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文檔簡介
2020-2024年五年高考真題分類匯編PAGEPAGE1專題18基因工程五年考情考情分析基因工程2020年山東卷第5題2020年山東卷第15題2020年山東卷第25題2021年山東卷第13題2021年山東卷第25題2022年山東卷第13題2022年山東卷第25題2023年山東卷第25題2024年山東卷第13題2024年山東卷第25題通常以具體情境,考查基因工程的原理、工具和基本操作程序,啟動子的含義和功能,PCR技術的原理,限制酶的作用、基因表達載體的組成、啟動子的作用等,題目難度系數(shù)大;其中啟動子的插入位點和插入方向、報告基因的表達等都需要學生有很強的理解信息、獲取信息的能力、以及綜合運用知識解決問題的科學思維和科學探究能力,通過基因工程考查學生的結構與功能觀。1、(2024山東高考)關于“DNA的粗提取與鑒定”實驗,下列說法正確的是()A.整個提取過程中可以不使用離心機B.研磨液在4℃冰箱中放置幾分鐘后,應充分搖勻再倒入燒杯中C.鑒定過程中DNA雙螺旋結構不發(fā)生改變D.僅設置一個對照組不能排除二苯胺加熱后可能變藍的干擾【答案】A【解析】〖祥解〗DNA的粗提取與鑒定的實驗原理是:①DNA的溶解性,DNA和蛋白質等其他成分在不同濃度的氯化鈉溶液中的溶解度不同,利用這一特點可以選擇適當濃度的鹽溶液可以將DNA溶解或析出,從而達到分離的目的;②DNA不溶于酒精溶液,細胞中的某些蛋白質可以溶解于酒精,利用這一原理可以將蛋白質和DNA進一步分離;③在沸水浴的條件下DNA遇二苯胺會呈現(xiàn)藍色?!驹斘觥緼、在DNA的粗提取與鑒定實驗中,可將獲得的研磨液用紗布過濾后,在4℃的冰箱中放置幾分鐘,再取上清液,也可以直接將研磨液用離心機進行離心后取上清液,A正確;B、研磨液在4℃冰箱中放置幾分鐘后,DNA在上清液中,應取上清液倒入燒杯中,B錯誤;C、鑒定過程中用沸水浴加熱,DNA雙螺旋結構會發(fā)生改變,C錯誤;D、加入二苯胺試劑后沸水浴處理的時間要在5分鐘以上,且要等到冷卻后再觀察結果,這樣才可以觀察到較為明顯的顯色反應,僅設置一個對照組可以排除二苯胺加熱后可能變藍的干擾,D錯誤。故選A。2、(2024山東高考)研究發(fā)現(xiàn)基因L能夠通過脫落酸信號途徑調控大豆的逆境響應。利用基因工程技術編輯基因L,可培育耐鹽堿大豆品系。在載體上的限制酶BsaI切點處插入大豆基因L的向導DNA序列,將載體導入大豆細胞后,其轉錄產(chǎn)物可引導核酸酶特異性結合基因組上的目標序列并發(fā)揮作用。載體信息、目標基因L部分序列及相關結果等如圖所示。(1)用PCR技術從大豆基因組DNA中擴增目標基因L時,所用的引物越短,引物特異性越______(填“高”或“低”)。限制酶在切開DNA雙鏈時,形成的單鏈突出末端為黏性末端,若用BsaI酶切大豆基因組DNA,理論上可產(chǎn)生的黏性末端最多有______種。載體信息如圖甲所示,經(jīng)BsaI酶切后,載體上保留的黏性末端序列應為5'-______-3'和5'-______-3'。(2)重組載體通過農桿菌導入大豆細胞,使用抗生素______篩選到具有該抗生素抗性的植株①∶④。為了鑒定基因編輯是否成功,以上述抗性植株的DNA為模板,通過PCR擴增目標基因L,部分序列信息及可選用的酶切位點如圖乙所示,PCR產(chǎn)物完全酶切后的電泳結果如圖丙所示。據(jù)圖可判斷選用的限制酶是______,其中純合的突變植株是______(填序號)。(3)實驗中獲得1株基因L成功突變的純合植株,該植株具有抗生素抗性,檢測發(fā)現(xiàn)其體細胞中只有1條染色體有T-DNA插入。用抗生素篩選這個植株的自交子代,其中突變位點純合且對抗生素敏感的植株所占比例為______,篩選出的敏感植株可用于后續(xù)的品種選育?!敬鸢浮浚?)①.低②.4③.GTTT④.AAAC(2)①.卡那霉素②.SacⅠ③.④(3)1/4【解析】〖祥解〗1、基因工程的基本操作程序包括目的基因的篩選與獲取,基因表達載體的構建,將目的基因導入受體細胞和目的基因的檢測與鑒定。2、PCR是一項根據(jù)DNA半保留復制的原理,在體外提供參與DNA復制的各種組分與反應條件,對目的基因的核苷酸序列進行大量復制的技術,利用PCR可以快速的獲取和擴增目的基因?!拘?詳析】引物是一小段能與DNA母鏈的一段堿基序列互補配對的短單鏈核酸,用于PCR的引物長度通常為20~30個核苷酸。由此可知,在利用PCR技術從大豆基因組DNA中擴增目的基因時,所用的引物越短,則引物的特異性就越低。根據(jù)題意可知,限制酶在切開DNA雙鏈時,形成的單鏈突出末端為黏性末端,若用BsaI酶切大豆基因組DNA,由圖可知該序列中有兩個該酶切位點,因此最多可產(chǎn)生4種黏性末端。根據(jù)圖甲所示的載體信息,經(jīng)BsaI酶切后,載體上保留的黏性末端序列應為5'-GTTT-3'和5'-AAAC-3'?!拘?詳析】根據(jù)圖示信息可知,重組載體通過農桿菌導入大豆細胞當中的片段包含了卡那霉素抗性基因,因此可以通過使用卡那霉素篩選到具有該抗生素抗性的植株。根據(jù)圖甲可知,目標基因L的目標序列跟突變序列之間的差異只有在SacⅠ酶切位點上存在差異,BamHⅠ和EcoRⅠ這兩個酶切位點完全相同,根據(jù)圖丙及題意可知,所展示的電泳結果可知,要以上述抗性植株的DNA為模板,通過PCR擴增目標基因L,并對PCR產(chǎn)物完全酶切后進行電泳從而判斷植株含有的是目標序列還是突變序列,因此只能選用限制酶SacⅠ,限制酶SacⅠ在突變序列存在酶切位點,但是目標序列沒有,因此經(jīng)過該酶酶切后突變序列的電泳條帶會出現(xiàn)兩條,目標序列是一條帶,根據(jù)圖丙結果可知,只有④為純和突變的植株。【小問3詳析】根據(jù)題意可知,在實驗當中獲得了一株基因l成功突變的純合之中,已知該植株具有抗生素抗性,經(jīng)過檢測呢卻發(fā)現(xiàn)其體細胞中只有一條染色體含有T-DNA插入。根據(jù)圖示可知,抗生素抗性基因在T-DNA片段上,因此如果用抗生素來篩選該植株進行自交,可知其配子中含有抗生素抗性基因的比例為1/2,不含T-DNA(對抗生素敏感)的配子比例為1/2,因此突變位點純合且對抗生素敏感的植株所占比例應該為1/2×1/2=1/4,純突變位點純合且具有抗生素抗性的植株所占比例應該為3/4,可以篩選出的敏感植株可用于后續(xù)的品種選育。3、(2023山東高考)科研人員構建了可表達J-V5融合蛋白的重組質粒并進行了檢測,該質粒的部分結構如圖甲所示,其中V5編碼序列表達標簽短肽V5。(1)與圖甲中啟動子結合的酶是____________。除圖甲中標出的結構外,作為載體,質粒還需具備的結構有________________(答出2個結構即可)。(2)構建重組質粒后,為了確定J基因連接到質粒中且插入方向正確,需進行PCR檢測,若僅用一對引物,應選擇圖甲中的引物___________。已知J基因轉錄的模板鏈位于b鏈,由此可知引物F1與圖甲中J基因的_____________(填“a鏈”或“b鏈”)相應部分的序列相同。(3)重組質粒在受體細胞內正確表達后,用抗J蛋白抗體和抗V5抗體分別檢測相應蛋白是否表達以及表達水平,結果如圖乙所示。其中,出現(xiàn)條帶1證明細胞內表達了__________,條帶2所檢出的蛋白______________(填“是”或“不是”)由重組質粒上的J基因表達的?!敬鸢浮浚?)①.RNA聚合酶②.限制酶切割位點、標記基因、復制原點等
(2)①.F2和R1或F1與R2
②.a鏈(3)①.J-V5融合蛋白②.不是【解析】〖祥解〗基因工程的關鍵步驟是構建基因表達載體,基因表達載體主要由啟動子、目的基因、標記基因和終止子組成,其中標記基因用于篩選重組DNA分子,可以是四環(huán)素、氨芐青霉素等抗性基因,也可以是熒光蛋白基因或產(chǎn)物能顯色的基因?!拘?詳析】基因表達載體的構建啟動子是為了啟動下游基因的“表達”,表達首先需要轉錄,因此RNA聚合酶識別和結合的部位才是轉錄的起始。作為運載體必須具備的條件:①要具有限制酶的切割位點;②要有標記基因(如抗性基因),以便于重組后重組子的篩選;③能在宿主細胞中穩(wěn)定存在并復制;④是安全的,對受體細胞無害,而且要易從供體細胞分離出來,圖中甲有啟動子和終止子等,因此質粒還需具備的結構有限制酶的切割位點、標記基因、復制原點等?!拘?詳析】據(jù)圖甲可知,引物F2與R1或F1與R2結合部位包含J基因的堿基序列,因此推測為了確定J基因連接到質粒中且插入方向正確,進行PCR檢測時,若僅用一對引物,應選擇圖甲中的引物F2和R1或F1與R2。b是模板鏈,而根據(jù)圖上啟動子和終止子的位置可知轉錄方向是圖上從左向右,對應的模板鏈方向應該是3’-5',非模板鏈(也就是a鏈)是5'-3';考慮到DNA復制的方向是子鏈的5’-3',引物基礎上延伸的方向肯定是5'-3',所以引物結合的單鏈其方向是3'-5';圖中F1是前引物,在左側,所以其配對的單鏈是3’-5'的b鏈,故其序列應該與a鏈相應部分的序列相同。【小問3詳析】據(jù)圖乙可知,用抗J蛋白抗體和抗V5抗體分別檢測,均出現(xiàn)條帶1,說明條帶1是J-V5融合蛋白。抗J蛋白抗體檢測出現(xiàn)條帶2,抗V5抗體檢測不出現(xiàn)條帶2,說明條帶2所檢出的蛋白不是由重組質粒上的融合的J基因表達的。4、(2022山東高考)關于“DNA的粗提取與鑒定”實驗,下列說法錯誤的是()A.過濾液沉淀過程在4℃冰箱中進行是為了防止DNA降解B.離心研磨液是為了加速DNA的沉淀C.在一定溫度下,DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍色D.粗提取的DNA中可能含有蛋白質【答案】B【解析】〖祥解〗DNA的粗提取與鑒定的實驗原理是:①DNA的溶解性,DNA和蛋白質等其他成分在不同濃度的氯化鈉溶液中的溶解度不同,利用這一特點可以選擇適當濃度的鹽溶液可以將DNA溶解或析出,從而達到分離的目的;②DNA不溶于酒精溶液,細胞中的某些蛋白質可以溶解于酒精,利用這一原理可以將蛋白質和DNA進一步分離;③在沸水浴的條件下DNA遇二苯胺會呈現(xiàn)藍色?!驹斘觥緼、低溫時DNA酶的活性較低,過濾液沉淀過程在4℃冰箱中進行是為了防止DNA降解,A正確;B、離心研磨液是為了使細胞碎片沉淀,B錯誤;C、在沸水浴條件下,DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍色,C正確;D、細胞中的某些蛋白質可以溶解于酒精,可能有蛋白質不溶于酒精,在95%的冷酒精中與DNA一塊兒析出,故粗提取的DNA中可能含有蛋白質,D正確。故選B。5、(2022山東高考)某種類型的白血病由蛋白P引發(fā),蛋白UBC可使P被蛋白酶識別并降解,藥物A可通過影響這一過程對該病起到治療作用。為探索藥物A治療該病的機理,需構建重組載體以獲得融合蛋白FLAG-P和FLAG-P△。P△是缺失特定氨基酸序列的P,F(xiàn)LAG是一種短肽,連接在P或P△的氨基端,使融合蛋白能與含有FLAG抗體的介質結合,但不影響P或P△的功能。(1)為構建重組載體,需先設計引物,通過PCR特異性擴增P基因。用于擴增P基因的引物需滿足的條件是_______、為使PCR產(chǎn)物能被限制酶切割,需在引物上添加相應的限制酶識別序列,該限制酶識別序列應添加在引物的______(填“3'端”或“5'端”)。(2)PCR擴增得到的P基因經(jīng)酶切連接插入載體后,與編碼FLAG的序列形成一個融合基因,如圖甲所示,其中“ATGTGCA”為P基因編碼鏈起始序列。將該重組載體導入細胞后,融合基因轉錄出的mRNA序列正確,翻譯出的融合蛋白中FLAG的氨基酸序列正確,但P基因對應的氨基酸序列與P不同。據(jù)圖甲分析,出現(xiàn)該問題的原因是______。修改擴增P基因時使用的帶有EcoRⅠ識別序列的引物來解決該問題,具體修改方案是______。(3)融合蛋白表達成功后,將FLAG-P、FLAG-P△、藥物A和UBC按照圖乙中的組合方式分成5組。各組樣品混勻后分別流經(jīng)含F(xiàn)LAG抗體的介質,分離出與介質結合的物質并用UBC抗體檢測,檢測結果如圖丙所示。已知FLAG-P和FLAG-P△不能降解UBC,由①②③組結果的差異推測,藥物A的作用是______;由②④組或③⑤組的差異推測,P△中缺失的特定序列的作用是______。(4)根據(jù)以上結果推測,藥物A治療該病的機理是______?!敬鸢浮浚?)①.能與P基因母鏈的一段堿基序列互補配對、短單鏈核酸
②.5'端(2)①.P基因編碼鏈的第一個堿基與EcoRⅠ識別序列的最后兩個堿基編碼一個氨基酸,導致mRNA的密碼子被錯位讀取。
②.在引物中的EcoRⅠ識別序列3'端添加1個堿基(3)①.增強FLAG-P與UBC的結合②.參與P與UBC的結合(4)藥物A通過增強P與UBC結合促進P降解。【解析】〖祥解〗PCR過程:①變性:當溫度上升到90℃以上時,雙鏈DNA解旋為單鏈;②溫度下降到50℃左右時,兩種引物通過堿基互補配對與兩條單鏈DNA結合;③延伸:當溫度上升到72℃左右時,溶液中的4種脫氧核苷酸在耐高溫的DNA聚合酶的作用下,根據(jù)堿基互補配對原則合成新的DNA鏈。【小問1詳析】引物是一小段能與DNA母鏈的一段堿基序列互補配對的短單鏈核苷酸,因此設計擴增P基因的引物,需要兩種引物分別與兩條模板鏈3'端的堿基序列互補。DNA聚合酶延伸時,是將脫氧核苷酸加到引物的3'端,為了不破壞目的基因,該限制酶識別序列應添加在引物的5'端?!拘?詳析】融合基因轉錄出的mRNA序列正確,翻譯出的融合蛋白中FLAG的氨基酸序列正確,但P基因對應的氨基酸序列與P不同,說明P基因翻譯時出錯。由圖可看出,在轉錄出的mRNA中,限制酶識別序列對應的最后兩個堿基與P基因對應的第一個堿基構成一個密碼子,導致讀碼框改變,翻譯出的氨基酸序列改變,可通過在EcoRⅠ識別序列3'端添加1個堿基,使其堿基數(shù)目加上FLAG的堿基數(shù)目為3的倍數(shù),這樣能保證P基因轉錄出的mRNA上的讀碼框不改變,能夠正常翻譯?!拘?詳析】①組僅添加UBC,處理后,用UBC抗體檢測,不出現(xiàn)雜交帶;②組添加UBC和FLAG-P,出現(xiàn)雜交帶;③組添加UBC、藥物A和FLAG-P,雜交帶更加明顯,說明藥物A的作用是促進UBC與FLAG-P的結合。由②④組或③⑤組的差異在于②③組使用FLAG-P,出現(xiàn)雜交帶;④⑤組使用FLAG-P△,不出現(xiàn)雜交帶,據(jù)此推測P△中缺失的特定序列是與UBC結合的關鍵序列。【小問4詳析】根據(jù)(3)的分析推測,藥物A促進UBC與FLAG-P的結合,從而促進蛋白P被蛋白酶識別并降解,達到治療的目的?!尽狐c石成金』】本題難點在于分析翻譯出錯的原因,需要結合翻譯相關知識對圖進行仔細分析方可得出結論。6、(2020山東高考)雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)與脫氧核苷三磷酸(dNTP)的結構如圖所示。已知ddNTP按堿基互補配對的方式加到正在復制的子鏈中后,子鏈的延伸立即終止。某同學要通過PCR技術獲得被32p標記且以堿基“C”為末端的、不同長度的子鏈DNA片段。在反應管中已經(jīng)有單鏈模板、引物、DNA聚合酶和相應的緩沖液等,還需要加入下列哪些原料①dGTP,dATP,dTTP,dCTP②dGTP,dATP,dTTP③α位32p標記的ddCTP④γ位32p標記的ddCTPA.①③ B.①④ C.②③ D.②④【答案】A【解析】〖祥解〗PCR條件包括:模板、引物、耐高溫DNA聚合酶、四種脫氧核苷三磷酸(dNTP),還需要一定的離子濃度等?!驹斘觥縋CR擴增DNA時,需要dGTP、dATP、dTTP、dCTP作為原料,而脫氧核苷三磷酸(dNTP)連接到子鏈上時,會斷掉2個高能磷酸鍵,為了獲得被32p標記且以堿基“C”為末端的,32p標記應位于ddCTP的α位,加入ddCTP后會終止子鏈的延伸,獲得不同長度的子鏈DNA片段,故需要①③,A正確。7、(2020山東高考)研究人員用三種基因探針,通過分子雜交技術分別對某動物三種細胞中的mRNA進行檢測,結果如下表所示。下列說法錯誤的是細胞雜交帶探針輸卵管細胞未成熟紅細胞胰島B細胞卵清蛋白基因探針有無無β—珠蛋白基因探針無有無胰島素基因探針無無有A.三種探針的核苷酸序列不同B.有雜交帶出現(xiàn)表明相應基因發(fā)生了轉錄C.用上述探針分別檢測三種細胞的DNA,實驗結果不變D.可用mRNA逆轉錄產(chǎn)生的DNA制作相應基因的探針【答案】C【解析】〖祥解〗根據(jù)題意,利用特定基因制作基因探針,分別對某動物三種細胞中的mRNA進行檢測,利用的原理是基因探針和mRNA之間可以發(fā)生堿基互補配對,由于不同的基因是選擇性表達的,因此不同細胞中的mRNA是不完全相同的?!驹斘觥緼、由于基因不同,因此制備的三種探針的核苷酸序列也不同,A正確;B、有雜交帶出現(xiàn)表明探針和mRNA之間發(fā)生了堿基互補配對,即相應基因發(fā)生了轉錄,B正確;C、同一生物不同細胞中遺傳物質相同,故用上述探針分別檢測三種細胞的DNA,都會出現(xiàn)雜交帶,C錯誤;D、可用mRNA逆轉錄產(chǎn)生的DNA,帶上相應的標記后制作成相應基因的探針,D正確。故選:C。8、(2020山東高考)基因定點整合可替換特定基因,該技術可用于單基因遺傳病的治療。苯丙酮尿癥是由PKU基因突變引起的,將正常PKU基因定點整合到PKU基因突變的小鼠胚胎干細胞的染色體DNA上,替換突變基因,可用來研究該病的基因治療過程。定點整合的過程是:從染色體DNA上突變PKU基因兩側各選擇一段DNA序列HB1和HB2,根據(jù)其堿基序列分別合成HB1和HB2,再將兩者分別與基因、連接,中間插入正常PKU基因和標記基因,構建出如圖所示的重組載體。重組載體和染色體DNA中的HB1和HB2序列發(fā)生交換,導致兩者之間區(qū)域發(fā)生互換,如圖所示。(1)構建重組載體時,常用的工具酶有________。該實驗用小鼠胚胎干細胞作為PKU基因的受體細胞以培育出轉基因小鼠,除了胚胎干細胞能大量增殖外,還因為胚胎干細胞_________。(2)為獲得小鼠的胚胎干細胞,可將小鼠囊胚中的_________取出,并用_________處理使其分散成單個細胞進行培養(yǎng),培養(yǎng)過程中大部分細胞會貼附在培養(yǎng)瓶的表面生長,這種現(xiàn)象稱為___________。(3)用圖中重組載體轉化胚胎干細胞時,會出現(xiàn)PKU基因錯誤整合。錯誤整合時,載體的兩個中至少會有一個與一起整合到染色體DNA上。已知含有的細胞具有G418的抗性,、的產(chǎn)物都能把DHPG轉化成有毒物質而使細胞死亡。轉化后的胚胎干細胞依次在含有G418及同時含有G418和DHPG的培養(yǎng)液中進行培養(yǎng),在雙重選擇下存活下來的是__________的胚胎干細胞,理由是_________。(4)將篩選得到的胚胎干細胞培育成小鼠,從個體生物學水平檢測,若小鼠__________,說明PKU基因成功表達?!敬鸢浮竣?限制酶和DNA連接酶②.具有全能性③.內細胞團細胞④.胰蛋白酶或膠原蛋白酶⑤.貼壁生長⑥.正確互換整合⑦.正確互換整合后的染色體上只有只有,無、,具有G418抗性,故能在含有G418和DHPG的培養(yǎng)液中生長,錯誤互換整合后的細胞中染色體DNA上含有和至少1個,而、的產(chǎn)物都能把DHPG轉化成有毒物質,故在含有G418和DHPG的培養(yǎng)液中錯誤整合的細胞死亡⑧.尿液中霉臭味顯著降低【解析】〖祥解〗DNA重組技術至少需要三種工具:限制性核酸內切酶(限制酶)、DNA連接酶、運載體。構建重組載體時,首先需用限制性核酸內切酶切割目的基因和運載體,再用DNA連接酶連接目的基因和運載體形成重組載體。胚胎干細胞簡稱ES或EK細胞,來源于早期胚胎或原始性腺(即囊胚期的內細胞團),因此獲取的胚胎干細胞應取自囊胚的內細胞團。結合題圖可知,正常互換后的染色體DNA上只有,而無、;錯誤整合時,載體的兩個中至少會有一個與一起整合到染色體DNA上,故由于正確互換后的細胞染色體上有,無、,故對G418有抗性,可在含G418的培養(yǎng)液中正常生活,而錯誤互換后的染色體DNA上由于含有至少1個,而、的產(chǎn)物都能使細胞死亡,故錯誤互換的細胞不能生存,據(jù)此分析?!驹斘觥浚?)構建重組載體時,常用的工具酶有限制性核酸內切酶(限制酶)、DNA連接酶。實驗用小鼠胚胎干細胞作為PKU基因的受體細胞,除了胚胎干細胞能大量增殖外,還因為胚胎干細胞具有全能性。(2)為獲得小鼠的胚胎干細胞,可將小鼠囊胚中的內細胞團細胞取出,并用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理使其分散成單個細胞進行培養(yǎng),培養(yǎng)過程中大部分細胞會貼附在培養(yǎng)瓶的表面生長,這種現(xiàn)象稱為貼壁生長。(3)已知含有的細胞具有G418的抗性,、的產(chǎn)物都能把DHPG轉化成有毒物質而使細胞死亡,據(jù)分析可知,正確互換后的染色體上只有只有,無、,錯誤互換后的細胞中染色體DNA上含有和至少1個,因此,轉化后的胚胎干細胞依次在含有G418及同時含有G418和DHPG的培養(yǎng)液中進行培養(yǎng),在雙重選擇下存活下來的是正?;Q整合的胚胎干細胞,原因是:正確互換后的染色體上只有只有,無、,具有G418抗性,故能在含有G418及同時含有G418和DHPG的培養(yǎng)液中生長,錯誤互換后的細胞中染色體DNA上含有和至少1個,而、的產(chǎn)物都能把DHPG轉化成有毒物質,因此在含有G418和DHPG的培養(yǎng)液中死亡。(4)苯丙酮尿癥是由于苯丙氨酸代謝途徑中的酶缺陷,使得苯丙氨酸不能轉變成為酪氨酸,導致苯丙氨酸及其酮酸蓄積,并從尿中大量排出,主要表現(xiàn)為智力低下,尿液中有霉臭味,將篩選得到的胚胎干細胞培育成小鼠,若PKU基因成功表達,則從個體生物學水平檢測,小鼠尿液中霉臭味顯著降低。【『點石成金』】本題考查了基因工程和胚胎工程等相關知識,要求學生能夠識記胚胎干細胞的來源,明確基因表達載體構建過程及目的基因的表達和檢測,本題難點在于序列交換后細胞的篩選。9、(2021山東高考)粗提取DNA時,向雞血細胞液中加入一定量的蒸餾水并攪拌,過濾后所得濾液進行下列處理后再進行過濾,在得到的濾液中加入特定試劑后容易提取出DNA相對含量較高的白色絲狀物的處理方式是()A.加入適量的木瓜蛋白酶B.37~40℃的水浴箱中保溫10~15分鐘C.加入與濾液體積相等的、體積分數(shù)為95%的冷卻的酒精D.加入NaCl調節(jié)濃度至2mol/L→過濾→調節(jié)濾液中NaCl濃度至0.14mol/L【答案】A【解析】〖祥解〗DNA粗提取和鑒定的原理:(1)DNA的溶解性:DNA和蛋白質等其他成分在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同;DNA不溶于酒精溶液,但細胞中的某些蛋白質溶于酒精;DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性。(2)DNA的鑒定:在沸水浴的條件下,DNA遇二苯胺會被染成藍色?!驹斘觥緼、木瓜蛋白酶可以水解DNA中的蛋白質類雜質,由于酶具有專一性,不能水解DNA,過濾后在得到的濾液中加入特定試劑后容易提取出DNA相對含量較高的白色絲狀物,A正確;B、37~40℃的水浴箱中保溫10~15分鐘不能去除濾液中的雜質,應該放在60~75℃的水浴箱中保溫10~15分鐘,使蛋白質變性析出,B錯誤;C、向雞血細胞液中加入一定量的蒸餾水并攪拌,過濾后在得到的濾液中加入與濾液體積相等的、體積分數(shù)為95%的冷卻的酒精,此時DNA析出,不會進入濾液中,C錯誤;D、加入NaCl調節(jié)濃度至2mol/L→過濾→調節(jié)濾液中NaCl濃度至0.14mol/L,DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度小,DNA析出,不會進入濾液中,D錯誤。故選A。10、(2021山東高考)人類γ基因啟動子上游的調控序列中含有BCL11A蛋白結合位點,該位點結合BCL11A蛋白后,γ基因的表達被抑制。通過改變該結合位點的序列,解除對γ基因表達的抑制,可對某種地中海貧血癥進行基因治療。科研人員擴增了γ基因上游不同長度的片段,將這些片段分別插入表達載體中進行轉化和熒光檢測,以確定BCL11A蛋白結合位點的具體位置。相關信息如圖所示。(1)為將擴增后的產(chǎn)物定向插入載體指導熒光蛋白基因表達,需在引物末端添加限制酶識別序列。據(jù)圖可知,在F1~F7末端添加的序列所對應的限制酶是____,在R末端添加的序列所對應的限制酶是_____。本實驗中,從產(chǎn)物擴增到載體構建完成的整個過程共需要____種酶。(2)將構建的載體導入除去BCL11A基因的受體細胞,成功轉化后,含F(xiàn)1~F6與R擴增產(chǎn)物的載體表達熒光蛋白,受體細胞有熒光,含F(xiàn)7與R擴增產(chǎn)物的受體細胞無熒光。含F(xiàn)7與R擴增產(chǎn)物的受體細胞無熒光的原因是____。(3)向培養(yǎng)液中添加適量的雌激素,含F(xiàn)1~F4與R擴增產(chǎn)物的受體細胞不再有熒光,而含F(xiàn)5~F6與R擴增產(chǎn)物的受體細胞仍有熒光。若γ基因上游調控序列上與引物序列所對應的位置不含有BCL11A蛋白的結合位點序列,據(jù)此結果可推測,BCL11A蛋白結合位點位于_____,理由是___?!敬鸢浮竣?(2021山東高考)SalI②.(2021山東高考)EcoRI③.(2021山東高考)6④.(2021山東高考)F7與R擴增產(chǎn)物不含完整的啟動子,熒光蛋白基因不表達⑤.(2021山東高考)引物F4與F5在調控序列上所對應序列之間的區(qū)段上⑥.(2021山東高考)根據(jù)有無熒光情況判斷,F(xiàn)1~F4與R擴增產(chǎn)物上均有結合位點,因此結合位點位于F4所對應調控序列的下游(右側);F5~F6與R擴增產(chǎn)物上均無結合位點,可知結合位點位于F5所對應調控序列的上游(左側),所以結合位點位于引物F4與F5在調控序列上所對應序列之間的區(qū)段上【解析】〖祥解〗1、據(jù)題意可知,科研人員擴增了γ基因上游不同長度的片段,據(jù)圖中注釋可知,F(xiàn)1~F7以及R位置均為引物,故擴增的序列分別是引物F1和引物R之間的序列,引物F2和引物R之間的序列,引物F3和引物R之間的序列,引物F4和引物R之間的序列,引物F5和引物R之間的序列,引物F6和引物R之間的序列,引物F7和引物R之間的序列;2、據(jù)圖中對限制酶的注釋可知,限制酶MunⅠ識別并切割后的黏性末端與限制酶EcoRⅠ識別并切割后的黏性末端相同,限制酶XhoⅠ識別并切割后的黏性末端與限制酶SalⅠ識別并切割后的黏性末端相同?!驹斘觥浚?)據(jù)題意可知,需要將擴增后的產(chǎn)物定向插入并指導熒光蛋白基因的表達,則含有啟動子的擴增后的產(chǎn)物讀取方向與熒光蛋白基因的讀取方向一致,故擴增后的產(chǎn)物中的R端與熒光蛋白基因中限制酶MunⅠ識別序列端結合,才能保證擴增后的產(chǎn)物定向插入并指導熒光蛋白基因的表達。要做到定向插入,需要引物末端兩端添加限制酶的識別序列,且被限制酶識別并切割后,兩端的黏性末端不能相同。而擴增后的產(chǎn)物中可能含有MunⅠ和XhoⅠ的識別位點,故在引物末端添加限制酶的識別序列不能被限制酶MunⅠ和XhoⅠ所識別,故應該選用添加限制酶EcoRⅠ和限制酶SalⅠ識別序列,據(jù)圖中對限制酶的注釋可知,限制酶MunⅠ識別并切割后的黏性末端與限制酶EcoRⅠ識別并切割后的黏性末端相同,故R末端添加的序列所對應的限制酶是EcoRⅠ,在F1~F7末端添加的序列所對應的限制酶是SalⅠ;熒光蛋白基因中含有限制酶EcoRⅠ的識別位點,故對載體使用限制酶MunⅠ和XhoⅠ切割。綜上所述,對載體使用限制酶MunⅠ和XhoⅠ切割,對擴增后的產(chǎn)物用限制酶EcoRⅠ和限制酶SalⅠ識別序列,然后在DNA連接酶的催化作用下,連接形成重組載體;產(chǎn)物擴增中需要使用Taq酶催化,合成更多的產(chǎn)物,故從產(chǎn)物擴增到載體構建完成的整個過程共需要6種酶,分別是Taq酶、限制酶EcoRⅠ、限制酶SalⅠ、限制酶MunⅠ、限制酶XhoⅠ、DNA連接酶;(2)受體細胞中已經(jīng)除去BCL11A基因,故擴增產(chǎn)物中的BCL11A蛋白結合位點,不會抑制熒光蛋白基因的表達;基因的表達需要RNA聚合酶與啟動子結合,才能完成熒光蛋白基因的轉錄過程;含F(xiàn)1~F6與R擴增產(chǎn)物的載體表達熒光蛋白,受體細胞有熒光,含F(xiàn)7與R擴增產(chǎn)物的受體細胞無熒光,則可能是F7與R擴增產(chǎn)物不含完整的啟動子,熒光蛋白基因不表達;(3)向培養(yǎng)液中添加適量的雌激素,此時重組載體上的BCL11A基因表達,產(chǎn)生BCL11A蛋白,BCL11A蛋白與BCL11A蛋白結合位點結合后,導致熒光蛋白基因被抑制;含F(xiàn)1~F4與R擴增產(chǎn)物的受體細胞不再有熒光,則說明BCL11A蛋白結合位點結合后在引物F4與引物R之間的序列上;含F(xiàn)5~F6與R擴增產(chǎn)物的受體細胞仍有熒光,則說明BCL11A蛋白結合位點結合后在引物F5的上游序列,故據(jù)此結果可推測,BCL11A蛋白結合位點位于引物F4與F5在調控序列上所對應序列之間的區(qū)段上。【『點石成金』】對基因工程中PCR技術的掌握,對基因工程的第二步,基因表達載體的構建的過程的分析,雙酶切法的應用,限制酶的作用和切割特點,是解決本題的關鍵。一、單選題1.(2024·山東德州·二模)DNA分子的堿基具有吸收260nm波長光的特性。當DNA兩條鏈堿基緊密連接時,吸光度偏低;兩條鏈分離時,吸光度升高,因此DNA變性可通過DNA溶液對260nm波長光的吸光度來檢測。肺炎鏈球菌DNA的變性曲線如圖所示,吸光度達到最大值的50%時的溫度稱為熔解溫度(Tm)。下列說法正確的是()A.加熱會破壞脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵使DNA變性B.A、T堿基對所占比例越高的DNA,變性曲線中Tm值越高C.加熱至約70℃時DNA兩條鏈從一端向另一端逐漸分離D.利用PCR技術檢測目的基因時需要先將DNA變性【答案】D〖祥解〗DNA變性的本質原因是:DNA雙螺旋分子結構在某種因素的作用下,DNA分子互補堿基對之間的氫鍵斷裂,使.DNA分子雙螺旋結構疏散,雙鏈裂解變成單鏈,進行解鏈反應,解鏈后即稱為DNA變性?!驹斘觥緼、加熱是使DNA分子互補堿基對之間的氫鍵斷裂,使DNA分子雙螺旋結構疏散,雙鏈裂解變成單鏈,進行解鏈反應,使DNA變性,A錯誤;B、A、T堿基對有兩個氫鍵,C、G堿基對有三個氫鍵,A、T堿基對所占比例越高的DNA變性時需要的溫度越低,即變性曲線中Tm值越低,B錯誤;C、加熱至約70℃時DNA兩條鏈同時分離,C錯誤;D、利用PCR技術檢測目的基因時,需要先將DNA變性,使DNA雙鏈打開,D正確。故選D。2.(2024·山東威海·二模)ω-3多不飽和脂肪酸(LCPUFA)有預防心血管疾病的作用,但大多數(shù)動物體內不能合成。科研人員利用轉染技術(將外源DNA轉入受體細胞的技術)將LCPUFA—合成酶基因(fat-1基因,含1229bp)導入小鼠受精卵,培育出轉基因小鼠,基本流程如下圖甲所示。圖乙表示提取不同實驗組別小鼠受精卵DNA后,利用fat-1基因的引物進行PCR擴增后電泳的結果。下列說法錯誤的是(
)A.采用農桿菌轉化法可確保圖甲中轉染的效果B.PCR擴增3輪后,只含一種引物的DNA分子的比例為1/4C.由圖乙可知,只有2組轉染成功D.若fat-l基因單點插入,則轉基因小鼠相互交配產(chǎn)生的大多數(shù)后代體內能合成LCPUFA【答案】A〖祥解〗1、PCR擴增:目的基因DNA受熱變性后解為單鏈,引物與單鏈相應互補序列結合;然后以單鏈DNA為模板,在DNA聚合酶作用下進行延伸,如此循環(huán)多次。2、選擇合適的限制酶對目的基因和質粒進行切割的原則:①不能破壞目的基因;②不能破壞所有的抗性基因;③最好選擇兩種限制酶分別切割質粒和目的基因,防止目的基因和質粒反向連接,同時要防止目的基因自身環(huán)化和質粒的自身環(huán)化?!驹斘觥緼、農桿菌轉化法適用于植物細胞,對于動物細胞受精卵而言應采用顯微注射法導入目的基因,A錯誤;B、PCR擴增3輪后,共得到8個DNA分子,只有最原始的1個DNA分子的兩條鏈不含引物,導致含有這兩條鏈的2個DNA分子只含有其中一種引物,其余6個DNA分子均含有2種引物,故PCR擴增3輪后,只含一種引物的DNA分子的比例為1/4,B正確;C、據(jù)圖分析,M2組和1組沒有擴增出DNA片段,故細胞內不存在目的基因,即可能是細胞內導入PEB質?;蛘呶闯晒D染,而M2組是PEB質粒轉染細胞PCR產(chǎn)物,故1組是未轉染細胞PCR產(chǎn)物,2組出現(xiàn)一條DNA條帶,即為目的基因條帶,則1組是未成功轉染細胞PCR產(chǎn)物;2組是成功轉染細胞PCR產(chǎn)物,C正確;D、若fat-l基因單點插入,相應的基因型表示為FO,則轉基因小鼠相互交配后代基因型為1FF、2FO、1OO,即產(chǎn)生的大多數(shù)后代體內能合成LCPUFA,D正確。故選A。3.(2024·山東·二模)由于PCR擴增出的目的基因末端為平末端,且無合適的限制酶識別序列,需借助中間載體P將目的基因接入載體E。下圖為兩種載體的結構和相關限制酶的識別序列,下列敘述正確的是(
)
A.構建重組載體P時,應選擇EcoRV進行酶切,再用T4DNA連接酶連接B.為了便于該目的基因接入載體E,可用限制酶EcoRV或SmaI切割載體PC.載體P不能作為基因表達載體,是因為它不含起始密碼子和終止密碼子D.若受體細胞表現(xiàn)出抗性基因的相應性狀,表明重組載體成功導入受體細胞【答案】A〖祥解〗基因工程技術的基本步驟:(1)目的基因的獲?。嚎衫肞CR技術擴增和人工合成。(2)基因表達載體的構建:是基因工程的核心步驟,基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。(3)將目的基因導入受體細胞:根據(jù)受體細胞不同,導入的方法也不一樣.將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、花粉管通道法;將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法;將目的基因導入微生物細胞的方法是鈣離子處理法。(4)目的基因的檢測與鑒定:分子水平上的檢測;①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因;②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA;③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質:抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定:抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。【詳析】AB、由于載體E只有產(chǎn)生黏性末端的酶切位點,要使中間載體P接入載體E,同時防止載體E自身環(huán)化,需要用兩種限制酶分別切割載體E和中間載體P,據(jù)圖可知,中間載體P和載體E均含有XhoI和PstI酶識別序列,故可選用XhoI和PstI酶進行酶切,載體P的這兩種酶識別序列中含有EcoRV識別位點,并且其切割的為平末端,可以用于連接目的基因,SmaI酶雖然也能切割得到平末端,但是其識別位點沒有位于XhoI和PstI酶識別位點之間,故不能選擇其對中間載體P進行切割,連接平末端只能用T4DNA連接酶,A正確,B錯誤;C、由圖可知,不直接選擇P構建表達載體是因為它不含啟動子與終止子,C錯誤;D、受體細胞表現(xiàn)出抗性基因的相應性狀,可能是導入了重組質粒,也可能只導入了空質粒(不含目的基因的質粒),D錯誤。故選A。4.(2024·山東·模擬預測)研究人員用酶和酶兩種限制酶同時處理某DNA分子和質粒,得到的DNA片段如圖所示。圖中DNA片段只注明了黏性末端處的堿基種類,其他堿基的種類未注明。下列敘述錯誤的是(
)A.該DNA分子和質粒上均含有酶的一個切割位點和酶的一個切割位點B.根據(jù)圖示信息不能確定圖中形成的不同黏性末端與這兩種限制酶的對應關系C.用T4DNA連接酶或E.coliDNA連接酶均可以將片段乙和片段丁連接起來D.片段乙、片段丁、片段戊可依次連接形成一個環(huán)狀DNA分子【答案】D〖祥解〗1、分析圖形:圖中所示的是酶M和酶N兩種限制酶切割含有目的基因的DNA片段和質粒的結果。2、限制性核酸內切酶(限制酶)(1)來源:主要是從原核生物中分離純化出來的;(2)功能:能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列,并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開,因此具有專一性;(3)結果:經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式:黏性末端和平末端?!驹斘觥緼、該DNA分子經(jīng)酶M和酶N兩種限制酶切割后,產(chǎn)生了三個DNA片段且兩個切口形成的黏性末端不同,說明該DNA分子含有酶M的一個切割位點和酶N的一個切割位點;質粒為環(huán)狀DNA,其經(jīng)酶M和酶N兩種限制酶切割后,產(chǎn)生了兩個DNA片段,觀察兩個切口形成的黏性末端,可推出質粒含有酶M的一個切割位點和酶N的一個切割位點,A正確;B、根據(jù)圖中黏性末端可知,酶M和酶N識別的序列可能是或,但無法確定其對應關系,B正確;C、圖中經(jīng)酶切后形成的片段均是黏性末端,T4DNA連接酶既可以“縫合”雙鏈DNA片段互補的黏性末端,也可以“縫合”雙鏈DNA片段的平末端,而E.coliDNA連接酶只能將具有互補黏性末端的DNA片段連接起來,片段乙和片段丁黏性末端互補,C正確;D、根據(jù)圖中黏性末端可知,片段乙、片段丁、片段戊三個片段不能連接成環(huán)狀DNA分子,D錯誤。故選D。5.(2024·山東淄博·二模)dNTP(包括dATP、dTTP、dGTP、dCTP)的結構與ATP類似,除堿基不同外,dNTP含有脫氧核糖。與dNTP相比,ddNTP的五碳糖為雙脫氧核糖,其3'碳位為-H且不能與磷酸形成化學鍵。現(xiàn)有甲~丁四個PCR反應體系,甲體系中含有放射性磷標記的ddATP(記作ddATP+)和DNA模板鏈。PCR完成后,經(jīng)電泳(分子量小的DNA在電場中移動快)將甲體系中一組長度不等的DNA單鏈分離。丙、乙、丁三個PCR體系與甲相似,分別用于檢測T、C、G的堿基序列,檢測結果如圖。下列說法正確的是(
)A.ddATP+中的放射性磷酸基團應位于ddATP的末端B.甲體系中除含ddATP+外,還應含有dTTP、dGTP、dCTPC.新?lián)饺朊撗鹾塑账嵬ㄟ^磷酸二酯鍵連接在子鏈的5'端D.模板DNA的堿基序列為3'CTGGACTGACAT5'【答案】D〖祥解〗DNA分子復制的場所、過程和時間:(1)DNA分子復制的場所:細胞核、線粒體和葉綠體;(2)DNA分子復制的過程:①解旋:在解旋酶的作用下,把兩條螺旋的雙鏈解開;②合成子鏈:以解開的每一條母鏈為模板,以游離的四種脫氧核苷酸為原料,遵循堿基互補配對原則,在有關酶的作用下,各自合成與母鏈互補的子鏈;③形成子代DNA:每條子鏈與其對應的母鏈盤旋成雙螺旋結構,從而形成2個與親代DNA完全相同的子代DNA分子;(3)DNA分子復制的時間:有絲分裂的間期和減數(shù)第一次分裂前的間期?!驹斘觥緼、由于ddNTP的五碳糖為雙脫氧核糖,其3'碳位為-H且不能與磷酸形成化學鍵,因此ddATP+中的放射性磷酸基團不應位于ddATP的末端,A錯誤;B、甲體系中除含ddATP+外,還應含有dATP、dTTP、dGTP、dCTP,B錯誤;C、PCR擴增時,由5'端向3'端延伸,則新?lián)饺朊撗鹾塑账嵬ㄟ^磷酸二酯鍵連接在子鏈的3'端,C錯誤;D、當ddNTP結合時,DNA合成終止,因此DNA合成鏈可能隨機停止在任何堿基處,根據(jù)四種堿基的條帶位置反向推出DNA序列。PCR擴增時,由5'端向3'端延伸,則根據(jù)電泳圖及分子量小的DNA在電場中移動快可知,該DNA片段的待測堿基序列為5'GACCTGACTGTA3',因此模板DNA的堿基序列為3'CTGGACTGACAT5',D正確。故選D。6.(2024·山東濟寧·三模)變性梯度凝膠電泳(DGGE)是根據(jù)DNA在不同濃度的變性劑中解鏈程度的不同,導致電泳遷移率發(fā)生變化,從而將片段大小相同而堿基組成不同的DNA片段分開。當DNA片段泳動到某一濃度的變性劑位置時,DNA發(fā)生解旋變性,導致電泳遷移率下降,最終會停留在某一位置。下列說法正確的是(
)A.提高電泳的溫度有利于提高分離效率B.DGGE技術可用于基因突變檢測及相關研究C.DNA中的A、T堿基含量越高越不容易發(fā)生變性D.電泳時需將待測DNA與電泳緩沖液混合后注入加樣孔內【答案】B〖祥解〗電泳是指帶電粒子在電場的作用下發(fā)生遷移的過程。許多重要的生物大分子,如多肽、核酸等都具有可解離的基團,在一定的pH下,這些基團會帶上正電或負電。在電場的作用下,這些帶電分子會向著與其所帶電荷相反的電極移動。電泳利用了待分離樣品中各種分子帶電性質的差異以及分子本身的大小、形狀的不同,使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度,從而實現(xiàn)樣品中各種分子的分離?!驹斘觥緼、DNA分子變性是由變性劑引起的,不是加熱的結果,提高電泳的溫度對提高分離效率無影響,A錯誤;B、據(jù)題意“DGGE是根據(jù)DNA在不同濃度的變性劑中解鏈行為的不同而導致電泳遷移率發(fā)生變化,從而將片段大小相同而堿基組成不同的DNA片段分開”,據(jù)此推測,DGGE技術可用于基因突變檢測及相關研究,B正確;C、DNA中A和T之間有兩個氫鍵,G和C之間有三個氫鍵,因此,DNA中的A、T堿基含量越高越容易發(fā)生變性,C錯誤;D、電泳時需將待測DNA與凝膠載樣緩沖液混合,內含指示劑,再用微量移液器將混合液緩慢注入凝膠加樣孔內,D錯誤。故選B。7.(2024·山東·模擬預測)天然β-淀粉酶大多耐熱性差,不利于工業(yè)化應用。某天然β-淀粉酶由484個氨基酸構成,研究發(fā)現(xiàn),將該酶第476位天冬氨酸替換為天冬酰胺,耐熱性明顯提升。我國學者借助PCR改造β-淀粉酶基因(如圖,①~④表示引物片段),并將改造的基因與pLN23質粒重組后導入大腸桿菌,最終獲得耐高溫的β-淀粉酶。下列相關敘述正確的是(
)
A.PCR中使用的聚合酶屬于以RNA為模板的DNA聚合酶B.由圖可知,β-淀粉酶基因改造方案中需用到引物①和④C.改造后的基因應該插入pLN23質粒的起始密碼子的下游D.利用PCR在分子水平上確定目的基因是否轉錄需用到逆轉錄酶【答案】D〖祥解〗基因工程的操作流程:目的基因的篩選與獲取、構建基因表達載體、將目的基因導入受體細胞、目的基因的檢測與鑒定。【詳析】A、PCR的原理是DNA雙鏈復制,利用的酶是耐高溫的DNA聚合酶,合成子鏈時是以DNA為模板,A錯誤;B、根據(jù)β-淀粉酶的編碼序列,替換的堿基在編碼序列中,則利用的引物應該把編碼序列全部擴增在內,則所用的引物是②③,B錯誤;C、改造后的基因應該插入pLN23質粒的啟動子的下游,C錯誤;D、轉錄是以DNA為模板合成RNA的過程,通過PCR在分子水平上確定目的基因是否轉錄,則需要以RNA為模板逆轉錄出DNA作為PCR反應的模板,該過程需要用到逆轉錄酶,D正確。故選D。8.(2024·山東濰坊·二模)從大腸桿菌中提取某條mRNA逆轉錄形成一條cDNA單鏈并測序,測得該序列為5'-?CGTAGC,?-3'?,F(xiàn)將該序列形成雙鏈,構建表達載體并導入細胞中表達形成肽鏈。反密碼子與對應的氨基酸關系如下表所示。下列說法錯誤的是(
)反密碼子(方向為3'到5')CGACGUUGCACGAGCGCU氨基酸丙氨酸丙氨酸蘇氨酸半胱氨酸絲氨酸精氨酸A.5'-GCU-3'和5'-GCA-3'是編碼丙氨酸的密碼子B.編碼該mRNA的DNA序列的模板鏈與該cDNA單鏈序列相同C.構建表達載體時該cDNA單鏈的3'端與啟動子相連D.該細胞表達的多肽序列為“?-丙氨酸-半胱氨酸-?”【答案】D〖祥解〗轉錄是在細胞核內,以DNA一條鏈為模板,按照堿基互補配對原則,合成RNA的過程。翻譯是在核糖體中以mRNA為模板,按照堿基互補配對原則,以tRNA為轉運工具、以細胞質里游離的氨基酸為原料合成蛋白質的過程?!驹斘觥緼、由表格可知,丙氨酸的反密碼子是3'-CGA-5',3'-CGU-5',編碼丙氨酸的密碼子5'-GCU-3'和5'-GCA-3',A正確;B、cDNA單鏈是mRNA逆轉錄形成的,編碼該mRNA的DNA序列的模板鏈與該cDNA單鏈序列都和mRNA的序列互補,因此它們的序列相同,B正確;C、啟動子的作用是啟動轉錄,子鏈的延伸方向5'到3',因此cDNA單鏈的3'端與啟動子相連,C正確;D、cDNA單鏈并測序,測得該序列為5'-?CGTAGC,?-3',則mRNA的序列為3'-?GCAUCG?-5',反密碼子的序列5'-?CGUAGC,?-3',對照表格可知,細胞表達的多肽序列不是“?-丙氨酸-半胱氨酸-?”,D錯誤。故選D。9.(2024·山東濟南·三模)臨床上可采用PCR和DNA反向點雜交相結合的檢測技術對HPV基因進行分型,過程如下:設計出針對已知有致癌風險的23種HPV基因的特異性引物并標記上會發(fā)生顯色反應的生物素,通過PCR對待測樣本DNA進行擴增,再將擴增產(chǎn)物直接與固定在膜上的分型基因探針(包括17種高危型和6種低危型)進行雜交。經(jīng)顯色處理后,與固定化探針結合的HPV基因就會在相應位置產(chǎn)生顯色反應,從而判斷待測樣本是否被含有這些HPV基因的病毒感染。有關說法錯誤的是()A.生物素應標記在引物的5’端B.該檢測技術需要對擴增的DNA樣本進行瓊脂糖凝膠電泳C.該檢測技術具有高度的特異性,能夠準確地區(qū)分不同類型的HPV病毒D.反向點雜交是通過分型基因探針與擴增的目的片段堿基互補配對結合在一起的【答案】B〖祥解〗PCR原理:在高溫作用下,打開DNA雙鏈,每條DNA單鏈作為母鏈,以4種游離脫氧核苷酸為原料,合成子鏈,在引物作用下,DNA聚合酶從引物3'端開始延伸DNA鏈,即DNA的合成方向是從子鏈的5'端自3'端延伸的。實際上就是在體外模擬細胞內DNA的復制過程。DNA的復制需要引物,其主要原因是DNA聚合酶只能從3′端延伸DNA鏈?!驹斘觥緼、引物作用是使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸,生物素應標記在引物的5’端,A正確;B、該檢測技術需要對擴增產(chǎn)物直接與固定在膜上的分型基因探針進行雜交,不需要進行瓊脂糖凝膠電泳,B錯誤;C、該檢測技術利用擴增產(chǎn)物和基因探針特異性結合,能夠準確地區(qū)分不同類型的HPV病毒,具有高度特異性,C正確;D、分型基因探針與擴增的目的片段結合的原理是堿基互補配對原則,D正確。故選B。10.(2024·山東濱州·二模)染色體DNA復制時需要一小段RNA作為引物,這是因為DNA聚合酶只能從引物的3'端連接脫氧核苷酸。復制時兩條子鏈的延伸方向相反,其中一條子鏈稱為前導鏈,該鏈連續(xù)延伸,另一條稱為后隨鏈,該鏈逐段延伸,這些片段稱為岡崎片段,如圖1所示。圖2表示圖1中一段RNA引物去除并修復的過程。下列說法錯誤的是()A.酶1可以切除RNA片段,但不能切除與脫氧核苷酸連接的核糖核苷酸B.染色體DNA復制需要RNA聚合酶、DNA連接酶的參與C.每個岡崎片段的形成和其引物去除并修復的過程需兩次DNA聚合酶的催化D.染色體DNA復制結束并切除所有引物后形成的兩個子代DNA分子堿基序列完全相同【答案】D〖祥解〗據(jù)圖可知,DNA半保留復制過程是分別以解旋后的兩條鏈為模板,以細胞中游離的4種脫氧核苷酸為原料,按照堿基互補配對原則,各自合成與母鏈互補的一條子鏈,子鏈的延伸方向是從5′→3′,分為前導鏈和后隨鏈,前導鏈的合成是連續(xù)的,后隨鏈的合成是不連續(xù)的,據(jù)此分析?!驹斘觥緼、由圖2可知,酶1可以切除相應的RNA引物片段,由于酶具有專一性,因此酶1不能切除與脫氧核苷酸連接的核糖核苷酸,A正確;B、由題意可知,染色體復制時需要合成一小段RNA作為引物,因此需要RNA聚合酶的參與,后隨鏈合成時會先形成多個DNA單鏈的片段(岡崎片段),之后需要DNA連接酶相連接,B正確;C、在引物RNA合成基礎上,進行DNA鏈的5′~3′方向合成,在DNA聚合酶的作用下前導鏈連續(xù)地合成出一條長鏈,后隨鏈合成出岡崎片段,去除RNA引物后,片段間形成了空隙,DNA聚合酶作用使各個片段靠近,在連接酶作用下,各片段連接成為一條長鏈,即每個岡崎片段的形成和其引物去除并修復的過程需兩次DNA聚合酶的催化,C正確;D、染色體DNA復制結束并切除所有引物后形成的兩個子代DNA分子可能因基因突變堿基序列不完全相同,D錯誤。故選D。11.(2024·山東泰安·二模)稻米胚乳直鏈淀粉含量高會導致食用品質差。研究發(fā)現(xiàn),水稻蠟質基因(Wx)編碼直鏈淀粉合成酶。若Wx基因中第226位堿基是正常的G,該位點所在內含子能被正常剪接,胚乳中直鏈淀粉含量最高,基因型記做GG;若該位點突變成T,則不能被正常剪接,胚乳中直鏈淀粉合成水平會降低,基因型記做TT。為檢測Wx基因該位點堿基是G或T,研究人員以待測水稻葉片總DNA為材料,以Wx基因片段設計引物如圖所示,對PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)AccⅠ酶切后電泳。已知引物1為5'-GCTTCACTTCTCTGCTTGTG-3',兩引物之間無另外的AccⅠ酶的識別位點。下列說法正確的是(
)A.該實驗中需設計的引物2為5'-TTCAACTCTCGTTAAATCAT-3'B.若酶切產(chǎn)物只能觀察到450bp的DNA條帶,則表明該水稻品種為TT型C.GT雜合型水稻品種酶切電泳結果為3條條帶D.組成上述兩種淀粉合成酶的氨基酸種類不同,數(shù)目相同【答案】C〖祥解〗用PCR擴增DNA片段的過程中,脫氧核苷酸只能加在引物3'端,子鏈延長方向是5'→3',故引物的堿基序列應與每條模板鏈5'端的一段核苷酸鏈的堿基序列相同,即應以模板鏈5'端的一段脫氫核苷酸單鏈片段作引物?!驹斘觥緼、分析題圖可知,引物的延伸方向為5'→3',故圖示所給引物1設計區(qū)堿基序列所在的DNA鏈為非模板鏈,故引物1的堿基序列與非模板鏈的堿基序列相同,而引物2要以引物2設計區(qū)堿基序列所在的DNA鏈為模板,故引物2的堿基序列應與所給序列堿基互補配對,該實驗中需設計的引物2為5'-ATGATTTAACGAGAGTTGAA-3',A錯誤;B、PCR產(chǎn)物從71bp開始,到530bp為止,共460bp。若被切為大概150bp、300bp的兩段,說明PCR產(chǎn)物可被酶切,則基因型應為GG,若PCR產(chǎn)物不被酶切,電泳后只有一條450bp左右的條帶,則基因型為TT,B錯誤;C、若Wx基因中第226位堿基是正常的G,該位點所在的內含子能被正常剪接,胚乳中直鏈淀粉含最高,基因型記做GG;若該位點突變成T,則不能被正常剪接,胚乳中直鏈淀粉的合成水平會降低,基因型記做TT,故GT雜合型水稻品種的G能被酶切成兩段,而T不能被酶切,故酶切電泳結果為3條條帶,C正確;D、組成上述兩種淀粉合成酶的氨基酸的數(shù)目不同,D錯誤。故選C。12.(2024·山東·二模)可利用基因芯片技術檢測棉花基因在胚珠和纖維組織中的表達情況,基因芯片的制作和檢測流程如下;將棉花基因組中的各基因分別進行PCR擴增→再將各基因擴增產(chǎn)物按一定順序點在玻璃板上的相應位置,變性、固定→分別從棉花胚珠和纖維中分離總mRNA,反轉錄生成cDNA→將兩種cDNA分別用綠色和紅色熒光染料標記→將標記后的cDNA與基因芯片雜交→進行熒光檢測(若綠色和紅色疊加則呈現(xiàn)黃色)。下列說法錯誤的是(
)A.逆轉錄過程與芯片雜交過程的堿基互補配對方式相同B.若芯片上某基因處的紅色熒光較強,說明該基因在棉花纖維組織中表達水平較高C.若芯片上某基因處顯示黃色,可能是由于該基因在兩種組織中均表達D.若某基因處只出現(xiàn)紅色或綠色,該基因可能是組織特異性表達的基因【答案】A〖祥解〗逆轉錄是指以RNA為模板合成DNA的過程,需要逆轉錄酶,以四種游離的脫氧核苷酸為原料,消耗能量?!驹斘觥緼、逆轉錄過程與芯片雜交過程的堿基互補配對方式不相同,前者存在A—T、U—A、G—C、C—G,后者存在A—T、T—A、G—C、C—G,A錯誤;B、分別從棉花胚珠和纖維中分離總mRNA,反轉錄生成cDNA,將兩種cDNA分別用綠色和紅色熒光染料標記,故若芯片上某基因處的紅色熒光較強,說明該基因在棉花纖維組織中表達水平較高,B正確;C、結合題干,若綠色和紅色疊加則呈現(xiàn)黃色,故若芯片上某基因處顯示黃色,可能是由于該基因在兩種組織中均表達,C正確;D、依據(jù)題意,若某基因處只出現(xiàn)紅色或綠色,說明該基因發(fā)生了選擇性表達,產(chǎn)生了相應的mRNA,D正確。故選A。13.(2024·山東日照·二模)反向PCR是利用已知序列設計引物對未知序列進行擴增的技術,其過程如下圖。下列敘述錯誤的是(
)A.過程①可用同種限制酶切割磷酸和脫氧核糖之間的磷酸二酯鍵B.過程②需用DNA連接酶將酶切片段環(huán)化以實現(xiàn)對未知序列的擴增C.過程③需添加方向相對的引物1和3以便DNA聚合酶從其3′端延伸子鏈D.過程③中將溫度調至72℃的目的是使引物與模板鏈通過堿基互補配對結合【答案】D〖祥解〗1、PCR只能擴增兩端序列已知的基因片段,反向PCR可擴增一段已知序列的兩端未知序列。反向PCR的目的在于擴增一段已知序列旁側的DNA,也就是說這一反應體系不是在一對引物之間而是在引物外側合成DNA。2、如圖所示,DNA分子被限制酶切割,然后環(huán)化并加入已知序列合成的引物,再通過PCR擴增得到中間是未知序列兩側是已知序列的DNA分子?!驹斘觥緼、由圖可知,過程①即酶切后,已知序列能環(huán)化,說明兩端的黏性末端相同,故過程①是用同一種限制酶對未知序列兩端進行切割,A正確;B、過程②即環(huán)化,將DNA片段連接起來,該過程中使用DNA連接酶催化相鄰核苷酸之間形成磷酸二酯鍵,B正確;C、過程③為擴增,需添加方向相對的引物1和3以便DNA聚合酶從其3′端延伸子鏈,C正確;D、過程③中將溫度調至72℃的目的是耐高溫的DNA聚合酶,將四種脫氧核苷酸根據(jù)堿基互補配對原則合成新的DNA鏈,D錯誤。故選D。14.(2024·山東濟寧·二模)關于“DNA粗提取和鑒定”以及“DNA片段的擴增及電泳鑒定”實驗,下列說法錯誤的是()A.將洋蔥研磨液離心是為了加速雜質的沉淀B.根據(jù)DNA在不同濃度NaCl溶液中的溶解度不同,可去除部分雜質C.DNA分子在電場作用下可以帶上正電荷或負電荷D.PCR實驗中使用的微量離心管和槍頭在使用前需進行高壓滅菌處理【答案】C〖祥解〗電泳法:利用分離樣品中各種分子帶電性質的差異以及分子本身的大小、形狀不同,使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速率,從而實現(xiàn)樣品中各種分子的分離。原理:在一定的pH下,多肽、核酸等生物大分子的可解離基團會帶上正電或負電,在電場的作用下,這些帶電分子會向著與其所帶電荷相反的電極移動?!驹斘觥緼、將洋蔥研磨液離心是為了加速雜質的沉淀,A正確;B、根據(jù)DNA在不同濃度NaCl溶液中的溶解度不同,可去除部分雜質,B正確;C、DNA分子具有可解離的基團,在一定的pH下,這些基團可以帶上正電荷或負電荷。在電場的作用下,這些帶點分子會向著與它所帶電荷相反的電極移動,C錯誤;D、PCR實驗中使用的微量離心管、槍頭、蒸餾水在使用前都必須進行高壓蒸汽滅菌處理,D正確。故選C。15.(2024·山東棗莊·二模)DNA的雙鏈中,轉錄時作為模板功能的鏈叫作反義鏈,另一條叫作有義鏈。下圖是DNA分子中某些基因有義鏈和反義鏈示意圖。下列說法錯誤的是()A.根據(jù)啟動子和終止子的相對位置可以判斷哪條鏈作為反義鏈B.不同的基因可能同時復制,也可能同時轉錄C.DNA分子的一條鏈對不同基因來說,有的是有義鏈,有的是反義鏈D.基因的轉錄和翻譯都是沿著模板的3'端到5'端進行的【答案】D〖祥解〗RNA是在細胞核中,以DNA的一條鏈為模板合成的,這一過程稱為轉錄。翻譯指游離在細胞質內的各種氨基酸,以mRNA為模板合成具有一定氨基酸順序的蛋白質的過程。【詳析】A、啟動子的作用是RNA聚合酶識別和結合的位點,驅動基因轉錄,因此根據(jù)啟動子和終止子的相對位置可以判斷哪條鏈作為反義鏈,A正確;B、不同的基因位置不同可能同時復制,也可能同時轉錄,B正確;C、由圖可知,不同基因的有義鏈和反義鏈不同,因此DNA分子的一條鏈對不同基因來說,有的是有義鏈,有的是反義鏈,C正確;D、基因的轉錄是沿著模板的3'端到5'端進行的,翻譯是沿著模板的5'端到3'端進行的,D錯誤。故選D。二、多選題16.(2024·山東青島·三模)科學家將某病毒抗原蛋白的部分編碼序列(RBD)拼接成融合基因2RBD和3RBD,探究RBD的二聚體蛋白和三聚體蛋白能否模擬RBD的天然構象并獲得高效免疫原性。為鑒定重組質粒是否構建成功,將重組質粒用NcoI和SacI雙酶切處理后電泳,結果如圖,其中泳道1為雙酶切pNZ8149-2RBD,兩個條帶大小分別為2507bp和2020bp。將構建好的重組質粒分別導入工程菌中進行表達產(chǎn)物的檢測。下列說法正確的是(
)A.PCR擴增融合基因時,在引物的3'端添加相應限制酶的識別序列B.據(jù)圖可知,融合基因3RBD的長度為2686bpC.泳道2呈現(xiàn)一個條帶的原因是酶切pNZ8149-3RBD后產(chǎn)生的兩個片段大小相近D.從工程菌細胞表面提取蛋白質進行檢測,從而進一步比較兩者的免疫原性【答案】BCD〖祥解〗基因工程技術的基本步驟:(1)目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術擴增和人工合成;(2)基因表達載體的構建:是基因工程的核心步驟,基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等;(3)將目的基因導入受體細胞:根據(jù)受體細胞不同,導入的方法也不一樣;(4)目的基因的檢測與鑒定?!驹斘觥緼、引物使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸,PCR擴增融合基因時,在引物的5'端添加相應限制酶的識別序列,A錯誤;B、由圖可知pNZ8149-2RBD和pNZ8149-3RBD的堿基對分別為4527bp和5193bp,所以RBD長度為5193-4527=666bp,泳道1為雙酶切pNZ8149-2RBD,兩個條帶大小分別為2507bp和2020bp,所以融合基因3RBD的長度為666+2020=2686bp,B正確;C、由圖可知,泳道2呈現(xiàn)一個條帶,其原因是雙酶切pNZ8149-3RBD后產(chǎn)生的兩個片段大小相近,C正確;D、“該實驗的目的是“探究RBD的二聚體蛋白和三聚體蛋白能否模擬RBD的天然構象并獲得高效免疫原性”,可以從工程菌細胞表面提取蛋白質進行檢測,從而進一步比較兩者的免疫原性,D正確。故選BCD。17.(2024·山東臨沂·二模)丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)引起的一種傳染病。為研制針對HCV的多肽疫苗,某研究小組構建LTB-R9-Bp融合基因的過程如圖,進而構建出融合基因表達載體,其中LTB是一種免疫增強劑基因,R9-Bp是HCV兩個相連的包膜蛋白基因。下列說法正確的是(
)A.PCR反應體系中需加入待擴增的模板、引物、原料以及耐高溫的DNA聚合酶B.若要大量擴增LTB-R9-Bp融合基因,可選擇引物P2和引物P3繼續(xù)進行PCRC.融合基因表達載體的組成元件有融合基因、標記基因、啟動子和終止密碼子等D.若利用轉基因植物生產(chǎn)該疫苗,需用到基因工程、植物組織培養(yǎng)和抗原抗體雜交技術【答案】AD〖祥解〗基因工程的操作步驟:(1)目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術擴增和人工合成;(2)基因表達載體的構建:是基因工程的核心步驟?;虮磉_載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等;(3)將目的基因導入受體細胞:根據(jù)受體細胞不同,導入的方法也不一樣,將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法;將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法;將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。(4)目的基因的檢測與鑒定:分子水平上的檢測:①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因-DNA分子雜交技術。②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA-分子雜交技術。③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質:抗原-抗體雜交技術,個體水平上的鑒定:抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。【詳析】A、PCR擴增時,需要再反應體系中加入待擴增的模板、引物、原料以及耐高溫的DNA聚合酶,A正確;B、通過PCR技術擴增LTB-R9-Bp融合基因,需要與融合基因兩端序列互補配對的引物,結合圖示分析,可選擇引物P1和引物P4繼續(xù)進行PCR,B錯誤;C、終止密碼子存在于mRNA上,不會存在于融合基因中,C錯誤;D、若利用轉基因植物生產(chǎn)該疫苗,則需要通過基因工程獲得含有目的基因的受體細胞,再通過植物組織培養(yǎng)獲得具備產(chǎn)生疫苗的植物,最終需要通過抗原抗體雜交技術進行目的基因成功表達的鑒定,D正確。故選AD。18.(2024·山東青島·二模)TaIBH1-2D是小麥中一個調控千粒重的關鍵基因。為驗證TaIBHI-2D的功能,研究人員構建了過表達株系,可利用酶切法檢驗TaIBH1-2D與載體是否連接,圖1三個泳道分別是用不同的限制酶完全酶切后(只考慮圖示酶切位點),產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳的結果;同時構建了敲除TaIBH1-2D基因的突變體。圖2統(tǒng)計了不同植株的千粒重。下列說法正確的是(
)A.電泳的緩沖液中含指示劑,可在紫外燈下被檢測出來B.泳道1為單酶切空載體,泳道2為單酶切的重組載體C.泳道3為雙酶切的重組載體,且目的基因與載體正確連接D.由圖2分析,TaIBH1-2D負調控小麥千粒重【答案】BD〖祥解〗基因工程技術的基本步驟:(1)目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術擴增和人工合成.(2)基因表達載體的構建:是基因工程的核心步驟,基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等.(3)將目的基因導入受體細胞:根據(jù)受體細胞不同,導入的方法也不一樣.將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法;將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法;將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法.(4)目的基因的檢測與鑒定:分子水平上的檢測:①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術;②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術;③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術.個體水平上的鑒定:抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。【詳析】A緩沖液中的指示劑指示電泳進程,核酸染料加在凝膠中,凝膠中的DNA分子通過染色,可以在波長為300nm的紫外燈下被檢測出來,A錯誤;B、泳道1的質粒長度小于泳道2,則泳道1為單酶切空載體,泳道2為單酶切的重組載體,B正確;C、泳道3有一個條帶的大小與泳道1相同,且還有兩個較小的條帶,則為限制酶A和限制酶B雙酶切的重組載體,但是無法判斷目的基因與載體是否正確連接,C錯誤;D、由圖2分析,含有TaIBH1-2D基因的植株千粒重小于野生植株和敲除突變體,則說明TaIBH1-2D負調控小麥千粒重,D正確。故選BD。19.(2024·山東泰安·模擬預測)為使玉米獲得抗除草劑性狀,科研人員進行了相關操作(如圖所示)。含有內含子的報告基因不能在原核生物中正確表達,其正確表達產(chǎn)物能催化無色物質K呈現(xiàn)藍色。轉化過程中愈傷組織表面常殘留農桿菌,會導致未轉化的愈傷組織可能在含除草劑的培養(yǎng)基中生長。下列敘述錯誤的是(
)
A.T-DNA可將基因G轉移并整合到愈傷組織細胞的染色體DNA上B.利用物質K和抗生素進行篩選1,可獲得農桿菌的藍色菌落C.利用物質K和除草劑進行篩選2,更易于獲得抗除草劑的轉基因植株D.提高培養(yǎng)基中細胞分裂素和生長素的比值,有利于誘導生根【答案】BD〖祥解〗農桿菌轉化法的具體過程:(1)利用土壤農桿菌的Ti質粒構建基因表達載體,即將目的基因整合到土壤農桿菌的Ti質粒上。(2)將整合了目的基因的Ti質粒導入土壤農桿菌細胞內。(3)利用土壤農桿菌感染植物細胞,該過程實際上是將含有目的基因的土壤農桿菌Ti質粒導入植物細胞內。(4)含有目的基因的土壤農桿菌Ti質粒進入植物細胞后,可以把自己的一段基因整合到細胞核中的染色體上,這段基因中包含了目的基因?!驹斘觥緼、農桿菌中的Ti質粒上的T-DNA可轉移至受體細胞,并且整合到受體細胞染色體的DNA上,根據(jù)農桿菌的這一特點,將目的基因(基因G)插入到Ti質粒的T-DNA上,通過農桿菌的轉化作用,就可以把目的基因(基因G)整合到愈傷組織細胞的染色體DNA上,A正確;B、農桿菌屬于原核生物,含有內含子的報告基因不能在原核生物中正確表達,故不會出現(xiàn)農桿菌的藍色菌落,B錯誤;C、根據(jù)題意可知,報告基因的產(chǎn)物能催化無色物質K呈現(xiàn)藍色,而愈傷組織表面殘留的農桿菌會導致未轉化的愈傷組織能在含除草劑的培養(yǎng)基中生長,因此利用物質K和除草劑進行篩選2,更易于獲得抗除草劑的轉基因植株,C正確;D、提高培養(yǎng)基中細胞分裂素和生長素的比值,有利于誘導生芽,D錯誤。故選BD。20.(2024·山東·模擬預測)科學家發(fā)現(xiàn)一種名為Tat-SIRT5-CTM的細胞穿透肽,其可以抑制小膠質細胞中炎癥細胞因子的表達,使神經(jīng)元免受損傷。研究者欲通過基因工程來生產(chǎn)Tat-SIRT5-CTM,如圖是采用PCR技術檢測目的基因插入染色體的位置的流程圖。下列說法正確的是()A.Tat-SIRT5-CTM可防止某些疾病
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