DB14∕T 1510-2017 玉米鐮孢穗腐病抗性鑒定牙簽接種技術規(guī)程

DB14山西省質量技術監(jiān)督局發(fā)布I 1 1 1 2 2 3 3 3 4 5 7本標準主要起草人：張作剛、王建明、李新鳳、高俊明、胡春艷、曹揮、王春偉、王1玉米鐮孢穗腐病抗性鑒定牙簽接種技術規(guī)程凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）2根據(jù)采用的技術標準判別植物寄主對特定病蟲害反應程度和抵抗水平的以常規(guī)組織分離法從發(fā)病玉米籽粒中分離穗腐病致病鐮孢菌。分離物經形態(tài)學鑒定確認為鐮孢菌(Fusariumsp.)后，進行分離4.2致病性測定態(tài)學方法，必要時結合現(xiàn)代分子生物學技術確定5.1菌種準備無菌條件下將病原鐮孢菌接種在直徑9cm培養(yǎng)皿中的PDA平板培養(yǎng)基上5.2麥粒準備將100g麥粒放300mL三角瓶中，清水浸泡12h~24h，中間沖洗1~2次，水沖洗2~3次，然后篦去三角瓶中的水，蓋上棉將清水洗煮過的牙簽放在鍋中，加清水浸過牙簽，然后每1000m塊和15g~20g葡萄糖制成營養(yǎng)液，一起煮20min~30min。將營養(yǎng)液中煮過的牙簽撈出，趁牙簽表面濕潤時隨即放入加有1%瓊脂粉的小麥面粉中，攪拌使牙簽表面均勻地沾滿面粉。每800~1000根牙簽需用小麥面粉30g~3將牙簽菌袋與準備的麥粒高壓蒸汽滅菌20min。5.5麥粒拌菌粒中，搖動三角瓶使菌種與麥粒混均，做成帶菌麥粒5.6菌袋接種分粘著到牙簽上以及麥粒均勻分散在牙簽之間的縫隙中。每800~1000根牙簽需用帶菌麥粒30g~50g。5.7培養(yǎng)保存玉米吐絲10～15d，即乳熟期接種。先用直徑3mm金屬錐子或鉆頭在雌穗中下部較粗的左為經花絲通道接種后的發(fā)病模擬，圖右為苞葉穿刺接種后的發(fā)病模擬.4135799抗性評價依據(jù)每份鑒定材料的平均病情級別確定其抗病級別，劃分標準見表2。當設置的感病對照（B73）發(fā)病平均級別≥5.6時，該批次鑒定視為有效。對重復鑒定結果，以記載的最高病情級別為最終5A.1.1.1無性態(tài)Nirenberg，OosporaverticillioidesSacc.A.1.1.2有性態(tài)A.1.2形態(tài)特征A.1.2.1無性態(tài)在PSA培養(yǎng)基上氣生菌絲絨狀至粉狀，白色、淡紫色，有時產生橙色分生孢子座；基物A.1.2.2有性態(tài)A.2禾谷鐮孢A.2.1.1無性態(tài)禾谷鐮孢，學名：FusariumgraminearumClade，異名：FusariumroA.2.1.2有性態(tài)玉蜀黍赤霉，學名：Gibberellazeae（Schwein.）Petch，異名：Botryosphaeriasaubinetii，Dichomerasaubinetii，Dothideazeae，Gibberasaubisaubinetii，Sphaeriasaubinetii，SphaeriazeA.2.2形態(tài)特征6A.2.2.1無性態(tài)A.2.2.2有性態(tài)子囊殼在禾本科植物基質上產生；子囊殼成堆，球形或卵形，表面粗糙，直徑140mm～250mm；子囊棒狀，大小為（60～85）mm×（8～刀狀，兩端鈍圓，3隔，大小為（19～24）mm7表B.1玉米籽粒上常見鐮孢菌種的特鐮孢菌屬Fusariumspp.AACTCCCAAACCCCTGTGAAC禾谷鐮孢復合種F.graminearumCladeACAGATGACAAGATTCAGGC串珠鐮孢F.verticillioidesAATTGGCCATTGGTATTATATAT禾谷鐮孢復合種的TEF-1α基因擴增引物信息：TEF-F(5'-ATGGGTAAGGARGACAAGAC-3')，TEF-R(5'-GGARGTACCAGTSATCATGTT-3')。正向引物TEF-F位于TEF-1α基因序