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備案號：41838-2014動物源性飼料中豬源性成分測定實時熒光PCR方法T動物源性飼料中豬源性成分測定實時熒光PCR方法25.3dNTP:dATP(deoxyadenosinetriphosphate,脫氧脫氧鳥苷三磷酸)、dCTP(deoxycytidinetriphosphate,脫氧胞苷三磷酸)、dTTP(deoxythymidtriphosphate,脫氧胸苷三磷酸)。5.18EDTA,0.5mol/L,pH8.0:稱(pH8.0)50mL,0.5調(diào)節(jié)溶液的pH值至8.0,用水定容至1L,分裝后高壓滅菌。1mol/LTris-HCI(pH8.0)50mL,0.5mol/LEDTA(pH8.0)20mL,用水定容至1L,分裝后高壓滅菌。5.23TE緩沖液(pH8.0)的0.5mol/LEDTA(pH8.0),用水定容到1L,分裝后高壓滅菌。36.1實時熒光PCR儀。6.2生物安全柜。和三氯甲烷+異戊醇(24+1)抽提三次，12000r/min離心10min;將上清液轉(zhuǎn)移至干凈的2mL離心管液(預先加熱至65℃有利于溶解DNA)中，-20℃保存?zhèn)溆谩ris飽和苯酚+三氯甲烷(1+1),輕緩顛倒混勻溶液；12000r/min離心10min,取上清液，加入與上清液等體積三氯甲烷+異戊醇(24+1),輕緩顛倒混勻，12000r/min離心2min至分層；將上清液轉(zhuǎn)移至于100μLTE緩沖液(預先加熱至65℃有利于溶解DNA)中，-20℃保存?zhèn)溆谩?7.3DNA濃度和純度的測定c——DNA濃度，單位為納克每微升(ng/uL);7.4實時熒光PCR檢驗10×PCR緩沖液dNTP溶液(10mmol/L)TaqDNA聚合酶(5U/μL)DNA模板(10ng/μL-50ng/μL)反應產(chǎn)物可在4℃保存。
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