微生物學(xué)實驗一課件

微生物學(xué)實驗微生物學(xué)實驗一1.應(yīng)保持實驗室安靜，切勿高聲喧嘩和隨意走動。2.實驗室內(nèi)禁止飲食、吸煙、及用嘴濕潤鉛筆和標(biāo)簽等物。3.使用顯微鏡和其它貴重儀器時，應(yīng)在教師同意后方可使用，切勿擅自拆卸，否則因此而損壞儀器，應(yīng)予以賠償。4.遇意外發(fā)生，應(yīng)立即報告教師，不可自己隨意處理。實驗室須知微生物學(xué)實驗一實驗室注意事項：每次實驗前必須認真預(yù)習(xí)，課堂上注意聆聽教師對實驗內(nèi)容的講解，注意觀察教師的示范操作。實驗時應(yīng)仔細認真，嚴(yán)格按操作規(guī)程進行，注意改變生活中的習(xí)慣動作，以掌握微生物學(xué)實驗的科學(xué)操作方法。使用貴重儀器應(yīng)先事先熟知操作規(guī)程，遇儀器故障時請教師幫助解決。實驗中如遇菌液外溢、皮膚劃傷或菌液吸入等意外，應(yīng)立即報告老師及時進行處理，不得隱瞞，以免釀成后患。5.注意安全，易燃物品如二甲苯、吸水紙等應(yīng)遠離火源。打火機只能用于點燃酒精燈，酒精燈用完應(yīng)及時蓋上燈帽。6.實驗完畢，必須將儀器放到指定地點，帶菌工具應(yīng)先進行消毒。微生物學(xué)實驗一7.實驗需進行培養(yǎng)的材料，要標(biāo)明姓名、組別、日期后，放于教師指定的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。8.未經(jīng)教師同意，實驗室中的任何菌種和物品不得攜帶出室外。9.實驗時應(yīng)認真進行觀察和操作，做好實驗記錄；有疑難問題向教師求教。10.勵行節(jié)約，對水、電、染色液、鏡油、擦鏡紙、吸水紙及其它藥品等均應(yīng)節(jié)約使用。11.實驗后應(yīng)對實驗室整理清掃，洗手后方可離開實驗室，關(guān)窗鎖門。實驗室注意事項：微生物學(xué)實驗一微生物學(xué)實驗室常用的器皿1．試管2．吸管3．培養(yǎng)皿4．三角燒瓶5．載玻片與凹玻片普通載玻片用于微生物涂片、染色，作形態(tài)觀察等凹玻片是在一塊厚玻片的當(dāng)中有一圓形凹窩，作懸滴觀察活細菌以及微室培養(yǎng)用。6.滴瓶：用來裝各種染料、生理鹽水等7.接種工具：接種環(huán)、接種針等微生物學(xué)實驗一常用器材酒精燈1/人接種環(huán)1/人試管夾1/人吸耳球1/2人計數(shù)器1/2人鑷子1/2人香柏油1/2人擦鏡紙1/2人微生物學(xué)實驗一實驗報告格式基本信息的填寫（不能留空）。題目目的原理材料和器皿方法和步驟實驗結(jié)果畫圖文字描述分析和討論思考題實驗報告必須以實事求是、嚴(yán)肅認真的科學(xué)態(tài)度，按照指導(dǎo)書的要求按時完成。實驗報告應(yīng)該簡明扼要、敘述準(zhǔn)確、數(shù)據(jù)完整、繪圖清晰且寫實，應(yīng)有討論、有分析，結(jié)論明確。微生物學(xué)實驗一清潔與衛(wèi)生保持實驗臺的清潔與試劑架的整齊潔凈。廢紙、培養(yǎng)基等廢棄物一律丟入垃圾桶內(nèi)，嚴(yán)禁放入水槽！培養(yǎng)皿、玻片、試管等玻璃儀器清洗后一律擱置涼在不朽鋼網(wǎng)框里。玻片上的染液必須徹底清洗干凈（用洗衣粉洗）。培養(yǎng)皿、試管等玻璃儀器上做的標(biāo)記必須徹底洗凈。最終垃圾由值日生倒入衛(wèi)生間籮框里，濕拖把掛在水槽水龍頭架上滴水涼干。每次值日生4人。微生物學(xué)實驗一實驗一顯微鏡油鏡的使用及細菌的簡單染色法實驗二

細菌的革蘭氏染色及芽孢染色法實驗三鞭毛染色法及活細菌運動性的觀察實驗四四大類微生物菌落及個體形態(tài)觀察實驗五微生物大小測定及血球計數(shù)板計數(shù)實驗六培養(yǎng)基配制及滅菌實驗七微生物的分離純化與平板菌落計數(shù)實驗八微生物的生理生化反應(yīng)（一）實驗九微生物的生理生化反應(yīng)（二）

實驗內(nèi)容微生物學(xué)實驗一顯微鏡油鏡的使用及細菌的簡單染色法實驗一教學(xué)目標(biāo)或要求：鞏固和掌握顯微鏡油鏡的正確使用；學(xué)習(xí)細菌制片和簡單染色技術(shù)；觀察細菌的三種基本形態(tài)；初步建立無菌操作的概念；微生物學(xué)實驗一顯微鏡的構(gòu)造

1.光學(xué)部分:接目鏡、接物鏡、照明裝置(聚光鏡、反光鏡等).它使檢視物放大,造成物象.

2.機械部分:鏡座、鏡臂、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺、載物臺轉(zhuǎn)移器、粗調(diào)節(jié)器、細調(diào)節(jié)器等部件.它起著支持、調(diào)節(jié)、固定等作用.微生物學(xué)實驗一油鏡使用的原理

油鏡，即油浸物鏡。當(dāng)光線由反光鏡通過玻片與鏡頭之間的空氣時，由于空氣與玻片的密度不同，使光線受到曲折，發(fā)生散射，降低了視野的照明度。若中間的介質(zhì)是一層油（其折射率與玻片的相近），則幾乎不發(fā)生折射，增加了視野的進光量，從而使物象更加清晰。微生物學(xué)實驗一顯微鏡的放大倍數(shù)、分辨率和數(shù)值孔徑

1.放大倍數(shù)=物鏡放大倍數(shù)×目鏡放大倍數(shù)

2.分辨率：是表示顯微鏡辨析物體（兩端）兩點之間距離的能力，可用公式表示為：δ=0.61×λ/N.A

式中：

δ：物鏡分辨出物體兩點間的最短距離。：可見光的波長（平均0.55m)N.A:數(shù)值孔徑

3.數(shù)值孔徑(N.A)=n×sinα/2其意為玻片和物鏡之間的折射率（n）乘以光線投射到物鏡上的最大夾角（a）的一半的正弦。微生物學(xué)實驗一（一）顯微鏡使用步驟1.放置好顯微鏡2.調(diào)節(jié)光源3.低倍鏡觀察4.高倍鏡觀察5.油鏡觀察6.清潔和還原顯微鏡微生物學(xué)實驗一1.放置好顯微鏡

置顯微鏡于平穩(wěn)的實驗臺上，鏡座距實驗臺邊沿約為3-4cm。鏡檢者姿勢要端正。（取、放顯微鏡時應(yīng)一手握住鏡臂，一手托住底座，使顯微鏡保持直立、平穩(wěn)。切忌用單手拎提；且不論使用單筒顯微鏡或雙筒顯微鏡均應(yīng)雙眼同時睜開觀察，以減少眼睛疲勞，也便于邊觀察邊繪圖或紀(jì)錄。2.調(diào)節(jié)好光源接通電源，打開光源。微生物學(xué)實驗一瞳距調(diào)節(jié)微生物學(xué)實驗一粗調(diào)松緊調(diào)節(jié)旋鈕微生物學(xué)實驗一聚光鏡中心調(diào)節(jié)②10X物鏡①標(biāo)本④聚光鏡升降旋鈕微生物學(xué)實驗一3.低倍鏡的觀察。將標(biāo)本片放在載物臺上，用標(biāo)本夾夾住，調(diào)節(jié)標(biāo)本移動螺旋，使觀察的目的物處于物鏡的正下方。調(diào)節(jié)粗調(diào)螺旋，使物鏡（10×）與標(biāo)本靠近，眼睛在測向注視物鏡，防止物鏡和載玻片相碰。張開雙眼向目鏡里觀察，如果見到目的物，但不十分清楚，可用細準(zhǔn)焦螺旋調(diào)節(jié)，至目的物清晰為止。通過玻片夾推進器慢慢移動玻片，認真觀察標(biāo)本各部分，找到合適的目的物，仔細觀察并記錄所觀察到的結(jié)果。微生物學(xué)實驗一4.高倍鏡的觀察使用高倍鏡前，必須先用低倍鏡觀察，發(fā)現(xiàn)目的物后將它移至視野正中處。旋動轉(zhuǎn)換器換高倍鏡。如果高倍鏡觸及載玻片立即停止旋動，這說明原來低倍鏡并沒有調(diào)準(zhǔn)，目的物并沒有真正找到，必須用低倍鏡重新調(diào)節(jié)。如果高倍鏡下觀察目的物有點模糊，調(diào)節(jié)細準(zhǔn)焦螺旋，直到視野清晰。調(diào)節(jié)細準(zhǔn)焦螺旋時要注意旋轉(zhuǎn)方向與載物臺上升或下降的關(guān)系，防止鏡頭與載玻片強力接觸，損壞鏡頭或載玻片。微生物學(xué)實驗一5.油鏡的觀察

降低載物臺約1.5-2.0cm，將油鏡轉(zhuǎn)到光路上來。在載玻片目標(biāo)物上滴加一滴香柏油。從側(cè)面注視，上升載物臺，使油鏡前端浸入香柏油。防止發(fā)生油鏡壓破玻片或進一步發(fā)生玻片頂壞油鏡前的透鏡的危險。然后一邊觀察一邊用細調(diào)節(jié)器緩緩下降載物臺，直至視野中出現(xiàn)清晰的物像。如果油鏡已經(jīng)離開油面，則必須重新從側(cè)面注視，再將油鏡頭浸入油中，重復(fù)上面操作。（應(yīng)特別注意不要在升降載物臺時用力過猛，或者調(diào)焦時誤將粗調(diào)節(jié)螺旋向反方向轉(zhuǎn)動而損壞鏡頭及載玻片）微生物學(xué)實驗一6.清潔顯微鏡和還原顯微鏡.

觀察結(jié)束后，調(diào)節(jié)光源到最小再關(guān)掉電源開關(guān)。調(diào)節(jié)粗調(diào)螺旋，使載物臺下降到最低，取下玻片。.觀察完畢，把油鏡轉(zhuǎn)離光軸，應(yīng)及時把鏡頭上的香柏油擦去。擦拭時先用干凈擦鏡紙擦去鏡頭上的油滴，然后再用二甲苯潤濕一新的擦鏡紙，一直線方向擦拭鏡頭1-2次，最后再用干凈的擦鏡紙擦1-2次去除二甲苯殘漬。.用擦油鏡頭的方法擦觀察過的標(biāo)本片。

微生物學(xué)實驗一普通光學(xué)顯微鏡注意事項1使用油鏡必須按先用低倍鏡和高倍鏡觀察，再用油鏡觀察2下降鏡頭時，一定要從側(cè)面注視，切忌用眼睛對著目鏡，邊觀察邊下降鏡頭的錯誤操作，以免壓碎玻片而損壞鏡頭。3使用二甲苯擦鏡頭時，注意二甲苯不能過多，以防溶解固定透鏡的樹脂。4注意保持顯微鏡的潔凈，對金屬部分要用軟布擦拭，擦鏡頭必須用擦鏡紙，切勿用手或用普通布、紙等，以免損壞鏡頭。微生物學(xué)實驗一六、顯微結(jié)構(gòu)圖的繪制

（1）繪圖要用黑色硬鉛筆，不要用軟鉛筆或有色鉛筆，一般用2H鉛筆為宜。（2）畫圖時先用輕淡小點或輕線條畫出輪廓，再依照輪廓一筆畫出與物象相符的線條。線條要清晰，比例要準(zhǔn)確。(3)圖的明暗及濃淡，應(yīng)用細點表示，不要采用涂抹方法。點細點時，要點成圓點，不要點成小撇。(4)整個圖要美觀、整潔，還要特別注意準(zhǔn)確性微生物學(xué)實驗一（二）細菌的簡單染色1.定義

是只用一種染料使細菌著色以顯示其形態(tài)，不能辨別細菌細胞的構(gòu)造，通常采用堿性染料（如美藍、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅等）使其著色。1、原理微生物學(xué)實驗一菌種：培養(yǎng)18-24h的枯草芽孢桿菌染色液和試劑：美藍、香柏油、生理鹽水標(biāo)本片：細菌三型涂片器材：載玻片、接種環(huán)、酒精燈、擦鏡紙、顯微鏡等。2、實驗器材微生物學(xué)實驗一實驗程序——細菌簡單染色生理鹽水涂片接種環(huán)自然干燥固定

美藍染色1min水洗干燥擦拭水洗時不要直接沖菌膜微生物學(xué)實驗一微生物學(xué)實驗一染色注意事項1.涂片過程中，取生理鹽水和細菌不宜過多，涂菌要均勻，不宜過厚。2.固定時溫度不可過高，以載玻片背面不燙手背為宜，因為溫度過高會破壞細胞的形態(tài)。3.水洗時，不應(yīng)直接沖洗細菌涂面，水流不應(yīng)過大、過急，以免細菌涂面被沖掉。微生物學(xué)實驗一