DB22T 2929-2018 轉(zhuǎn)基因玉米種cry3類(lèi)基因定性檢測(cè) PCR法

備案號(hào)：62774-2019DB22DB22/T2929—2018轉(zhuǎn)基因玉米中cry3類(lèi)基因定性檢測(cè)PCR法Qualitativedetectionofcry3typegenesingeneticallymodifiedmaize—PCRmethod吉林省市場(chǎng)監(jiān)督管理廳發(fā)布I1轉(zhuǎn)基因玉米中cry3類(lèi)基因定性檢測(cè)PCR法警示——使用本標(biāo)準(zhǔn)的人員應(yīng)有正規(guī)實(shí)驗(yàn)室工作的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，本標(biāo)準(zhǔn)并未指出所有可能的安全問(wèn)本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了PCR方法定性檢測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米中cry3類(lèi)基因的原理、試驗(yàn)條件、試劑或材料、儀GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)NY/T672轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品檢測(cè)通DB22/T2527-2016轉(zhuǎn)基因玉米中cry1A基因定性檢測(cè)農(nóng)業(yè)部1485號(hào)公告-4-2010轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢農(nóng)業(yè)部1861號(hào)公告-3-2012轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成分檢測(cè)玉米內(nèi)標(biāo)農(nóng)業(yè)部2031號(hào)公告-19-2013轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品成zSSIIb基因zSSIIbgeneCry3類(lèi)基因cry3typegenes編碼蘇云金芽孢桿菌（Bacillusthuringiensis）Cry3類(lèi)殺蟲(chóng)晶體蛋白的一類(lèi)基因，在本標(biāo)準(zhǔn)中包括cry3A基因和cry3Bb基因。2加入70mL水中，緩慢滴加氫氧化鈉溶液（見(jiàn)6.4）直至E6.4）調(diào)pH至8.0，加水定容至100mL。在103.4kPa（121℃)條件下滅菌20min。烷溶解于800mL水中，用鹽酸調(diào)pH至8.0，加水定容至1000mL。在103.4kPa（121℃)條件6.7TE緩沖液（pH8.0分別胺四乙酸二鈉溶液（見(jiàn)6.5），加水定容至1000mL。在103.4kPa（121℃)條件下滅菌20min。6.850×TAE緩沖液：稱(chēng)取），zSSIIb-F：5’-CTCCCAATCCTTTGACATCTGC-3’zSSIIb-R：5’-TCGATTTCTCTCTTGGTGACAGG-3’Cry3-F：5’-CTTCCTGAACACCATCTGGCCC-3’Cry3-R：5’-GAACAGCTCGCGGATGCGG-3’39.2.2cry3類(lèi)基因PCR擴(kuò)增水—TaqDNA聚合酶—4注1：“—”表示體積不確定，如果PCR緩沖液中含有氯化鎂，則不加氯化鎂溶液，根據(jù)TaqD9.3PCR產(chǎn)物電泳檢測(cè)和凝膠成像品中檢測(cè)出cry3類(lèi)基因成分，表述為“樣品中檢測(cè)出cry3類(lèi)基因成12.1.2以非轉(zhuǎn)基因玉米基因組DNA作為陰性對(duì)照的模板；以轉(zhuǎn)cry3類(lèi)基因玉米質(zhì)量分?jǐn)?shù)5陽(yáng)性對(duì)照PCR中，玉米內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因和cry3類(lèi)小一致，而陰性對(duì)照中僅擴(kuò)增出玉米內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因片段，空白對(duì)照中沒(méi)有預(yù)期擴(kuò)增片段，表明PCR檢測(cè)6Cry3類(lèi)基因特異性序列A.1轉(zhuǎn)基因玉米MIR604中c1CTTCCTGAACACCATCTGGCCCAGCGAGGACCCCTGGAAGGC71GACCAGAAGATCGCCGACTACGCCAAGAACAAGGCACTGGCCGAGCTACAG141AGGACTATGTGAGCGCCCTGAGCAGCTGGCAGAAGAACCCCGCA.2轉(zhuǎn)基因玉米MON863和MON8801CTTCCTGAACACCATCTGGCCCTCCGACGCCGACCCCTGGAA71ATCGACAAGAAGATCGAGGAGTACGCCAAGTCCAAGGCCC