免疫學(xué)診斷與防治課件

22免疫學(xué)診斷免疫學(xué)診斷與防治22免疫學(xué)診斷目的要求（一）掌握抗原抗體反應(yīng)的原理；凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)與免疫標(biāo)記技術(shù)的原理和應(yīng)用。（二）熟悉淋巴細(xì)胞的分離與類型鑒定的方法；T細(xì)胞功能測定的方法,B細(xì)胞功能測定（三）了解吞噬細(xì)胞功能測定。22免疫學(xué)診斷免疫學(xué)診斷

免疫學(xué)檢測技術(shù)已成為當(dāng)今生命科學(xué)主要的研究手段之一，為基礎(chǔ)和臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展以及疾病的診斷、預(yù)后判斷、防治和藥物療效評價提供了重要的方法和手段。22免疫學(xué)診斷一、抗原或抗體的檢測（一）抗原抗體反應(yīng)的原理

抗原與抗體反應(yīng)的物質(zhì)基礎(chǔ)是抗原的抗原決定簇與抗體的可變區(qū)之間的相互結(jié)合。特異性22免疫學(xué)診斷

抗原與抗體反應(yīng)的體系中，若兩者的濃度和比例適當(dāng)，則形成的抗原抗體復(fù)合物體積大、數(shù)量多，出現(xiàn)肉眼可見的反應(yīng)。AbexcessAgexcessEquivalence–Latticeformation22免疫學(xué)診斷22免疫學(xué)診斷抗原抗體反應(yīng)的影響因素時間電解質(zhì)溫度酸堿度22免疫學(xué)診斷（二）抗原或抗體的檢測方法1、凝集反應(yīng)（agglutinationreaction）細(xì)菌、細(xì)胞等顆粒性抗原或表面包被有抗原的顆粒狀物質(zhì)（如聚苯乙烯乳膠等）與相應(yīng)的抗體在電解質(zhì)存在的條件下結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集團現(xiàn)象，稱為凝集反應(yīng)。

22免疫學(xué)診斷

直接凝集反應(yīng)直接凝集反應(yīng)(directagglutination)：

顆粒性抗原直接與抗體結(jié)合，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。

參與反應(yīng)的抗原稱為凝集原，相應(yīng)的抗體稱為凝集素。

22免疫學(xué)診斷22免疫學(xué)診斷

間接凝集反應(yīng)間接凝集反應(yīng)(indirectagglutination):

將可溶性抗原或抗體吸附于顆粒性載體表面，然后與相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象.22免疫學(xué)診斷載體可溶性抗原致敏致敏顆粒凝集顆粒

間接凝集試驗示意圖22免疫學(xué)診斷間接凝集抑制試驗22免疫學(xué)診斷免疫妊娠試驗（1）22免疫學(xué)診斷免疫妊娠試驗（2）22免疫學(xué)診斷2、沉淀反應(yīng)（Precipitationreaction）毒素、組織浸液及血清中的蛋白等可溶性抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)后，出現(xiàn)肉眼可見的沉淀物，稱為沉淀反應(yīng)。沉淀反應(yīng)可在液體中進(jìn)行，也可以在半固體瓊脂凝膠中進(jìn)行。22免疫學(xué)診斷沉淀反應(yīng)包括：

單向免疫擴散雙向免疫擴散免疫電泳免疫比濁22免疫學(xué)診斷22免疫學(xué)診斷22免疫學(xué)診斷22免疫學(xué)診斷3、免疫標(biāo)記技術(shù)（immunolabelingtechniques）為了提高單純的抗原和抗體檢測的靈敏性，將已知的抗體或抗原標(biāo)記上示蹤物質(zhì)，通過檢測標(biāo)記物，間接測定抗原抗體復(fù)合物。常用的標(biāo)記物有酶、熒光素、放射性核素、膠體金及化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等。22免疫學(xué)診斷標(biāo)記物熒光素酶放射性核素免疫熒光法酶免疫測定（EIA)放射免疫測定（RIA)化學(xué)發(fā)光物質(zhì)化學(xué)發(fā)光分析22免疫學(xué)診斷免疫酶測定法（enzymeimmunoassay,EIA）

應(yīng)用最廣泛的方法是酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA）22免疫學(xué)診斷間接法：檢測抗體包被Ag加入待檢Ab加入酶標(biāo)二抗加入底物顯色夾心法：檢測抗原包被Ab加入待檢Ag加入酶標(biāo)二抗加入底物顯色22免疫學(xué)診斷1.Addantigen5.Addsubstrateforenzyme2.Wash,blockthewells.WashwithPBST3.AddfivesamplesWashwithPBST4.AddlabeledantibodyObservecolourdevelopmentWashwithPBSTstop22免疫學(xué)診斷免疫熒光技術(shù)熒光素標(biāo)記的抗體（抗原）與組織或細(xì)胞中的相應(yīng)抗原（抗體）結(jié)合，借助于熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀對抗原（抗體）進(jìn)行鑒定或定位。直接免疫熒光法間接免疫熒光法22免疫學(xué)診斷22免疫學(xué)診斷22免疫學(xué)診斷二、免疫細(xì)胞功能的檢測（一）免疫細(xì)胞的分離根據(jù)細(xì)胞的密度、粘附性能、表面標(biāo)志等，采用不同方法分離外周血單個核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及不同亞群。22免疫學(xué)診斷密度梯度離心法:

用淋巴細(xì)胞分層液(葡聚糖-泛影葡胺)除去紅細(xì)胞、粒細(xì)胞,所獲細(xì)胞稱外周血單個核細(xì)胞(PBMC)的方法，其中淋巴細(xì)胞>90%。

22免疫學(xué)診斷

免疫吸附分離法

磁珠分離法流式細(xì)胞術(shù)等等22免疫學(xué)診斷（二）免疫細(xì)胞功能的測定

T細(xì)胞功能測定

1、T細(xì)胞增殖試驗

T細(xì)胞表面含有有絲分裂原受體,能接受植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA）或美州商陸（PWM）等有絲分裂原的刺激，轉(zhuǎn)化成為淋巴母細(xì)胞。（1）3H-TdR摻入法（2）51Cr釋放法22免疫學(xué)診斷培養(yǎng)液3H-TdRPHA淋巴細(xì)胞全血分層液離心過濾測量放射性淋巴細(xì)胞增殖試驗（3H-TdR摻入法）示意圖22免疫學(xué)診斷靶細(xì)胞51Cr洗滌去除游離的51Cr效應(yīng)細(xì)胞測量上清液中釋放的51Cr混合培養(yǎng)4-6小時細(xì)胞毒試驗（51Cr釋放法）示意圖22免疫學(xué)診斷2、E花環(huán)形成試驗（ERosetteTest）

T細(xì)胞CD2/E受體SRBC/綿羊紅細(xì)胞

可用于鑒定人外周血中的T細(xì)胞并計數(shù)。22免疫學(xué)診斷酶聯(lián)免疫斑點法

（Enzyme-LinkedImmunospot,ELISPOT)是在ELISA的基礎(chǔ)上建立的檢測抗體生成細(xì)胞及細(xì)胞因子產(chǎn)生細(xì)胞的方法。22免疫學(xué)診斷CK抗體包被的反應(yīng)板

CK抗原包被的反應(yīng)板加入淋巴細(xì)胞加入酶標(biāo)記二抗加入底物檢測抗原特異性B細(xì)胞加入底物T細(xì)胞產(chǎn)生CK的檢測加入淋巴細(xì)胞加入酶標(biāo)的CK抗體22免疫學(xué)診斷淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗（形態(tài)學(xué)示意圖）原理：人T細(xì)胞表面有PHA或ConA受體，T細(xì)胞在體外受PHA或ConA的刺激后能轉(zhuǎn)化為體積較大、代謝旺盛、且能進(jìn)行分裂的淋巴細(xì)胞，以此測