DB21T 1861.2-2010 水產(chǎn)生物種質(zhì)檢驗(yàn)技術(shù)規(guī)程 擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性法　_第1頁(yè)
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DB21DB21/T1861.2—2010水產(chǎn)生物種質(zhì)檢驗(yàn)技術(shù)規(guī)程擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性法AFLPproceduretodetectgermplasmforaquaculturespecies2010-12-31發(fā)布2011-02-01實(shí)施遼寧省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I1GB/T18654.15-2008養(yǎng)殖魚(yú)類種質(zhì)檢驗(yàn)第15部分：2DNA酶切后經(jīng)PCR進(jìn)行選擇性擴(kuò)增，先將基因組DNA用兩種限制性內(nèi)切酶酶切成大小不等產(chǎn)物經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳將特異的限制性片段分離。由于不同來(lái)源DNA的酶切片段存在5.20乙二胺四乙酸（EDTA分析純。34空白對(duì)照管；在每個(gè)離心管中加入15μL配制好的毛囊裂解液。毛囊裂解液用1×PCR緩沖液(50用苯酚和氯仿方法抽提DNA；用50μLTE緩沖液（10mmol/LTris-HClpH8.0，lmmol/LEDT末狀；將研缽放入65℃水浴至樣品粉末剛開(kāi)始融化，向研缽中加入DNA提取液(10mmol/L5吸取1~3μL提取的DNA，用濃度1~2％g/mL)=[A260／(0.020×L)]×本規(guī)程統(tǒng)一采用EcoRⅠ/MseⅠ雙酶切組合反應(yīng)體系。按表1配體積(μL） ————體積(μL）627循環(huán)降低退火（1）模具處理與安裝：清洗用作模具的玻璃板并晾干，并分別涂上），（3）預(yù)電泳凝膠聚合后，將梳子正向插入膠頂空處，形成加樣孔，連接好電泳設(shè)備，添加TBE（9）將上述膠板置于凝膠成像儀中，利用相關(guān)圖像采集系8Shannon多樣性指數(shù)(Shannonindex，I)、遺傳距離（GeneticDistance，D）等遺傳參算。并用UPGMA做基于Nei’s遺傳距離的樹(shù)形圖，以及用鄰近法（Neighborjoiningmethod，NJ）構(gòu)建MseⅠ選擇擴(kuò)增引物：5

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