DB21T 3767-2023 大豆來(lái)源蛋白質(zhì)飼料原料預(yù)消化酶解工藝技術(shù)規(guī)范

ICS65.120CCSB46212023-06-30發(fā)布IDB21/T3767—2023本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。本文件由遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。本文件起草單位:遼寧省農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心、遼寧康普利德生物科技有限公司、沈陽(yáng)市康普利德生物科技有限公司、彰武縣畜牧業(yè)發(fā)展服務(wù)中心。本文件主要起草人:韓業(yè)東、李延山、權(quán)志中、魏萊、董延江、楊寧、王虎、梁麗萍、吳倩、卞大偉、宣麗、肖愛(ài)波、張巖彬、劉志良、劉勝男、李春雨、佟玉紅、章沙沙、呂鳳祿、黃雪嬌、趙紅秋。本文件發(fā)布實(shí)施后，任何單位和個(gè)人如有問(wèn)題和意見(jiàn)建議，均可以通過(guò)來(lái)電和來(lái)函等方式進(jìn)行反饋，我們將及時(shí)答復(fù)并認(rèn)真處理，根據(jù)實(shí)際情況依法進(jìn)行評(píng)估及復(fù)審。歸口管理部門通訊地址：遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳（沈陽(yáng)市和平區(qū)太原北街2號(hào)聯(lián)系電話標(biāo)準(zhǔn)起草單位通訊地址：遼寧省農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心（沈陽(yáng)市和平區(qū)南四經(jīng)街143號(hào)），聯(lián)系電話1DB21/T3767—2023大豆來(lái)源蛋白質(zhì)飼料原料預(yù)消化酶解工藝技術(shù)規(guī)范本文件規(guī)定了大豆來(lái)源蛋白質(zhì)飼料原料預(yù)消化酶解工藝的設(shè)備、原料、工藝以及質(zhì)量等方面技術(shù)要本文件適用于以大豆或大豆加工產(chǎn)品等蛋白質(zhì)飼料為原料的預(yù)消化酶解工藝控制。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6432飼料中粗蛋白的測(cè)定凱氏定氮法GB/T6434飼料中粗纖維的含量測(cè)定過(guò)濾法GB/T6435飼料中水分的測(cè)定GB/T6436飼料中鈣的測(cè)定GB/T6437飼料中總磷的測(cè)定分光光度法GB/T6438飼料中粗灰分的測(cè)定GB13078飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T14699.1飼料采樣GB/T22491大豆低聚糖GB/T22492大豆肽粉3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1飼料預(yù)消化技術(shù)Feedpre-digestiontechnology飼料預(yù)消化技術(shù)是模擬動(dòng)物消化過(guò)程，對(duì)飼料原料進(jìn)行加工處理，降解原料中的部分大分子營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，消除或降解大部分抗?fàn)I養(yǎng)因子和有毒有害物質(zhì)，增加可消化養(yǎng)分含量，提高飼料利用率的一種新型飼料加工技術(shù)。4設(shè)備要求4.1酶解反應(yīng)釜酶解反應(yīng)釜應(yīng)具有混合、加熱、保溫功能，且具備清洗和消毒條件。4.2干燥設(shè)備2DB21/T3767—2023干燥設(shè)備應(yīng)根據(jù)原料、半成品特性和產(chǎn)品要求選擇，包括噴霧干燥設(shè)備、流化床干燥設(shè)備、滾筒干燥設(shè)備等。5原料5.1預(yù)消化原料預(yù)消化原料主要包括大豆、大豆分離蛋白、豆粕、豆餅、豆渣等。5.2酶制劑酶制劑以蛋白酶為主，纖維素酶、植酸酶、果膠酶為輔進(jìn)行選擇。6酶解工藝要求6.1混合將預(yù)消化原料、酶制劑和水進(jìn)行混合，水分含量50%～60%，混合均勻度變異系數(shù)≤7%。6.2酶解蛋白酶、纖維素酶、植酸酶酶解溫度應(yīng)控制在45℃~50℃之間，pH值控制在5.5～6.5，最宜酶解時(shí)間為4h～6h。6.3滅酶酶解結(jié)束后，要對(duì)酶解物料進(jìn)行滅酶處理，滅酶溫度≥95℃,滅酶時(shí)間10min～15min。6.4干燥依據(jù)不同的物料特性和產(chǎn)品用途采取適當(dāng)?shù)母稍镌O(shè)備及工藝參數(shù)，最終控制水分≤12%。7質(zhì)量要求7.1感官指標(biāo)要求及其檢測(cè)方法外觀色澤均一，呈淡黃色、黃色至棕黃色，具有大豆特有氣味，無(wú)異味，無(wú)雜質(zhì)。采用目視、鼻嗅、手感的方法檢查樣品的色澤、氣味、質(zhì)地。取樣應(yīng)符合GB/T14699.1的要求。7.2衛(wèi)生指標(biāo)要求及其檢測(cè)方法按GB13078的規(guī)定執(zhí)行。7.3營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)要求及其檢測(cè)方法7.3.1常規(guī)營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)及其檢測(cè)方法常規(guī)營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)包括粗蛋白質(zhì)、粗纖維、粗灰分、鈣、總磷、水分等。其中粗蛋白按GB/T6432的規(guī)定執(zhí)行，粗纖維按GB/T6434的規(guī)定執(zhí)行，粗灰分按GB/T6438的規(guī)定執(zhí)行，鈣含量按GB/T6436的規(guī)定執(zhí)行，總磷按GB/T6437的規(guī)定執(zhí)行，水分按GB/T6435的規(guī)定執(zhí)行。3DB21/T3767—20237.3.2酶解指標(biāo)及其檢測(cè)方法酶解指標(biāo)主要包括酸溶蛋白、水蘇糖、棉籽糖、大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白。酸溶蛋白按GB/T22492的規(guī)定執(zhí)行；水蘇糖、棉籽糖按GB/T22491的規(guī)定執(zhí)行；大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白按附錄A的規(guī)定執(zhí)行。4DB21/T3767—2023大豆蛋白預(yù)消化飼料中大豆球蛋白/β-伴大豆球蛋白的測(cè)定方法酶聯(lián)免疫法A.1范圍本部分規(guī)定了大豆蛋白預(yù)消化飼料中大豆球蛋白/β-伴大豆球蛋白的酶聯(lián)免疫測(cè)定方法。本部分適用于大豆蛋白預(yù)消化飼料中大豆球蛋白/β-伴大豆球蛋白的測(cè)定。A.2原理在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被大豆球蛋白/β-伴大豆球蛋白抗原，樣品中的大豆球蛋白/β-伴大豆球蛋白和預(yù)包被的抗原競(jìng)爭(zhēng)大豆球蛋白/β-伴大豆球蛋白抗體，加入酶標(biāo)二抗后，用TMB底物顯色，樣品吸光度值與其所含大豆球蛋白/β-伴大豆球蛋白的含量呈負(fù)相關(guān)，與校準(zhǔn)曲線比較再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可得出樣品中大豆球蛋白/β-伴大豆球蛋白的含量。A.3試劑和材料A.3.1大豆球蛋白/β-伴大豆球蛋白酶聯(lián)免疫測(cè)定試劑盒中的試劑A.3.1.1濃縮樣品提取液A.3.1.2樣品稀釋液A.3.1.3濃縮洗液A.3.1.4酶標(biāo)板A.3.1.5校準(zhǔn)品A.3.1.6大豆球蛋白/β-伴大豆球蛋白抗體工作液A.3.1.7大豆球蛋白/β-伴大豆球蛋白酶標(biāo)試劑A.3.1.8底物液AA.3.1.9底物液BA.3.1.10終止液A.3.1.11蓋板膜A.3.1.12除非另有說(shuō)明，在分析中僅使用確認(rèn)為分析純的試劑和蒸餾水或去離子水或相當(dāng)純度的水。A.3.2試劑配制A.3.2.1樣品提取工作液的配制將濃縮樣品提取液（A.3.1.1）用雙蒸水或去離子水按測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)要求的體積比進(jìn)行稀釋，用于樣品中大豆球蛋白/β-伴大豆球蛋白的提取。A.3.2.2洗滌工作液的配制將濃縮洗液（A.3.1.3）用雙蒸水或去離子水按測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)要求的5DB21/T3767—2023體積比進(jìn)行稀釋，用于酶標(biāo)板的洗滌。A.4儀器和設(shè)備A.4.1小型粉碎機(jī)A.4.2分樣篩60目A.4.3分析天平感量0.1mgA.4.4具塞三角瓶100mLA.4.5電動(dòng)振蕩器A.4.6微量連續(xù)可調(diào)取液器及配套吸頭：10μL～100μLA.4.7恒溫培養(yǎng)箱A.4.8酶標(biāo)儀內(nèi)置450nm濾光片A.5分析步驟A.5.1試樣準(zhǔn)備將待檢樣品粉碎成60目以上顆粒，稱取0.1g（根據(jù)所測(cè)樣品中大豆球蛋白/β-伴大豆球蛋白的預(yù)估值高低可適當(dāng)調(diào)整，精確至0.1mg）樣品加入到配好的30mL樣品提取工作液中，于25℃振蕩提取12h～16h，靜置10min～20min，取上清液用樣品稀釋液稀釋到適合的工作濃度。A.5.2樣品檢測(cè)A.5.2.1平衡將測(cè)定試劑盒（A3.1）從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20℃~25℃)平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。A.5.2.2取出需要數(shù)量的酶標(biāo)板條。A.5.2.3編號(hào)將樣品和校準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣品和校準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄校準(zhǔn)品孔和樣品孔所在的位置。A.5.2.4加校準(zhǔn)品/樣品將6種校準(zhǔn)品以及待測(cè)樣品各50μL加到對(duì)應(yīng)的微孔中，再加入抗體工作液50μL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min。A.5.2.5洗板小心揭開(kāi)蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液300μL/孔充分洗滌5次，每次浸泡10s，用吸水紙拍干（拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭戳破）。A.5.2.6加酶標(biāo)試劑加入酶標(biāo)試劑100μL/孔，輕輕振蕩均勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光反應(yīng)30min，取出洗板，洗板操作見(jiàn)A.5.2.5。A.5.2.7顯色將等體積底物液A與底物液B放入干凈容器中，振蕩混勻。加入AB混合液100μL/孔，用蓋板膜蓋板后，置37℃避光反應(yīng)15min。A.5.2.8測(cè)定加入終止液50μL/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè)更佳），在5min內(nèi)讀取所有樣品吸光度值并記錄保存。6DB21/T3767—2023A.5.3結(jié)果計(jì)算A.5.3.1百分吸光率的計(jì)算校準(zhǔn)品或樣品的百分吸光率等于校準(zhǔn)品或樣品的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以100%，如式（A.1）所示。式中：α—百分吸光率B—校準(zhǔn)品溶液或樣品溶