HPLC有關(guān)物質(zhì)分析方法驗證

化學(xué)藥物有關(guān)物質(zhì)HPLC分析方法驗證1語言優(yōu)教資源PPT一、目的了解與規(guī)范有關(guān)物質(zhì)方法學(xué)驗證。2語言優(yōu)教資源PPT二、驗證內(nèi)容1、專屬性2、檢測限、定量限、3、線性范圍4、響應(yīng)因子5、精密度(重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性)6、準(zhǔn)確度7、耐用性3語言優(yōu)教資源PPT

指有其他成分（合成中間體雜質(zhì)、降解物、副產(chǎn)物等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測定出被測物的特性，能反映該方法在有共存物時對供試物準(zhǔn)確而專屬的測定能力，是指該法用于復(fù)雜樣品分析時是否受到相互干擾程度的度量。1、專屬性4語言優(yōu)教資源PPT1、專屬性

試驗方法空白溶劑系統(tǒng)適用性溶液5針中間體及樣品中間體與樣品混合溶液破壞性試驗（酸、堿、氧、高溫、光照等，用到不同溶劑的，溶劑也要進樣對照）系統(tǒng)適用性溶液1針圖譜打印：中間體與樣品混合溶液、破壞性試驗中主成分與主要雜質(zhì)要打印出光譜純度和分離度數(shù)據(jù)，如short+spectum格式打印。系統(tǒng)適用必至少有一針用extendperformance格式打印。必要時提供3D圖5語言優(yōu)教資源PPT1、專屬性峰純度結(jié)果峰名稱純度閾值結(jié)果峰名稱保留時間RT相對保留時間RRT評價：

1、各峰之間的分離狀況。

2、各峰的峰純度情況。報告數(shù)據(jù)：6語言優(yōu)教資源PPT(1)檢測限(LOD)檢測限系指試樣在確定的實驗條件下，被測物能被檢測出的最低濃度或含量。是限度檢驗效能指標(biāo)，無需定量測定，只要指出高于或低于該規(guī)定濃度即可。

2、靈敏度7語言優(yōu)教資源PPTLOD試驗方法空白溶劑系統(tǒng)適用性溶液5針雜質(zhì)對照品溶液進1針根據(jù)上一針雜質(zhì)對照品的S/N值進行稀釋進樣直到S/N為約3時，平行進樣3針。系統(tǒng)適用性溶液1針圖譜打?。弘s質(zhì)對照溶液及其稀釋液均要以performance+noise格式打印。系統(tǒng)適用必至少有一針用extendperformance格式打印2、靈敏度8語言優(yōu)教資源PPT(2)定量限(LOQ)

指樣品中被測物能被定量測定的最低量，結(jié)果應(yīng)具有一定準(zhǔn)確度和精密度要求。

2、靈敏度9語言優(yōu)教資源PPTLOQ試驗方法空白溶劑系統(tǒng)適用性溶液5針雜質(zhì)對照品溶液進1針根據(jù)上一針雜質(zhì)對照品的S/N值進行稀釋進樣直到S/N為約10時，平行進樣3針。系統(tǒng)適用性溶液1針圖譜打?。弘s質(zhì)對照溶液及其稀釋液均要以performance+noise格式打印。系統(tǒng)適用必至少有一針用extendperformance格式打印2、靈敏度10語言優(yōu)教資源PPT2、靈敏度報告數(shù)據(jù)：檢測限LOD濃度雜質(zhì).A雜質(zhì).B雜質(zhì).C雜質(zhì)D雜質(zhì).E雜質(zhì).F雜質(zhì).G主成分定量限LOQ濃度雜質(zhì).A雜質(zhì).B雜質(zhì).C雜質(zhì)D雜質(zhì).E雜質(zhì).F雜質(zhì).G主成分平均值RSD11語言優(yōu)教資源PPT

(1)線性:在設(shè)計的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。線形通常用最小二乘法處理數(shù)據(jù)求得回歸曲線的斜率來表示。數(shù)據(jù)要求：至少需要五個濃度考察線形，需提供相關(guān)系數(shù)、y截距（是檢定的可能偏差）、回歸斜率及方差等參數(shù)，應(yīng)列出回歸方程數(shù)和線性圖。

(2)范圍：指達到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性的條件下，測試方法適用的高、低限濃度或量的區(qū)間。有關(guān)雜質(zhì)測定應(yīng)為被測雜質(zhì)最低定量限至限度的150%。3、線性與范圍12語言優(yōu)教資源PPT3、線性與范圍

線性與范圍試驗方法（包括主成分和雜質(zhì)）空白溶劑系統(tǒng)適用性溶液5針配制從定量限到雜質(zhì)控制限度的150%的不同濃度樣品不少于6個（一般包括定量限、控制限度約50%、100%、150%等濃度）。從低濃度依次到高濃度依次進樣。系統(tǒng)適用性溶液1針圖譜打?。合到y(tǒng)適用必至少有一針用extendperformance格式打印其他圖譜可用short格式打印。最后經(jīng)calibration打出線性圖譜及線性方程參數(shù)。13語言優(yōu)教資源PPT3、線性與范圍報告數(shù)據(jù)：提供標(biāo)準(zhǔn)曲線圖斜率相關(guān)系數(shù)Y-截距評價：相關(guān)系數(shù)不得小于0.99014語言優(yōu)教資源PPT

4、準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度是指用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度，用百分回收率表示。

測定回收率的具體方法可采用“加樣回收試驗法”。

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加樣回收試驗：已準(zhǔn)確測定藥物含量P的真實樣品+已知量A的對照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測定，測定值為M4、準(zhǔn)確度16語言優(yōu)教資源PPT空白溶劑系統(tǒng)適用性溶液5針正常樣品檢測三份50%加雜樣品檢測三份100%加雜樣品檢測三份150%加雜樣品檢測三份系統(tǒng)適用性溶液1針圖譜打印：系統(tǒng)適用必至少有一針用extendperformance格式打印，其他圖譜可用short格式打印。4、準(zhǔn)確度17語言優(yōu)教資源PPT

數(shù)據(jù)報告：

規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果評價，如制備高、中、低三個不同濃度樣品各測三次。計算9次測定結(jié)果的平均值及RSD。平均值應(yīng)為90%～110%及RSD小于10%。4、準(zhǔn)確度18語言優(yōu)教資源PPT2．雜質(zhì)定量測定的準(zhǔn)確度雜質(zhì)的定量試驗可向原料藥中加入已知量雜質(zhì)進行測定。如果不能得到雜質(zhì)，可用本法測定結(jié)果與另一成熟的方法進行比較，如藥典方法或經(jīng)過驗證的方法。如不能測得雜質(zhì)的相對響應(yīng)因子，可在線測定雜質(zhì)的相關(guān)數(shù)據(jù)，如采用二極管陣列檢測器測定紫外光譜，當(dāng)雜質(zhì)的光譜與主成分的光譜相似，則可采用原料藥的響應(yīng)因子近似計算雜質(zhì)含量（自身對照法）。19語言優(yōu)教資源PPT已知雜質(zhì)相對與主成分在HPLC上的響應(yīng)比值計算方法：

(1)可直接用主成分對照品及雜質(zhì)對照品進行測定。

(2)也可由主成分及雜質(zhì)線性方程中的斜率比求得。5、響應(yīng)因子20語言優(yōu)教資源PPT精密度是指在規(guī)定條件下，同一個均勻樣品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏差（d）、標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)（變異系數(shù)，CV）表示。

6、精密性21語言優(yōu)教資源PPT標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（SD）6、精密性22語言優(yōu)教資源PPT相對標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（RSD）6、精密性23語言優(yōu)教資源PPT

1.重復(fù)性:A、在相同條件下，由同一個分析人員測定所得結(jié)果的精密度；在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果評價，如制備三個不同濃度樣品各測三次或（回收率法）B、把被測物濃度當(dāng)作100%，至少測6次進行評價。（樣品測定法）6、精密性24語言優(yōu)教資源PPT

2.中間精密度同一實驗室，不同時間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度。

3.重現(xiàn)性不同實驗室，不同分析人員測定結(jié)果的精密度。一般申報注冊不要求

數(shù)據(jù)要求：需報告平均值，RSD。6、精密性25語言優(yōu)教資源PPT報告數(shù)據(jù)：1、回收率、2、平均回收率、3、RSD評價：1、回收率應(yīng)為90%~110%2、RSD不得大于10%6、精密性26語言優(yōu)教資源PPT供試溶液與對照溶液分別放在室溫和冷藏下保存，分別在不同時間測定HPLC對照溶液峰面積下降值不得過10%供試品溶液中雜質(zhì)，峰面積相對偏差不得過10%。7、溶液穩(wěn)定性27語言優(yōu)教資源PPT報告數(shù)據(jù)：1、樣品與對照品的總雜質(zhì)峰面積及變化率。2、樣品與對照品的已知雜質(zhì)峰面積及變化率。3、樣品與對照品的最大未知雜質(zhì)峰面積及變化率。評價：1、對照品主峰的下降不得過10%2、樣品與初始值比較，雜質(zhì)變化不得過10%7、溶液穩(wěn)定性28語言優(yōu)教資源PPT

耐用性指測定條件稍有變動時，結(jié)果不受影響的承受程度，為常規(guī)檢驗提供依據(jù)。它是衡量實驗室和工作人員之間在正常情況下實驗結(jié)果重現(xiàn)性的尺度。通過在不同的條件下對同一樣品的分別測試而獲得的。（獲得的數(shù)據(jù)與正常檢測下的精密度進行比較，從而確定該法的耐用性，或稱粗放度）8、耐用性29語言優(yōu)教資源PPT典型的變動因素包括：

流動相的組成

流動相的pH值

流動相的流速

不同廠牌的同類型色譜柱

不同批號的同類型色譜柱

柱溫

波長

樣品溶劑的組成及pH等，

其它操作條件同常規(guī)檢驗8、耐用性30語言優(yōu)教資源PPT

耐用性試驗方法1空白溶劑系統(tǒng)適用性溶液5針正常樣品檢測三份50%加雜樣品檢測三份100%加雜樣品檢測三份150%加雜樣品檢測三份系統(tǒng)適用性溶液1針圖譜打?。合到y(tǒng)適用必至少有一針用extendperformance格式打印，其他圖譜可用short格式打印。8、耐用性31語言優(yōu)教資源PPT

耐用性試驗方法2（被測物質(zhì)有較高的含量）空白溶劑系統(tǒng)適用性溶液5針正常樣品檢測六份系統(tǒng)適用性溶液1針圖譜打?。合到y(tǒng)適用必至少有一針用extendperformance格式打印，其他圖譜可用short格式打印。8、耐用性32語言優(yōu)教資源PPT數(shù)據(jù)報告：求平均值與RSD，RSD小于10%。與重復(fù)性一起共計12個數(shù)據(jù)，計算平均值與RSD，RSD小于10%8、耐用性序號系統(tǒng)適用性參數(shù)測得值限度1分離度3.32NLT2.02標(biāo)準(zhǔn)品圖中的理論板數(shù)23324NLT50003標(biāo)準(zhǔn)品圖中的拖尾因子0.95NMT2.04三針標(biāo)準(zhǔn)液的RSD值.0.03NMT15.033語言優(yōu)教資源PPT匯總一下系統(tǒng)適用性要求要說明各峰的色譜參數(shù)，以extendperformance打印專屬性試驗說明各已知物質(zhì)的分離度與峰純度最低檢測限要說明信噪比參數(shù)，以performance+noise打印強力試驗以DAD檢測器試驗，要說明分離度、理論板數(shù)等要符合全要求，要有主峰和各已知雜峰的峰純度數(shù)據(jù)定量限要說明信噪比參數(shù)，以performance+noise打印線性與范圍要說明線性方程的斜率、截距及相關(guān)系數(shù)，用Calibration處理后打印出線性圖重復(fù)性試驗要說明各試驗數(shù)據(jù)的平均值與RSD中間精密性試驗要說明各試驗數(shù)據(jù)的平均值與RSD準(zhǔn)確性試驗要說明各試驗數(shù)據(jù)的回收率與RSD耐用性試驗要說明分離度、理論板數(shù)等要符合全要求，說明各次數(shù)據(jù)與正常測定數(shù)據(jù)的RSD，或要說明各試驗數(shù)據(jù)的回收率與RSD。溶液穩(wěn)定