2025年環(huán)境微生物實(shí)驗(yàn)技能與實(shí)踐研究報(bào)告

《環(huán)境工程微生物學(xué)》環(huán)境水樣微生物學(xué)指標(biāo)檢測(cè)班級(jí)：環(huán)境131班序言………………錯(cuò)誤!未定義書簽。試驗(yàn)?zāi)康暮鸵?guī)定………………錯(cuò)誤!未定義書簽。采樣安排………………………錯(cuò)誤!未定義書簽。醫(yī)學(xué)院采樣點(diǎn)分布圖……………………錯(cuò)誤!未定義書簽。西安工業(yè)大學(xué)采樣點(diǎn)分布圖……………錯(cuò)誤!未定義書簽。醫(yī)學(xué)院采樣過(guò)程照片……………………錯(cuò)誤!未定義書簽。西安工業(yè)大學(xué)采樣過(guò)程照片……………錯(cuò)誤!未定義書簽。采樣數(shù)據(jù)登記表…………錯(cuò)誤!未定義書簽。材料措施……………錯(cuò)誤!未定義書簽。試驗(yàn)所用重要儀器設(shè)備及試劑……………錯(cuò)誤!未定義書簽。儀器………………………錯(cuò)誤!未定義書簽。培養(yǎng)基…………………錯(cuò)誤!未定義書簽。試驗(yàn)原理與環(huán)節(jié)…………………錯(cuò)誤!未定義書簽。試驗(yàn)一…………錯(cuò)誤!未定義書簽。試驗(yàn)三…………錯(cuò)誤!未定義書簽。試驗(yàn)四…………錯(cuò)誤!未定義書簽。試驗(yàn)五…………錯(cuò)誤!未定義書簽。試驗(yàn)六…………錯(cuò)誤!未定義書簽。成果與分析…………錯(cuò)誤!未定義書簽。采樣記錄……………………錯(cuò)誤!未定義書簽。水樣總細(xì)菌群落測(cè)定…………錯(cuò)誤!未定義書簽。.大腸菌群檢查初發(fā)酵成果的觀測(cè)……………錯(cuò)誤!未定義書簽。平板分離及革蘭氏染色成果記錄…………錯(cuò)誤!未定義書簽。復(fù)發(fā)酵成果的觀測(cè)和大腸菌群數(shù)目的MPN記錄…………錯(cuò)誤!未定義書簽。大腸菌群數(shù)目的MPN記錄…………………錯(cuò)誤!未定義書簽。參照文獻(xiàn)……………錯(cuò)誤!未定義書簽。使用教材及參照書……………錯(cuò)誤!未定義書簽?！C合試驗(yàn)環(huán)境水樣微生物學(xué)指標(biāo)檢測(cè)微生物的分離、純化、觀測(cè)、描述，可初步進(jìn)行鑒定、分類(此步不作規(guī)定)?？烧J(rèn)為污水、垃圾等生●學(xué)習(xí)水樣的采樣措施，采用平板菌落計(jì)數(shù)技術(shù)測(cè)定水中細(xì)菌總數(shù)；采用多管發(fā)酵法(MPN)測(cè)定水●成果分析與討論，經(jīng)與國(guó)標(biāo)比對(duì)檢查，水質(zhì)狀況分析?！裾莆账屑?xì)菌總數(shù)測(cè)定措施；理解水質(zhì)與細(xì)菌菌落之間的有關(guān)性；●掌握測(cè)定水中大腸菌群數(shù)量的多管發(fā)酵法。1.培養(yǎng)基配制和滅菌2.無(wú)菌操作分離純化3.細(xì)菌染色和顯微鏡使用4.菌落特性觀測(cè)和描述5.系列稀釋措施6.細(xì)菌鑒定指標(biāo)測(cè)定時(shí)間：11月27日上午(一部分組員采樣，一部分組員準(zhǔn)備滅菌器具和配制培養(yǎng)基)環(huán)節(jié)和注意事項(xiàng)：未央校區(qū)首3.采樣時(shí)的照片記錄見(jiàn)成果與分析1顯微鏡2革蘭氏染色用有關(guān)器材。3高壓蒸汽滅菌器。4干熱滅菌箱。5恒溫箱。6冰箱。7放大鏡。8試管、平皿(直徑9cm)、刻度吸管等，置于干3伊紅美藍(lán)固體培養(yǎng)基0.5%美藍(lán)水溶液13ml時(shí)間：11月27日上午1.按照樣品采集表(表1)記錄樣點(diǎn)，編號(hào)，采樣時(shí)間，天氣，氣溫，水位，水質(zhì)，現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)測(cè)項(xiàng)目(pH),采樣人姓名。并畫出采樣湖的平面圖，圖上時(shí)間：11月29日9:00到12:00一.按照每組檢測(cè)兩個(gè)水樣準(zhǔn)備要進(jìn)行滅菌的玻璃器皿和試劑，包括：試管18支(水樣總菌落數(shù)測(cè)定中稀釋6個(gè)梯度需5支，兩個(gè)水樣一共10支；大腸菌群檢查初發(fā)酵試驗(yàn)發(fā)酵管需4支，兩個(gè)水樣一共8支);三角瓶2個(gè)(水樣總菌落數(shù)測(cè)定中初次稀釋需1個(gè)，兩個(gè)水樣共2個(gè));移液管10只(水樣總菌落數(shù)測(cè)定梯度稀釋需10ml一支，2ml的4支，兩個(gè)水樣共10支);培養(yǎng)皿12個(gè)(水樣總菌落數(shù)測(cè)定共涂板3個(gè)梯度，每個(gè)梯度2個(gè)板子，共6個(gè)，兩個(gè)水樣共12個(gè));a.供大腸菌群檢查之初發(fā)酵和復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)的一般乳糖蛋白胨培養(yǎng)液(每只試管5到10mL,一種水樣3管，兩個(gè)水樣共6管，加上復(fù)發(fā)酵需用的，至少準(zhǔn)備120mL,可以一次配制300mL,供2組使用);b.供大腸菌群檢查之初發(fā)酵試驗(yàn)的三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液(每只試管5到10mL,一種水樣1管，兩個(gè)水樣共2管至少準(zhǔn)備20mL,一種班配制200mL<老師指定人員配制>,供所有小組使用);c.供水樣總菌落數(shù)測(cè)定的蛋白胨固體培養(yǎng)基(每只培養(yǎng)皿25mL左右，12個(gè)培養(yǎng)皿300mL,每組至少配制300mL)將4支洗凈的杜氏小管裝入4個(gè)試管中，2個(gè)水樣共準(zhǔn)備8支裝有杜氏小管的試管，然后在其中的6支中灌入一般乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，2支灌入三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液(注意，將大試管傾斜45度左右氏小管中的空氣擠壓出去，若灌完培養(yǎng)液后仍有氣體存在，可以用指頭輕彈試管壁將之震出);4.滅菌水的準(zhǔn)備，每組至少準(zhǔn)備500mL純凈水進(jìn)行滅菌。1.將配制好的牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基和分裝好一般乳糖蛋白胨培養(yǎng)液和三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液滅菌完畢后，一部分人進(jìn)行水樣的梯度稀釋(注意，初次稀釋要進(jìn)行大體積稀釋，例如將20mL水樣加入180mL滅菌水中；每一步稀釋都必須保證將水樣混勻部分組員進(jìn)行牛肉膏蛋白胨平板的倒板工作(若選擇直接倒板法涂板的可不用進(jìn)行此部分);稀釋用的移液管要編號(hào)保留，背面涂LB平板的時(shí)候要對(duì)將10mL原始水樣加入到裝有三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的發(fā)酵管中，1mL原始水樣加入1支裝有一般乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的發(fā)酵管中；稀釋101和102的水樣分別加入裝有一般乳糖蛋白胨培養(yǎng)液發(fā)酵管中將接種完畢的發(fā)酵管放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h到48h.從103到10?稀釋梯度中選擇3個(gè)梯度的稀釋水樣進(jìn)行LB平板的涂板，措施可選用倒板法(在平板中加入1mL水樣后倒入20mLLB培養(yǎng)基(培養(yǎng)基溫度必須控制在40℃如下，倒板速度要快，防止倒板過(guò)程中LB固體培養(yǎng)基凝固)或涂板法(將1mL菌液加入到制好的LB平板上，再使用涂布器涂勻，涂布器每次使用前都要酒精燈干熱滅菌，冷卻后再涂板);涂制好的平板放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h到48h。時(shí)間：11月29日早上9:00到12:00(一部分組員進(jìn)行試驗(yàn)二的成果觀測(cè)和記錄，一部分組員進(jìn)行試驗(yàn)四的內(nèi)容，先制作伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基，清洗出計(jì)數(shù)后不用的培養(yǎng)皿(按照初發(fā)酵試驗(yàn)成果，有幾種陽(yáng)性成果準(zhǔn)備幾種培養(yǎng)皿)進(jìn)行包裹滅菌，和制備好的伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基一同滅菌)1.水樣總菌落數(shù)測(cè)定成果的觀測(cè)(記錄到表2中)①菌落計(jì)數(shù)：肉眼觀測(cè)，可用放大鏡，可標(biāo)識(shí)；a.某稀釋度的菌落數(shù)=兩平板菌落數(shù)取平均值。b.計(jì)數(shù)原則：選擇菌落數(shù)在30-300之間的稀釋度●僅有一種稀釋度在此范圍：總菌落數(shù)=菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)；●有兩個(gè)稀釋度在30-300之間，兩梯度菌落數(shù)之比(兩個(gè)稀釋梯度涂板后所長(zhǎng)的菌落數(shù)的比例)>2,選較小值作為菌落數(shù)進(jìn)行計(jì)算，菌落數(shù)之比<2,取平均值；●所有稀釋度均>300,取稀釋倍數(shù)最大者的菌落數(shù)進(jìn)行計(jì)算；●所有稀釋度均<30,取稀釋倍數(shù)最小者的菌落數(shù)進(jìn)行計(jì)算；●沒(méi)有任何稀釋度在30-300之間，選最靠近該范圍者；d.稀釋度選擇及細(xì)菌總數(shù)成果記錄2.大場(chǎng)菌群檢查初發(fā)酵成果的觀測(cè)按照表3進(jìn)行初發(fā)酵成果的記錄，產(chǎn)氣變色、產(chǎn)氣不變色、變色不產(chǎn)氣和不試驗(yàn)四時(shí)間：11月30日19:30到21:00按照書本上的方式配制伊紅美藍(lán)固體培養(yǎng)基，按照初發(fā)酵試驗(yàn)成果(有幾種陽(yáng)性成果準(zhǔn)備幾種培養(yǎng)皿)準(zhǔn)備所需培養(yǎng)基量(每個(gè)平板20-25mL);2.滅菌將準(zhǔn)備好的伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基以及倒平板所需的培養(yǎng)皿(按照初發(fā)酵陽(yáng)性成果數(shù)目進(jìn)行準(zhǔn)備);3.倒板將初發(fā)酵試驗(yàn)中陽(yáng)性管中的菌液稀釋一定倍后(菌液渾濁度大的稀釋倍數(shù)合適放大)吸取1mL稀釋菌液進(jìn)行涂板，或者直接使用接種環(huán)沾取初發(fā)酵陽(yáng)性菌液進(jìn)行平板劃線，劃線方式按圖1進(jìn)板放入37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h。試驗(yàn)五時(shí)間：12月2日10:00到12:00(一部分組員進(jìn)行試驗(yàn)四成果的觀測(cè)和記錄并進(jìn)行革蘭氏染色，另一部分組員進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)需用的一般乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的準(zhǔn)備<假如試驗(yàn)二中剩液沒(méi)有受污染則直接使用，準(zhǔn)備復(fù)發(fā)酵管，并進(jìn)行滅菌>,之后對(duì)滅菌后的復(fù)發(fā)酵管進(jìn)行接種)直接準(zhǔn)備4個(gè)裝有杜氏小管的發(fā)酵管，按照試驗(yàn)二的簡(jiǎn)介加入試驗(yàn)二時(shí)剩余的一般乳糖蛋白胨培養(yǎng)液(每管5或10mL,若剩余的培養(yǎng)基已經(jīng)受污染，則必須重新配制)。2.滅菌將環(huán)節(jié)1中準(zhǔn)備好的復(fù)發(fā)酵管進(jìn)行滅菌。3.平板分離試驗(yàn)成果觀測(cè)4.革蘭氏染色挑取環(huán)節(jié)3中的陽(yáng)性菌落的一小部分進(jìn)行革蘭氏染色(環(huán)節(jié)如下),記錄成果。a.用培養(yǎng)18～24h的培養(yǎng)物涂片，涂層要??；b.將涂片在火焰上加溫固定，待冷卻后滴加結(jié)晶紫溶液，1min后用水洗去；d.滴加脫色劑，搖動(dòng)玻片，直止無(wú)紫色脫落為止(約20～30s),用水洗去；e.滴加復(fù)染劑，Imin后用水洗去，晾干、鏡檢，呈紫色者為革蘭氏陽(yáng)性菌，呈紅色者為陰性菌。5.平板分離及革蘭氏染色成果記錄平板分離得到的陽(yáng)性菌落的對(duì)應(yīng)特性按照表4進(jìn)行記錄，并補(bǔ)充革蘭氏染色成果。6.復(fù)發(fā)酵管的接種使用接種環(huán)挑取環(huán)節(jié)4中革蘭氏染色陰性的菌落的另一部分，直接接種于復(fù)發(fā)酵管中，注意做好編號(hào)記錄，放入37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h。內(nèi)容安排：復(fù)發(fā)酵成果的觀測(cè)和大腸菌群數(shù)目的MPN記錄時(shí)間：12月4日8:00到10:00環(huán)節(jié)和注意事項(xiàng)：按照試驗(yàn)三中環(huán)節(jié)2的方式進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)成果(參照P418頁(yè)產(chǎn)酸產(chǎn)氣狀況分析)的記錄。2.大腸菌群數(shù)目的MPN記錄根據(jù)環(huán)節(jié)1的成果，根據(jù)附錄六表3(P450頁(yè)),匯報(bào)總大腸桿菌群數(shù)。表1水樣采集登記表(1)西安醫(yī)學(xué)院采樣登記表觀測(cè)項(xiàng)目水樣編號(hào)1水樣編號(hào)2水樣編號(hào)3采集時(shí)間采集時(shí)溫度采集地點(diǎn)ABC水體顏色淡黃色淡黃色淡黃色水體渾濁度輕度渾濁輕度渾濁輕度渾濁水體面積180平米180平米180平米水體漂浮物(有無(wú)大面積藻類)無(wú)無(wú)無(wú)水體周圍環(huán)境(人員流動(dòng)密度)較多較多較多(2)西安工業(yè)大學(xué)采樣登記表觀測(cè)項(xiàng)目水樣編號(hào)1水樣編號(hào)2水樣編號(hào)3采集時(shí)間采集時(shí)溫度666水體顏色水體渾濁度輕度渾濁輕度渾濁輕度渾濁水體漂浮物(有無(wú)大面積藻類)無(wú)無(wú)無(wú)水體周圍環(huán)境(人員流動(dòng)密度)稀少稀少稀少醫(yī)學(xué)院(稀釋濃度依次為10-2103104)平均稀稀菌菌比(個(gè)/g或個(gè)/ml)(個(gè)/g或個(gè)/ml)西安工業(yè)大學(xué)西安醫(yī)學(xué)院.大腸菌群檢查初發(fā)酵成果的觀測(cè)初發(fā)酵成果(照片)表3初發(fā)酵成果登記表1是是是2否否是3否否否陰性(2)西安工業(yè)大學(xué)2否否是3否否否陰性革蘭氏染色成果(照片)西安醫(yī)學(xué)院陽(yáng)性成果菌落號(hào)濕干菌落描述厚或薄大或小松或密大或小邊緣隆起形狀透明度正面背面水溶性色素透明，半透明所有的菌落厚小無(wú)無(wú)光滑屬光澤圓潤(rùn)圓或者形，突起狀深紫黑色深紫黑色無(wú)半透明菌落號(hào)濕干菌落描述厚或薄松或密邊緣隆起正面背面透明，不透明，半透明所有的菌落厚小