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DB14山西省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I 1 1 1 1 1 2 3 4本標準由山西省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并監(jiān)督實施。1豬流行性腹瀉病毒抗體ELISA檢測方法本標準規(guī)定了應(yīng)用間接酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清中豬流行性腹瀉病毒抗體方法的縮略語、實驗原OD：光密度值(opticaldenHRP：辣根過氧化物酶(horseradishperoxidas本標準采用間接酶聯(lián)免疫吸附法（間接ELISA），該方法利用抗原抗體反應(yīng)具有特特異性的豬流行性腹瀉病毒S蛋白包被固相載體酶標板，加入待檢血清后，如果樣品中含有豬流行性腹相應(yīng)的抗體量成正比，可借助OD450nm值的實驗操作在15℃~25℃下進行。未滅活的感染性材料的實驗活動，應(yīng)在Ⅱ級生物安全柜內(nèi)進行。4.2儀器5.2樣品準備2取動物全血，待血液充分凝固后，4000r/min離心10min，收集血清。也可等5.3包被用包被液將包被抗原稀釋至工作濃度1.5μg/mL，加至抗原包被板5.4封閉5.5待檢血清的稀釋5.6操作步驟5.6.1加樣5.6.2洗滌5.6.4洗滌每個反應(yīng)孔加入底物液100μL，置20℃~25℃下避光顯色10min。試驗成立的條件：陽性對照OD450nm值≥0.8，陰性對照OD若被檢樣品（S-N）/(P-N)≥0.2，該樣品判為豬流行性腹瀉病毒抗體陽性；若被檢樣品（S-N）/(P-N)<0.2該樣品判為豬流行性腹瀉病毒抗3S=樣品孔OD450nm值，N=陰性對照孔平均OD450操作區(qū)應(yīng)有專門的固體和液體廢棄物收集容器，廢4試劑配制方法A.1包被液加800mL蒸餾水充分溶解，定容至10A.2洗滌液氯化鈉（NaCl）十二水磷酸氫二鈉（Na2HPO4?12H2A.3底物液A.4終止液A.5樣品稀釋液A.6封閉液牛血清白蛋白（BSA）5A.7
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