DB21T 3859-2023 文冠果組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程　　

ICS65.020.01CCSB61DB21遼寧省市場監(jiān)督管理局發(fā)布IDB21/T3859—2023前言 Ⅲ 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4外植體采集 4.1選取部位 4.2取材季節(jié) 4.3取材標準 5培養(yǎng)基配制 5.1接種器具和培養(yǎng)基滅菌 5.2初代培養(yǎng)基配方 5.3繼代培養(yǎng)基配方 5.4生根培養(yǎng)基配方 6外殖體處理 6.1處理 6.2消毒滅菌 6.3準備 7初代培養(yǎng) 7.1培養(yǎng)環(huán)境條件 7.2培養(yǎng)方法 8繼代培養(yǎng) 8.1培養(yǎng)環(huán)境條件 8.2培養(yǎng)方法 9生根培養(yǎng) 9.1培養(yǎng)環(huán)境條件 9.2培養(yǎng)方法 9.3生根 10組培苗移栽 10.1移苗季節(jié) 10.2移苗前準備 10.3移栽 10.4移栽后管理 11技術(shù)檔案 DB21/T3859—2023附錄A（資料性）文冠果穴盤苗培養(yǎng)的管理措施 5附錄B（資料性）文冠果苗期病蟲害防治藥劑及使用方法 6附錄C（資料性）文冠果組織培養(yǎng)苗木質(zhì)量分級 7DB21/T3859—2023本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起本文件由遼寧省林業(yè)和草原局提出并歸口。本文件起草單位：大連民族大學(xué)、上海培林生物科技有限公司、大連市自然資源事務(wù)服務(wù)中心、國有阜新蒙古族自治縣林業(yè)科技示范林楊。本文件起草人：阮成江、都小緒、任麗娜、閆曉芳、丁健、杜維、高巖、張輝、李穎群、李賀、王莉、李景濱、趙思陽、姜鑫、姜藝、周慧、程彥博、常婧、林曉坤。本文件發(fā)布實施后，任何單位和個人如有問題和意見建議，均可以通過來電和來函等方式進行反饋，我們將及時答復(fù)并認真處理，根據(jù)實際情況依法進行評估及復(fù)審。歸口管理部門通訊地址：遼寧省林業(yè)和草原局（沈陽市和平區(qū)太原北街2號），聯(lián)系電話文件起草單位通訊地址：大連民族大學(xué)（大連市金普新區(qū)遼河西路18號聯(lián)系電話1DB21/T3859—2023文冠果組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了文冠果（XanthocerassorbifoliumBunge）組織培養(yǎng)育苗過程中外植體采集、配養(yǎng)基配制、外殖體處理、初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、組培苗移栽和技術(shù)檔案等技術(shù)要求。本文件適用于遼寧省行政區(qū)域內(nèi)文冠果組織培養(yǎng)育苗。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6001育苗技術(shù)規(guī)程LY/T1882林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1文冠果XanthocerassorbifoliumBunge無患子科文冠果屬的多年生落葉喬木。3.2初代培養(yǎng)primaryculture又稱誘導(dǎo)芽培養(yǎng)，外植體接種到培養(yǎng)基上以后，一般先放在培養(yǎng)室進行弱光培養(yǎng)，首先要得到無菌的材料，然后逐漸促進材料的分化和生長，這是試管苗的第一代，稱初代培養(yǎng)。3.3繼代培養(yǎng)subculture又稱分化培養(yǎng)，初代培養(yǎng)以后通過不斷調(diào)試培養(yǎng)基和轉(zhuǎn)接試管苗，使試管苗數(shù)量很快擴大，這種不斷轉(zhuǎn)接增殖的過程稱為繼代培養(yǎng)。3.4生根培養(yǎng)rootingculture大量繼代增殖以后能形成無根的芽苗，在培養(yǎng)基上，利用從莖表皮細胞分裂形成突起的根原基，進一步從表皮培養(yǎng)形成根的過程。4外植體采集4.1選取部位選取文冠果莖尖、莖段。2DB21/T3859—20234.2取材季節(jié)在春季芽開始萌發(fā)或正萌發(fā)生長時取材。4.3取材標準選取當年半木質(zhì)化枝的嫩芽、嫩枝段做材料；莖尖、莖段長0.5cm～1.0cm，每段留芽1個～2個。5培養(yǎng)基配制5.1接種器具和培養(yǎng)基滅菌接種器具和培養(yǎng)基滅菌參照LY/T1882。5.2初代培養(yǎng)基配方初代培養(yǎng)基：S+6-芐基腺嘌呤1mg/L+吲哚-3-丁酸0.1mg/L+山梨酸鉀20mg/L+糖30g/L+瓊脂6g/L。5.3繼代培養(yǎng)基配方繼代培養(yǎng)基：減少200mg/L硝酸銨的MS培養(yǎng)基+6-芐基腺嘌呤0.5mg/L+萘乙酸0.1mg/L+糖30g/L+瓊脂6g/L。壯苗培養(yǎng)基：減少200mg/L硝酸銨的MS培養(yǎng)基+6-芐基腺嘌呤0.1mg/L+萘乙酸0.1mg/L+維生素B12mg/L+糖30g/L+瓊脂6g/L。5.4生根培養(yǎng)基配方文冠果組織培養(yǎng)的生根培養(yǎng)基：1/2MS培養(yǎng)基+吲哚-3-丁酸1mg/L+維生素C150mg/L+糖30g/L+瓊脂6g/L。6外殖體處理6.1處理用消毒過的剪刀，采集文冠果半木質(zhì)化嫩枝作為外植體，用清潔水漂洗1h～2h，再用流水沖洗干凈，標記好編號。將外植體葉片剪掉，留1cm～2cm的葉柄，用流水沖洗10min～30min，剪成3cm～5cm帶芽莖段。6.2消毒滅菌將洗干凈的外植體拿到超凈臺內(nèi)，用75%酒精沖洗30s～60s，無菌水沖洗3次，再用次氯酸鈉溶液消毒3min～10min，無菌水洗4次水洗,間隔不少于5min，沖洗次數(shù)以水清澈為準。6.3準備將已滅菌的枝條去掉頂端和底部，切成0.5cm～1cm帶芽莖段、莖尖。7初代培養(yǎng)7.1培養(yǎng)環(huán)境條件3DB21/T3859—2023培養(yǎng)室溫度23℃~25℃,濕度20%～30%，光照強度2200lx～2500lx，整齊擺放在培養(yǎng)架上。7.2培養(yǎng)方法在超凈工作臺上將準備好的外植體接種在初代培養(yǎng)基上。暗培養(yǎng)3d后轉(zhuǎn)入光培養(yǎng)，培養(yǎng)25d～35d莖段上萌發(fā)出不定芽。8繼代培養(yǎng)8.1培養(yǎng)環(huán)境條件培養(yǎng)室溫度23℃~25℃,濕度20%～30%，光照強度2200lx～2500lx，整齊擺放在培養(yǎng)架上。8.2培養(yǎng)方法外植體長滿培養(yǎng)瓶，就需轉(zhuǎn)入到新的繼代培養(yǎng)基中，在超凈工作臺上，用接種剪子和鑷子剪成1.0cm～1.2cm莖段插入培養(yǎng)瓶內(nèi)，每瓶10段～15段。繼續(xù)培養(yǎng)25d～30d，待其長滿瓶后轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，重復(fù)操作。文冠果擴繁方法為分株繁殖方式，擴繁繼代過程的擴繁系數(shù)為6。9生根培養(yǎng)9.1培養(yǎng)環(huán)境條件培養(yǎng)室溫度18℃~25℃,濕度20%～30%，光照強度2200lx～2500lx，整齊擺放在培養(yǎng)架上。9.2培養(yǎng)方法采用培養(yǎng)基瓶內(nèi)一步生根法生根。在無菌超凈工作臺上，從壯苗培養(yǎng)后的芽叢中切割單株，用接種剪子和鑷子剪成1.0cm～1.2cm莖段插入培養(yǎng)瓶內(nèi)，每瓶插10株～15株。在黑暗環(huán)境中培養(yǎng)8d～10d,根原基開始萌動后，開始正常培養(yǎng)。9.3生根生根過程為25d～30d，根數(shù)1條～5條，顏色白色，吸收力強，移栽成活率高。10組培苗移栽10.1移苗季節(jié)組培苗移入溫室全年均可進行，最佳時間為早春。10.2移苗前準備10.2.1清除培養(yǎng)基組培苗從瓶中取出，放在20℃左右的清水中，將附著在根上的培養(yǎng)基進行徹底清洗，注意不能傷根；對長度超過5cm的根進行適當修剪。最后蘸根寶3號生根劑1000倍液～2000倍液促進生根。10.2.2穴盤準備4DB21/T3859—2023采用5×10的穴盤。將基質(zhì)添加入穴盤的每一個穴位。基質(zhì)要求排水性和透氣性良好，同時有一定的保水性；可采用草炭和沙子按照比例1:1進行混合，然后用敵克松500倍液～800倍液均勻噴灑進行消10.3移栽采用穴盤移栽文冠果組培苗。栽植標準為：苗木根系舒展，上不埋心，下不露根，并輕輕鎮(zhèn)壓，栽植后用細噴霧器噴水，沖掉葉面上沾著的基質(zhì)，使根系與基質(zhì)密切接觸。10.4移栽后管理10.4.1穴盤苗培養(yǎng)穴盤苗培養(yǎng)的管理措施見附錄A。10.4.2缽苗培養(yǎng)組培苗在穴盤中生長30d后，根系與基質(zhì)已經(jīng)形成根團，即可移栽至可降解營養(yǎng)缽中。移栽時要求基質(zhì)不散落，移栽后及時澆水。每7d～10d噴布一次殺菌劑多抗霉素1000倍液、異菌多菌靈1500倍液（或惡霉靈1000倍液）、阿維菌素1500倍液～2000倍液，防治根腐病、灰霉病、紅蜘蛛。具體防治藥劑及配制方法見附錄B。10.5苗木出圃文冠果組培苗在營養(yǎng)缽中生長40d后，達到苗木等級Ⅰ、Ⅱ級，即成苗、出圃。詳見附錄C。11技術(shù)檔案按GB/T6001-1985要求，建立相應(yīng)育苗技術(shù)管理檔案。5DB21/T3859—2023文冠果穴盤苗培養(yǎng)的管理措施表A.1文冠果穴盤苗培養(yǎng)的管理措施20℃