DB37T 4436-2021 禽白血病病毒與禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒聯(lián)合凈化技術(shù)規(guī)程　　

37DB37/T4436—2021禽白血病病毒與禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒聯(lián)合凈化技術(shù)規(guī)程Technicalregulationsforeliminationofavianleukosisvirusandreticuloendotheliosisvirus2021-11-17發(fā)布2021-12-17實(shí)施山東省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定14禽白血病病毒與禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增殖病病毒實(shí)驗(yàn)室檢高溫高壓滅菌鍋(溫度范圍：105℃~134℃），4.2.8ALV-Agp85、ALV-Bgp85、ALV-Jgp8524.3.3蛋清樣品：將蛋殼滅菌后，用鑷子將種蛋鈍端敲破，使用移液器從破殼處沿蛋殼內(nèi)壁伸入蛋內(nèi)4.4.1操作方法：采用商品化的ELISA試劑盒檢測(cè)泄殖腔棉拭4.4.2結(jié)果判定：按試劑盒提供的算法判定。ALV4.5.1操作方法瓊脂糖凝膠電泳中出現(xiàn)ALV-A特異的1020bp片段、ALV-B特異的1038bp片段、ALV-J特異的545bp片段或REV特異的292bp的片段時(shí)，可判定病毒檢測(cè)陽(yáng)4.6.1操作方法3淘汰泄殖腔棉拭子ALV-p27與REV-p30均為陽(yáng)性或任一為陽(yáng)性的雞只；淘汰泄殖腔棉拭子ALV-REV-p30均為可疑或任一為可疑且RT-PCR為陽(yáng)性的雞只；淘汰泄殖腔棉拭子ALV-p27與REV-p30均為可疑5養(yǎng)禽場(chǎng)禽白血病與禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病聯(lián)合5.1.1操作方法：檢測(cè)應(yīng)從原種雞群開(kāi)始，收集雞群的種蛋，同一只種雞來(lái)源的種蛋放在一起，分群5.1.2注意事項(xiàng)：每個(gè)籠間不可直接接觸，包括避免直接氣流的對(duì)流。飼養(yǎng)期間要采取避免橫向傳播5.7.2第一次挑選公雞時(shí)，采集血漿進(jìn)行病毒分離檢測(cè)。在開(kāi)始供精之前，至少經(jīng)過(guò)病毒分離檢測(cè)一4場(chǎng)陽(yáng)性率低于1%；血清學(xué)抽檢，A/B亞群抗體和J亞群抗體（采用商品化的ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)），原種場(chǎng)全部為陰性，祖代場(chǎng)和父母代場(chǎng)陽(yáng)性率低于1%；連續(xù)兩年以上無(wú)臨床病例；即為達(dá)到禽白血病與檢測(cè)陽(yáng)性的雞和所有用畢的耗材見(jiàn)《病死及病害動(dòng)物無(wú)害化處理技術(shù)規(guī)范》（農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2017〕2555’-CGCGGATCCGATGTTCACTTACTCGAGC-3’禽白血病病毒Agp85基因片段糖凝膠電泳檢測(cè)5’-CGCTGCAGTCGTTTACGTCTTATACCTG-3’5’-CGCTGCAGGATGTCCACTTACTCGAGCA-3’禽白血病病毒Bgp85基因片段糖凝膠電泳檢測(cè)5’-CCGAAGCTTTCGTTTGCGTCTTATACCTG-3’5’-GGATGAGGTGACTAAGAAAG-3’禽白血病病毒Jgp85基因片段糖凝膠電泳檢測(cè)5’-CGAACCAAAGGTAACACACG-3’F:5'-CATACTGGAGCCAATGGgp90基因片段糖凝膠電泳檢測(cè)6(資料性)RT-PCR反應(yīng)條件RNAxμL(x=2000/RNA濃度),用RNaseFreeddH?O補(bǔ)足20μL,使用42條件進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。B.2PCR反應(yīng)體系為：反應(yīng)總體系為25μL,在PCR管中依次加入，2×TapPCRMasterMix12.5μL,10pmol/μL的上下游引物各0.5μL,模板cDNA1μL,其余用RNaseFreeddHO補(bǔ)至25μL。循環(huán)條件(ALV):95℃預(yù)變性5min,94℃變性30s,53℃退火30s,72℃延伸40s,進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，最后于72℃延伸10min。4℃保存。反應(yīng)后，PCR產(chǎn)物取7μL~8μL,在1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。圖B.1ALV-JPCR擴(kuò)增電泳結(jié)果循環(huán)條件(REV):95℃預(yù)變性5min,94℃變性30s,53℃退火30s,72℃延