人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)標準操作規(guī)程

醫(yī)院檢驗科免疫室人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒酶聯(lián)免疫法）標準操作規(guī)程文件編號：生效日期：年月日版本：第1版第頁，共頁1、檢驗申請單獨檢驗項目申請：人類免疫缺陷病毒抗體｛縮寫抗HIV（1+2）］測定。臨床醫(yī)生根據需要提出檢驗申請。標本采集與處理標本采集常規(guī)靜脈采血約2ml，不抗凝，置普通試管中，或采用含分離膠的真空采血管。也可采集血漿，用肝素、EDTA或枸櫞酸鹽抗凝。檢驗申請單和血標本試管標上統(tǒng)一且唯一的標識符。急診標本采集后，在檢驗申請單上填寫標本采集時間。標本采集后與檢驗申請單一起及時運送至檢驗科。專人負責標本的接收并記錄標本的狀態(tài)，對不合格標本予以拒收。下列標本為不合格標本標本量不足：少于0.3ml的全血標本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.1.5.2對檢測結果可能有干擾的標本，包括嚴重溶血、嚴重渾濁的標本。無法確認標本與申請單對應關系的。其他如標識涂改、標本試管破裂等。標本保存接收標本后在置1-2h后將標本離心分離出血清或血漿，避免溶血。離心必須達到3000rpm15min，離心后的血清中不能含有顆粒物和微量纖維蛋白。標本保存時間：室溫（15-25℃）下可穩(wěn)定48卜，普通冰箱中（2-8℃）穩(wěn)定7d，在-20℃最多可保存4周。避免反復凍融。不可使用熱滅活的標本。已完成測試的標本保持完整的識別號，置4-8℃冰箱內保存7d。標本采集的注意事項采血前使受檢者保持平靜、松弛，避免劇烈活動。 醫(yī)院檢驗科免疫室人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒酶聯(lián)免疫法）標準操作規(guī)程文件編號：生效日期：年月日版本：第1版第頁，共頁3．方法原理本實驗采用HIV特異性抗原gp160和gp36等包被微孔反應板，用gp36、gp41標記辣根過氧化物酶。當待測標本中存在HIV抗體時，該抗體和固化的抗原結合于反應板上，并進一步與酶結合物相結合，在TMB底物參與反應的情況下，產生顯色反應。4．試劑及其他用品試劑：人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒，由上?？迫A生物工程股份有限公司出品，試劑盒藥品批準文號：國藥準字S20010012（96人份）。未打開的試劑盒保存于2-8℃，不可凍存。開啟的包被反應板放入干燥劑密封后在2-8℃保存并盡快使用。未打開的試劑盒保存于2-8℃，不可凍存。微孔反應板打開包裝后，應立即將未試用的板條裝入有干燥劑的自封袋中密封，置2-8℃避光保存。未使用完的酶結合物、陽性對照、陰性對照、洗滌液、顯色劑A、顯色劑B和終止液，在沒有其他試劑污染的情況下，保存于原試劑瓶，并擰緊瓶蓋，置2-8℃中避光保存，可使用至標簽標識有效期。試劑盒組分微孔反應板 抗-HIV陰性對照抗-HIV-1陽性對照 抗-HIV-2陽性對照酶結合物 顯色劑A顯色劑B 終止液洗滌液（蒸餾水1：25稀釋）封片說明書其他試劑及用品加液器：型號。離心機： 型號。 醫(yī)院檢驗科免疫室人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒酶聯(lián)免疫法）標準操作規(guī)程文件編號：生效日期：年月日版本：第1版第頁，共頁溫箱（或水浴箱）：型號。洗板機：型號。酶標儀： 型號。5．室內質控與室內質控規(guī)則質控品：采用衛(wèi)生部臨床檢驗中心臨床免疫室免疫質控血清，濃度NCU/ml。質控品重建方法：采購來的質控品按每周用量分裝-20℃凍存，復融后充分顛倒混勻。質控品測定：在每一次（板）標本中測定質控血清。質控規(guī)則：繪制質控圖，求出SD和CV值。6．標本檢測步驟洗滌液配制：將濃縮洗滌液用蒸餾水（或去離子水）作1：25稀釋。加樣：每次實驗設抗-HIV-1陽性對照孔2孑（每孔100川）設抗-HIV-2陽性對照孔1孔（100Nl）抗-川丫陰性對照孔1孔（100nl）。建議預留空白對照1孔（不加樣本和酶結合物，只加底物和終止液）。剩余各孔加待測樣本100nl。用封片紙覆蓋反應板后，將反應板置37℃孵育60分鐘。洗板：手工洗板：棄去孔內液體，用洗滌液注滿各孔，靜置30-60秒，甩干，重復5次后，在干凈的吸水紙是上拍干。洗板機洗板：采用洗板機洗板，選擇洗滌5次程序，用配置的工作濃度洗滌液注滿每孔，每次工作濃度洗滌液在反應微孔中的停留時間為30-60秒，并確保每次吸凈無殘留，洗完后在干凈的吸水紙上拍干。 醫(yī)院檢驗科免疫室人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒酶聯(lián)免疫法）標準操作規(guī)程文件編號：生效日期：年月日版本：第1版第頁,共頁（4）在已加入待測樣本和陰、陽性對照的孔中加入1003酶結合物?；靹颍梅馄埜采w反應板，置37℃孵育30分鐘。（5）洗板：洗板步驟同步驟（3）（6）顯色：洗滌結束后立即在所有孔內加入顯色劑A、顯色劑B各503,混勻。用封片紙覆蓋反應板后，將反應板置37℃孵育30分鐘。終止：在所有孔內加入503終止液，振蕩反應板5秒鐘，使之充分混勻。比色：使用酶標儀，取波長450nm（建議使用雙波長酶標儀比色，參考波長630nm或630nm相近的波長），若需扣除顯色劑空白，則先用顯色劑空白對照孔校零，然后讀取各孔OD值。（加終止液后，務必在10分鐘內讀數(shù)）。7．結果判斷：Cutoff值計算：COV二抗-HIV-1陽性對照平均OD值*10%（若陽性對照OD值>2.5按2.5算）當S>COV時，說明該檢測樣本抗-HIV反應呈陽性。當S<COV時，說明該檢測樣本抗-HIV反應呈陰性。8．檢驗結果的報告及范圍結果的報告結果經審核后，確認準確無誤后發(fā)出報告。報告單上標明結果的參考區(qū)間、報告日期、時間、操作者和審核者簽名，并有與申請單相同的信息。如收到標本的質量可能對測定結果有影響的也在報告單上指出。臨界值：對于處于陽性判斷值邊緣即稍低于cutoff的樣本，難以判斷是 醫(yī)院檢驗科免疫室人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒酶聯(lián)免疫法）標準操作規(guī)程文件編號：生效日期：年月日版本：第1版第頁，共頁否為感染早期，或實際為非感染者的標本，此時，可以再次取血測定和（或）用另一種ELISA試劑盒檢測，從而明確測定結果。這種情況下，如果測定結果仍處于cutoff邊緣，則建議數(shù)月后再次測定，如仍無改變，則說明無HIV感染。9．操作性能從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒需平衡至室溫后方可使用，余者應按前述方法保存和使用。在平衡試劑的同時，待測樣本需平衡至室溫后再行測試。使用前試劑應搖勻。顯色過程必須封片。所有封片紙不能重復使用。結果判斷須在反應終止后10分鐘內完成。不同批號的試劑不可混用。洗板機洗板時應時常檢查加液頭，確保其暢通無堵塞；洗板時所用的吸水紙請勿反復使用。洗板機的管路用純化水沖洗，以防堵塞和腐蝕。樣本和酶結合物均應用微量移液器加注，并經常校對微量移液器準確性。HIV檢測結果的判定必須以酶標儀的讀數(shù)為準。本試劑的使用單位必須是當?shù)匦l(wèi)生行政部門批準的HIV初篩實驗室。本試劑盒應視為有傳染性物質，請按傳染病實驗室檢查規(guī)程處理。整個檢測工作必須符合HIV實驗室管理規(guī)范和生物安全守則規(guī)定，嚴格防止交叉感染。操作時必須戴手套，穿工作衣，嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度。10．參考范圍及醫(yī)學決定水平陰性結果：提示沒有檢測到人類免疫缺陷病毒抗體。11．臨床意義適用于獻血員及高危人群中人類免疫缺陷病毒抗體的篩查。12．結果審核以及分析與相關項目的聯(lián)系

醫(yī)院檢驗科免疫室人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒酶聯(lián)免疫法）標準操作規(guī)程文件編號：生效日期：年月日版本：第1版第頁，共頁12.1由資深專業(yè)人員負責檢驗結果的審核。審核者認真審核每一個測