絲酵母菌”。綜合技能訓(xùn)練五尿液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)1、涂片檢查淋病奈瑟菌檢查：沉淀物涂片行革蘭染色，鏡檢如查見(jiàn)白細(xì)胞內(nèi)或白細(xì)胞外有革蘭陰性雙球菌、腎形，報(bào)告為“找到革蘭陰性雙球菌，疑似淋病奈瑟菌”。念珠菌檢查：取沉淀物置于潔凈玻片上，加蓋玻片后用高倍鏡觀察，若沉渣太多，可滴加10%氫氧化鉀，使之溶解后再鏡檢。同時(shí)制成薄片，干燥、固定、革蘭染色后鏡檢。如發(fā)現(xiàn)卵圓形芽生孢子和管狀的假菌絲，且革蘭染色為陽(yáng)性，可初步報(bào)告“檢出念珠菌”。

綜合技能訓(xùn)練五尿液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)1、涂片檢查結(jié)核分枝桿菌檢查：尿液經(jīng)4000r/min離心10min，取沉淀物制作2張涂片，分別用萋-尼抗酸染色和潘本漢抗酸染色，如兩張均見(jiàn)紅色桿菌，報(bào)告“找到抗酸桿菌”。如萋-尼抗酸染色見(jiàn)紅色桿菌，而潘本漢抗酸染色未見(jiàn)紅色桿菌，則為恥垢分枝桿菌。綜合技能訓(xùn)練五尿液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)1、涂片檢查鉤端螺旋體檢查：取患者發(fā)病1W后的尿液5～10ml，以3000r/min離心10min。取尿液沉淀物滴于載玻片上，覆以蓋玻片后于暗視野顯微鏡下檢查，若發(fā)現(xiàn)一串細(xì)密亮珠、兩端呈鉤狀且沿縱軸旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)的螺旋體時(shí)，可報(bào)告“找到螺旋體”。如鏡檢未找到細(xì)菌可報(bào)告“未查見(jiàn)細(xì)菌”。

綜合技能訓(xùn)練五尿液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)2、分離培養(yǎng)與鑒定通常取患者中段尿作定量培養(yǎng)，用定量接種環(huán)取混勻尿液，連續(xù)均勻劃線接種于血瓊脂平板上，置35℃培養(yǎng)18～24h后計(jì)數(shù)菌落，再計(jì)算出每毫升尿液中的細(xì)菌數(shù)。除接種至血平板進(jìn)行定量外，還需分區(qū)劃線接種至麥康凱或中國(guó)藍(lán)瓊脂平板進(jìn)行菌株篩查。第二日觀察平板上有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，如果有，確認(rèn)是陽(yáng)性或陰性菌后，選擇相應(yīng)的鑒定卡片，挑取菌落制成菌懸液，利用微生物鑒定儀，進(jìn)行細(xì)菌藥敏鑒定試驗(yàn)。綜合技能訓(xùn)練五尿液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)四、結(jié)果報(bào)告綜合技能訓(xùn)練五尿液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)陰性結(jié)果報(bào)告：應(yīng)報(bào)告“接種1μl無(wú)菌生長(zhǎng)（<1000CFU/ml，無(wú)臨床意義的生長(zhǎng)）”，或“接種10μl無(wú)菌生長(zhǎng)（<100CFU/ml，無(wú)臨床意義的生長(zhǎng)）”，僅報(bào)告“無(wú)菌生長(zhǎng)”不準(zhǔn)確。陽(yáng)性結(jié)果報(bào)告：尿液細(xì)菌培養(yǎng)檢查必須報(bào)告細(xì)菌的種屬、菌落計(jì)數(shù)及藥敏試驗(yàn)結(jié)果。在有一些情況下也會(huì)出現(xiàn)無(wú)明確意義的陽(yáng)性結(jié)果報(bào)告，例如：純培養(yǎng)出革蘭×性×菌生長(zhǎng)，菌落計(jì)數(shù)×CFU/ml；三種或三種以上混合菌生長(zhǎng)，菌落計(jì)數(shù)×CFU/ml。從泌尿系統(tǒng)感染患者的同份尿液中可同時(shí)檢出兩種致病菌，當(dāng)檢出三種或以上不同微生物，應(yīng)認(rèn)為標(biāo)本采集或處理不當(dāng)被污染。綜合技能訓(xùn)練五尿液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)五、臨床意義綜合技能訓(xùn)練五尿液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)一般認(rèn)為尿液細(xì)菌計(jì)數(shù)不應(yīng)超過(guò)103CFU/ml，若革蘭陽(yáng)性球菌大于104CFU/ml，革蘭陰性桿菌大于105CFU/ml，應(yīng)考慮為泌尿系統(tǒng)感染。如尿液中細(xì)菌數(shù)少于104CFU/ml或介于104～105CFU/ml之間，反復(fù)培養(yǎng)均查出同一細(xì)菌時(shí)，一般也認(rèn)為是病原菌。綜合技能訓(xùn)練五尿液標(biāo)本微生物檢驗(yàn)臨床表現(xiàn)白細(xì)胞尿≥104/ml菌尿（CFU/ml）病原菌種數(shù)解釋是否做藥敏試驗(yàn)有癥狀+大腸埃希菌或腐生葡萄球菌≥103其他菌種≥105≤2尿路感染、急性腎盂腎炎菌落計(jì)數(shù)≥104有意義急性前列腺炎菌落計(jì)數(shù)≥103有意義是有癥狀+<103有炎癥但無(wú)菌尿，正在使用抗菌藥物，慢生長(zhǎng)或難生長(zhǎng)病原菌感染，無(wú)病原菌感染不確定有癥狀+≥105≤2免疫功能正?；颊撸褐貜?fù)做尿液細(xì)菌學(xué)和細(xì)胞學(xué)檢查（可能處于尿路感染的起始階段）免疫功能缺陷患者（如化療