血液學(xué)檢驗(yàn)技術(shù) 課件 20.項(xiàng)目二十：血液凝固與凝血因子檢驗(yàn)

單元四血栓與止血檢驗(yàn)及其應(yīng)用項(xiàng)目二十血液凝固與凝血因子檢驗(yàn)任務(wù)一血液凝固目錄項(xiàng)目二十血液凝固與凝血因子檢驗(yàn)任務(wù)二凝血因子檢驗(yàn)項(xiàng)目二十血液凝固與凝血因子檢驗(yàn)1.掌握：血液凝固的概念；凝血因子的名稱和分類(lèi)；凝血過(guò)程的三個(gè)途徑；共同途徑的三個(gè)階段；APTT、PT、TT及FIB的測(cè)定方法、參考區(qū)間及臨床意義。2.熟悉：各凝血因子在凝血過(guò)程中的作用；內(nèi)源和外源凝血途徑的概念；血液凝固機(jī)制圖；CT和ACT的測(cè)定方法、參考區(qū)間及臨床意義。3.了解：各凝血因子的特征；FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅩ促凝活性和FⅧ、FⅨ、FⅪ和FⅫ促凝活性及FⅩⅢ定性檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)原理、參考值和臨床意義。4.具備凝血檢測(cè)標(biāo)本的采集和處理能力，具有CT、ACT、APTT、PT、TT及FIB的檢測(cè)能力。5.學(xué)會(huì)依據(jù)臨床要求有選擇性進(jìn)行凝血功能相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)，并能根據(jù)結(jié)果提示臨床常見(jiàn)的出凝血疾病。學(xué)習(xí)目標(biāo)任務(wù)一血液凝固項(xiàng)目二十血液凝固與凝血因子檢驗(yàn)血液凝固的概念血液凝固是指血液由液體狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)槟z狀態(tài)的過(guò)程。血液凝固任務(wù)一血液凝固

（一）凝血因子參加血液凝固的凝血因子至少有14個(gè)：12個(gè)經(jīng)典的凝血因子：包括FⅠ、FⅡ、FⅢ、FⅣ、FⅤ、FⅦ、FⅧ、FⅨ、FⅩ、FⅪ、FⅫ、FⅩⅢ2個(gè)激肽系統(tǒng)的因子：激肽釋放酶原（PK）和高分子量激肽原（HMWK或HK）

任務(wù)一血液凝固

凝血因子的特征分為以下四類(lèi)依賴維生素K的凝血因子：FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩ接觸激活因子：FⅫ、FⅪ、PK、HMWK凝血酶敏感因子：FⅠ、FⅤ、FⅧ、FⅩⅢ其他凝血因子：TF、Ca2+、vWF任務(wù)一血液凝固（一）凝血因子

（二）凝血機(jī)制內(nèi)源凝血途徑（指從FⅫ激活到FⅩ被激活的過(guò)程）外源凝血途徑（從FⅢ的釋放到FⅩ被激活的過(guò)程）共同途徑（從FⅩ的激活到纖維蛋白形成的過(guò)程）任務(wù)一血液凝固

共同凝血途徑包括以下三個(gè)階段：

（1）凝血酶原酶（凝血活酶）生成（2）凝血酶生成（3）纖維蛋白形成任務(wù)一血液凝固（二）凝血機(jī)制

任務(wù)一血液凝固（二）凝血機(jī)制任務(wù)二凝血因子檢驗(yàn)項(xiàng)目二十血液凝固與凝血因子檢驗(yàn)

凝血因子檢測(cè)項(xiàng)目（一）全血凝固時(shí)間（CT）測(cè)定（二）活化凝血時(shí)間（ACT）測(cè)定（三）活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）測(cè)定（四）血漿凝血酶原時(shí)間（PT）測(cè)定（五）凝血酶時(shí)間測(cè)定(TT)及糾正試驗(yàn)（六）血漿纖維蛋白原（FIB）測(cè)定（七）FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅩ促凝活性測(cè)定（八）FⅧ、FⅨ、FⅪ和FⅫ促凝活性測(cè)定（九）FⅩⅢ檢測(cè)任務(wù)二凝血因子檢驗(yàn)

（一）全血凝固時(shí)間（CT）測(cè)定【實(shí)驗(yàn)原理】離體的靜脈血與試管內(nèi)壁接觸后，血液中的FⅫ被激活，啟動(dòng)內(nèi)源凝血途徑，從而使血液發(fā)生凝固。從靜脈血離開(kāi)血管后至完全發(fā)生凝固所需要的時(shí)間即為CT?！緟⒖紖^(qū)間】試管法：4～12分鐘；硅管法：15～30分鐘；塑料管法：10～19分鐘。【臨床意義】1.延長(zhǎng)：①內(nèi)源凝血途徑相關(guān)凝血因子缺乏或活性下降；②共同凝血途徑相關(guān)凝血因子缺乏或活性下降，③原發(fā)或繼發(fā)性纖溶亢進(jìn)，④血液循環(huán)中存在病理性抗凝物質(zhì)。2.縮短：①高凝狀態(tài)；②血栓性疾病。任務(wù)二凝血因子檢驗(yàn)

（二）活化凝血時(shí)間（ACT）測(cè)定【實(shí)驗(yàn)原理】在待測(cè)血液中加入白陶土-腦磷脂的混懸液以充分激活的FⅪ、FⅫ，并為凝血反應(yīng)提供豐富的催化表面，啟動(dòng)內(nèi)源凝血途徑，血液發(fā)生凝固所需時(shí)間即ACT。同試管法CT測(cè)定?！緟⒖紖^(qū)間】凝固法：1～2.5分鐘?！九R床意義】1.同CT相同。2.用于監(jiān)測(cè)肝素抗凝治療。任務(wù)二凝血因子檢驗(yàn)

（三）活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）測(cè)定【實(shí)驗(yàn)原理】37℃條件下，在待測(cè)血漿中加入足夠量的活化接觸因子作為激活劑(如白陶土等)，并加入部分凝血活酶代替PF3，在Ca2+的參與下，即可激活FⅫ而啟動(dòng)內(nèi)源凝血途徑，使血漿發(fā)生凝固。從加入Ca2+到血漿凝固所需的時(shí)間即APTT。【參考區(qū)間】凝固法：25～35秒，超過(guò)正常對(duì)照值10秒以上為異常?！九R床意義】1.延長(zhǎng)：血漿中內(nèi)源凝血系統(tǒng)凝血因子（FⅫ、FⅪ、FⅨ、FⅧ等）或共同途徑中的凝血因子（FⅠ、FⅡ、FⅤ、FⅩ）水平下降或缺乏；原發(fā)或繼發(fā)性纖溶亢進(jìn)，血液循環(huán)中存在病理性抗凝物質(zhì)。2.縮短：高凝狀態(tài)；血栓性疾病。3.肝素抗凝治療的監(jiān)測(cè)。任務(wù)二凝血因子檢驗(yàn)

（四）血漿凝血酶原時(shí)間（PT）測(cè)定【實(shí)驗(yàn)原理】在37℃條件下,在待測(cè)血漿中加入足量的組織凝血活酶(含組織因子、磷脂)作為激活劑，并加入適量Ca2+，即可激活FⅦ而啟動(dòng)外源凝血途徑，使血漿發(fā)生凝固。從加入Ca2+到血漿開(kāi)始凝固所需的時(shí)間即為PT。【參考區(qū)間】PT(s)11～13秒，PTR0.85～1.15，INR0.8～1.5。PTA70%～130%?！九R床意義】1.延長(zhǎng)：①先天性凝血因子缺乏，②獲得性凝血因子缺乏，③原發(fā)性及繼發(fā)性纖溶亢進(jìn)，④血液中存在抗凝物質(zhì)或口服抗凝劑等。2.縮短：①先天性FⅤ增多癥，②高凝狀態(tài)，③血栓性疾病，④長(zhǎng)期口服避孕藥。3.口服抗凝劑的監(jiān)測(cè)：口服抗凝劑期間，INR維持在2～3為最佳抗凝效果。任務(wù)二凝血因子檢驗(yàn)

（五）凝血酶時(shí)間測(cè)定(TT)及糾正試驗(yàn)【實(shí)驗(yàn)原理】在37℃條件下,向待測(cè)血漿加入“標(biāo)準(zhǔn)化”凝血酶，測(cè)定開(kāi)始出現(xiàn)纖維蛋白絲所需的時(shí)間即為T(mén)T。凝血酶時(shí)間糾正試驗(yàn)又稱甲苯胺藍(lán)糾正試驗(yàn)?！緟⒖紖^(qū)間】凝固法：16～18秒，超過(guò)正常對(duì)照3秒以上。在TT延長(zhǎng)的待測(cè)血漿中加入甲苯胺藍(lán)后，TT縮短5秒以上視為糾正?！九R床意義】1.延長(zhǎng)：纖維蛋白原的量和質(zhì)存在異常；血液循環(huán)中存在肝素或肝素樣抗凝物質(zhì)；原發(fā)性及繼發(fā)性纖溶亢進(jìn)。2.縮短：主要見(jiàn)于異常纖維蛋白血癥或巨球蛋白血癥等。3.溶栓治療的監(jiān)測(cè)任務(wù)二凝血因子檢驗(yàn)

（六）血漿纖維蛋白原（FIB）測(cè)定【實(shí)驗(yàn)原理】在待測(cè)血漿中加入足量的凝血酶，在凝血酶作用下纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白而使血液凝固，測(cè)定凝固的時(shí)間。血漿中纖維蛋白原的量與凝固時(shí)間成負(fù)相關(guān)，將檢測(cè)結(jié)果與以國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品為參比血漿制成的標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比可得出纖維蛋白原的含量?！緟⒖紖^(qū)間】凝血酶法：2～4g/L。【臨床意義】1.增高：①感染，②無(wú)菌性炎癥，③高凝狀態(tài)與血栓性疾病，④惡性腫瘤，⑤外傷、外科手術(shù)后及放射治療后。2.減低：①原發(fā)性纖維蛋白原質(zhì)或量的異常，②原發(fā)或繼發(fā)性纖溶亢進(jìn)。3.抗凝治療、溶栓治療的監(jiān)測(cè)。任務(wù)二凝血因子檢驗(yàn)

（七）FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅩ促凝活性測(cè)定【實(shí)驗(yàn)原理】將待測(cè)血漿分別與缺乏凝血因子FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅩ的血漿混合，測(cè)定混合后血漿的凝血酶原時(shí)間（PT）。將混合血漿的PT與健康人新鮮混合血漿（測(cè)定健康人新鮮混合血漿PT并制作標(biāo)準(zhǔn)曲線）做比較，計(jì)算出待測(cè)血漿相當(dāng)于健康人血漿凝血因子活性的百分比。【參考區(qū)間】FⅡ：C、FⅤ：C、FⅦ：C、FX：C70%～120%?！九R床意義】1.活性增高：主要見(jiàn)于血栓前狀態(tài)和血栓性疾病。2.活性減低：①肝臟疾??；②維生素K缺乏和口服抗凝劑；③彌散性血管內(nèi)凝血及循環(huán)中存在上述因子的抑制物。④先天性FⅡ、FⅤ、FⅦ、FⅩ缺乏癥。任務(wù)二凝血因子檢驗(yàn)

（八）FⅧ、FⅨ、FⅪ和FⅫ促凝活性測(cè)定【實(shí)驗(yàn)原理】在待測(cè)血漿中分別與缺乏凝血因子FⅧ、FⅨ、FⅪ和FⅫ的基質(zhì)血漿混合，測(cè)定混合后血漿的APTT。將混合血漿的APTT與健康人新鮮混合血漿（測(cè)定健康人新鮮混合血漿APTT并制作標(biāo)準(zhǔn)曲線）做比較，計(jì)算出待測(cè)血漿相當(dāng)于健康人血漿凝血因子活性的百分比?！緟⒖紖^(qū)間】FⅧ：C：103％±25.7％；FⅨ：C：98.1％±30.4％；FⅪ：C：100％±18.4％；FⅫ：C：92.4％±20.7％。【臨床意義】1.活性增高：見(jiàn)于高凝狀態(tài)、血栓前狀態(tài)和血栓性疾病，肝臟疾病時(shí)FⅧ：C活性可增高。2.活性減低：①血友?。虎谘苄匝巡?；③肝臟疾病；④先天性FⅪ、FⅫ缺乏癥。任務(wù)二凝血因子檢驗(yàn)

（九）FⅩⅢ檢測(cè)1.FⅩⅢ定性檢測(cè)【實(shí)驗(yàn)原理】待測(cè)血漿加入Ca2+后形成纖維蛋白單體，F(xiàn)ⅩⅢa可以使纖維蛋白單體交聯(lián)后形成不溶性的纖維蛋白聚合物凝塊，此凝塊不溶于5mol/L尿素溶液或2％單氨（碘）醋酸溶液。如果待測(cè)血漿FⅩⅢ活性缺乏，則形成的纖維蛋白凝塊易溶于上述溶液中。因此，可以根據(jù)待測(cè)血漿對(duì)缺乏FⅩⅢ血漿的糾正程度來(lái)測(cè)定FⅩⅢ：C?！緟⒖紖^(qū)間】24h內(nèi)纖維蛋白凝塊不溶解?！九R床意義】見(jiàn)亞基抗原檢測(cè)。任務(wù)二凝血因子檢驗(yàn)

（九）FⅩⅢ檢測(cè)2.FⅩⅢ亞基抗原檢測(cè)（火箭電泳法）【實(shí)驗(yàn)原理】FⅩⅢ是由兩個(gè)A亞基和兩個(gè)B亞基構(gòu)成的四聚體，在含有A亞基和B亞基抗血清的瓊脂凝膠板中，加入待測(cè)血漿（抗原），通過(guò)電泳形成A亞基或B亞基與抗血