DB21-T 2219.9-2024 玉米高粱主要病害抗病性鑒定技術(shù)規(guī)范 第9部分：玉米北方炭疽病

ICS65.020.2021RulesforevaluationofsorghumandmaizeforresistancetodIDB21/T2219.9—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件是DB21/T2219《玉米高粱主要病害抗病性鑒定技術(shù)規(guī)范》的第9部分。DB21/T2219已發(fā)布或計(jì)劃發(fā)布以下部分：——第1部分：高粱靶斑病抗性鑒定；——第2部分：高粱煤紋病抗性鑒定；——第3部分：高粱鐮孢菌莖腐病抗性鑒定；——第4部分：高粱絲黑穗病抗性鑒定；——第5部分：玉米灰斑病抗性鑒定；——第6部分：玉米彎孢菌葉斑病抗性鑒定；——第7部分：玉米青霉穗腐病；——第8部分：玉米木霉穗腐??；——第9部分：玉米北方炭疽??；…………。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。本文件起草單位：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)、遼寧省植保植檢總站、遼寧省林業(yè)有害生物防治檢疫站、遼寧省農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心、綏中縣農(nóng)業(yè)事務(wù)服務(wù)中心。本文件主要起草人：肖淑芹、高越、崔雪、薛春生、夏子豪、曲智、樸靜子、葛芳、屈麗莉、趙世學(xué)、黃宇飛、孫慕君、李眷、魯旭鵬、姜策、楊森月。本文件發(fā)布實(shí)施后，任何單位和個(gè)人如有問題和意見建議，均可以通過來電和來函等方式進(jìn)行反饋，我們將及時(shí)答復(fù)并認(rèn)真處理，根據(jù)實(shí)際情況，依法進(jìn)行評估及復(fù)審。歸口管理部門聯(lián)系方式：遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳（沈陽市和平區(qū)太原北街2號聯(lián)系電話文件起草單位聯(lián)系方式：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)（沈陽市沈河區(qū)東陵路120號聯(lián)系電話DB21/T2219.9—2024玉米、高粱種植面積約占遼寧省谷類作物一半以上。近年來，在玉米、高粱生產(chǎn)中病害的發(fā)生趨于嚴(yán)重，已成為制約玉米、高粱生長發(fā)育和優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的重要因素。因此，開展玉米、高粱主要病害抗病性鑒定，為抗病育種和病害流行預(yù)測預(yù)警提供技術(shù)支撐意義重大。為確保標(biāo)準(zhǔn)制定的系統(tǒng)性和應(yīng)用的便利性，針對遼寧省玉米、高粱主要病害抗病性鑒定技術(shù)需求，特制定本系列標(biāo)準(zhǔn)。DB21/T2219本次發(fā)布了一個(gè)部分：——第9部分：玉米北方炭疽病。本系列標(biāo)準(zhǔn)還將陸續(xù)發(fā)布其他玉米、高粱主要病害的抗病性鑒定技術(shù)部分。1DB21/T2219.9—2024玉米高粱主要病害抗病性鑒定技術(shù)規(guī)范第9部分：玉米北方炭疽病本文件規(guī)定了玉米北方炭疽?。↘abatiellazeae）抗病性鑒定的準(zhǔn)備、接種、調(diào)查、抗性評價(jià)和鑒定結(jié)果匯總等技術(shù)內(nèi)容。本文件適用于栽培玉米（ZeamaysL.）種質(zhì)資源和品種對玉米北方炭疽病抗性的鑒定及評價(jià)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。DB21/T2219.8玉米高粱主要病害抗性鑒定技術(shù)規(guī)范第8部分：玉米木霉穗腐病。3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4準(zhǔn)備4.1接種物4.1.1病原物的分離、鑒定和保存4.1.1.1分離從田間采集具有典型玉米北方炭疽病癥狀的葉片，以組織分離法從病斑上分離病原物后，再利用單孢分離法獲得純化培養(yǎng)物。4.1.1.2鑒定和保存純化培養(yǎng)物經(jīng)形態(tài)學(xué)特征和分子生物學(xué)鑒定結(jié)果將其確定為玉蜀黍球梗孢（見附錄A）。待純化菌株菌落長至1/2培養(yǎng)皿（90mm）時(shí)，用馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液（PotatoDextrose，簡稱PD）洗下分生孢子，過濾后獲得分生孢子懸浮液與50%甘油1:1比例混勻，-80℃保存?zhèn)溆?。PD的配制應(yīng)符合DB21/T2219.8的規(guī)定。4.1.2接種物的制備4.1.2.1培養(yǎng)基配制接種前需配制馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PotatoDextroseAgar，簡稱PDA）培養(yǎng)基和玉蜀黍球梗孢培養(yǎng)基（Kabatiellazeaemedium，簡稱KZM）。KZM的配制方法：選取羧甲基纖維素10g+麥芽糖5g+蛋白2DB21/T2219.9—2024胨1.5g+磷酸二氫鉀1g混合加入1000mL蒸餾水定容，分裝后121℃高壓滅菌30min。PDA的配制應(yīng)符合DB21/T2219.8的規(guī)定。4.1.2.2接種物獲取將保存菌株接種于PDA培養(yǎng)基，25℃黑暗條件下培養(yǎng)7d后，用無菌打孔器獲取菌落直徑為6mm的菌餅，將其接種于KZM培養(yǎng)基，接種前培養(yǎng)物經(jīng)三層已滅菌紗布過濾，獲得分生孢子懸浮液，用無菌水將分生孢子的濃度調(diào)至1×106個(gè)/mL，加入0.01%吐溫20，即可用于田間接種。4.2鑒定圃4.2.1圃地選擇應(yīng)選擇土壤肥力中等以上，具有良好自然發(fā)病環(huán)境和排灌設(shè)施的地塊。4.2.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)鑒定材料隨機(jī)排列或順序排列。進(jìn)行品種抗病性鑒定時(shí)，每30行鑒定材料設(shè)1組已知抗病和感病對照材料（見附錄B進(jìn)行種質(zhì)資源抗病性鑒定時(shí)，每50行鑒定材料設(shè)1組已知抗病和感病對照材料。圃地周邊應(yīng)設(shè)置保護(hù)行。4.2.3種植要求鑒定材料播種時(shí)間、方式與生產(chǎn)田相同。鑒定小區(qū)行長3m，行距與植株密度根據(jù)各區(qū)域品種試驗(yàn)要求確定，條播或穴播，每行保苗13株～15株。種質(zhì)資源鑒定種植2行，品種鑒定種植4行。土壤肥力水平和耕作管理方式與生產(chǎn)田相同。5接種5.1接種時(shí)期玉米心葉末期。接種時(shí)宜選擇在陰天或雨后傍晚。5.2接種方法采用噴霧接種法。將接種物均勻噴霧于植株葉片上，接種量為8mL/株～10mL/株。5.3接種前后的田間管理鑒定材料全生育期不施殺菌劑，同一項(xiàng)操作在同一天完成。要保持田間大氣濕度，若遇干旱天氣，應(yīng)及時(shí)田間澆灌，滿足發(fā)病條件。6調(diào)查6.1調(diào)查時(shí)間玉米乳熟末期。同批次接種材料應(yīng)在同一天完成。3DB21/T2219.9—20246.2調(diào)查方法目測每份鑒定材料群體發(fā)病情況。逐株逐葉調(diào)查，重點(diǎn)部位為玉米果穗上、下方各3片葉，根據(jù)癥狀描述，記錄每份材料病情級別。病情分級、相對應(yīng)的癥狀描述見表1。表1玉米對北方炭疽病抗性鑒定的病情級別劃分13579注：病斑面積占葉片面積比例以A表示。7抗性評價(jià)7.1鑒定有效性判別當(dāng)設(shè)置感病對照材料平均病情級別≥5.6時(shí)，該批次鑒定判定有效。7.2抗性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算每份鑒定材料的平均病情級別，并依據(jù)平均級別確定該鑒定材料對北方炭疽病的抗性?？剐缘膭澐謽?biāo)準(zhǔn)見表2。表2玉米對北方炭疽病抗性評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)7.3重復(fù)鑒定若鑒定材料初次鑒定時(shí)表現(xiàn)為高抗、抗、中抗，應(yīng)在次年進(jìn)行重復(fù)鑒定。7.4抗性評價(jià)對初次鑒定結(jié)果和重復(fù)鑒定結(jié)果進(jìn)行比較，以記載的最高病情級別為最終鑒定結(jié)果，并依此結(jié)果對鑒定材料進(jìn)行抗性評價(jià)。8鑒定結(jié)果匯總4DB21/T2219.9—2024玉米北方炭疽病鑒定結(jié)果整理后填入鑒定結(jié)果表格，見圖1。 年玉米抗北方炭疽病鑒定結(jié)果表圖1玉米抗北方炭疽病鑒定結(jié)果匯總表樣式圖5DB21/T2219.9—2024玉蜀黍球梗孢A.1學(xué)名和形態(tài)學(xué)鑒定引起玉米北方炭疽病的致病菌是玉蜀黍球梗孢KabatiellazeaeNaritaetHiratsuka，異名為玉蜀黍出芽短梗霉【AureobasidiumzeaeNaritaetHiratsuka)Dingle】。A.1.2玉蜀黍球梗孢形態(tài)特征：在PDA培養(yǎng)基上生長緩慢、菌落革質(zhì)，呈放射波紋狀，表面有極短的粉末狀菌絲，初呈乳白色，隨著菌齡增加，顏色漸變?yōu)榉奂t色，最后變?yōu)榛液稚蚝谏７稚咦颖P大多埋生于寄主氣孔下，極小，淡褐色，無剛毛。分生孢子梗短棒形，無色或淡褐色，頂端膨大，其上聚生分A.1.2AA.1.1圖A.1玉米北方炭疽病菌菌落（A.1.1）和分生孢子形態(tài)(A.1.2)A.2分子鑒定對玉蜀黍球梗孢脫氧核糖核酸（Deoxyribonucleicacid,DNA）中的內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（InternalTranscribedSpacer，ITS）和26S核糖體DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，對擴(kuò)增片段進(jìn)行測序和比對，擴(kuò)增引物為真菌的通用引物（表A.1）。PCR反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5min，95℃變性1min，55℃退火30s，72℃延伸30s，30個(gè)循環(huán)，72℃延伸10min。兩個(gè)基因擴(kuò)增的PCR體系和反應(yīng)條件相同。表A.1真菌通用PCR引物及反應(yīng)條件6DB21/T2219.9