輸血相容性檢測操作規(guī)程

輸血相容性檢測操作規(guī)程1目的規(guī)范輸血相容性檢測，保證輸血相容性檢測質(zhì)量，保障臨床輸血安全。2職責(zé)輸血科崗位人員負(fù)責(zé)輸血相容性檢測全過程。3適用范圍適用于輸血科血相容性檢測。4生物安全要求輸血相容性檢測，存在潛在的生物傳染性物質(zhì)為人體血液污染物和損傷性廢棄物。所有上述生物傳染性物質(zhì)的操作過程必須遵守如下規(guī)定：被血液污染的物品必須放入醫(yī)療專用垃圾袋，損傷性廢棄物放入利器盒。5設(shè)備和材料5.1標(biāo)本5.2試劑：抗-A、抗-B血型定型試劑、RhD血型定型試劑、2-5%A、B、O標(biāo)準(zhǔn)試劑紅細(xì)胞、標(biāo)準(zhǔn)I、Ⅱ、Ⅲ號不規(guī)則抗體篩選紅細(xì)胞、凝聚胺(低離子強(qiáng)度溶液(LIM)、凝聚胺溶液、懸浮液)、生理鹽水等。5.3設(shè)備：輸血科(血庫)血型血清學(xué)專用離心機(jī)、標(biāo)本離心機(jī)、顯微鏡、試管架等。5.4耗材：清潔干燥一次性塑料試管(5ml)、清潔干燥一次性塑料吸管(1ml)、清潔干燥載玻片、速干手消毒液/消毒紙巾、污物桶、利器盒、醫(yī)療廢棄物專用袋、醫(yī)療廢棄物處置標(biāo)簽、一次性橡膠手套、干凈工作服、口罩等。6環(huán)境輸血相容性檢測環(huán)境要求寬敞明亮、干燥通風(fēng)、安全衛(wèi)生、整潔有序。7操作步驟7.1ABO血型鑒定操作規(guī)程7.1.1方法：試管法。7.1.2原理：根據(jù)紅細(xì)胞上有或無A抗原和B抗原，將血型分為A型、B型、AB型及○型4種。利用紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)，通過正、反定型準(zhǔn)確鑒定ABO血型。正定型就是用已知抗-A和抗-B血型抗體來測定紅細(xì)胞A抗原或/和B抗原；反定型就是用已知A紅細(xì)胞和B紅細(xì)胞來測定血清/血漿中有無相應(yīng)的抗-A或/和抗-B。7.1.3標(biāo)本種類：受檢者血清/血漿、2-5%受檢者紅細(xì)胞鹽水懸液。7.1.4試劑及器材：抗-A、抗-B血型抗體；2-5%A、B、0標(biāo)準(zhǔn)試劑紅細(xì)胞；生理鹽水；試管架；清潔干燥試管；清潔干燥吸管；清潔干燥載玻片；生物顯微鏡；血庫專用離心機(jī)。7.1.5操作步驟7.1.5.1檢查所用試劑的批號、外觀、有效期及相應(yīng)的器材。7.1.5.2檢查標(biāo)本的狀態(tài)和類型。7.1.5.3加樣：1）正定型：取潔凈小試管2支，分別標(biāo)明抗-A、抗-B。血型抗體各1滴于試管底部，再以滴管分別加入受檢者2-5%紅細(xì)胞懸液1滴，混勻。2）反定型：另取潔凈小試管3支，分別標(biāo)明A、B、O細(xì)胞。用滴管分別加入受檢者血清/血漿2滴于試管底部，再分別加入2-5%A、B、O試劑紅細(xì)胞1滴。7.1.5.4離心：立即以1000×g離心15秒。7.1.5.5觀察結(jié)果：檢查是否有溶血，再將試管輕輕搖動，使沉于試管底的紅細(xì)胞浮起，先以肉眼觀察有無凝集。如肉眼未見凝集或溶血，應(yīng)再以低倍鏡觀察有無凝集。7.1.5.6ABO血型結(jié)果判讀。ABO血型正反定型結(jié)果正定型反定型血型抗體+受檢者紅細(xì)胞受檢者血清/血漿+試劑紅細(xì)胞受檢者血型抗-A抗-BA細(xì)胞]B細(xì)胞0細(xì)胞+一—+—A++—B —++ O++— —AB注：“+”=凝集；“-”=不凝集7.1.6注意事項(xiàng)：7.1.6.1試管、滴管保持干燥，以免溶血。7.1.6.2離心時間不宜過長或過短、速度不宜過快過慢，以防假陽性和假陰性。7.1.7備注：凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)1）4+:紅細(xì)胞凝集成一大塊，血清清晰透明。2）3+:紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。3）2+:紅細(xì)胞凝塊分散成許多小塊，周圍可見到游離紅細(xì)胞。4）1+:肉眼可見大顆粒，周圍有較多游離紅細(xì)胞?！?鏡下可見數(shù)個紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細(xì)胞。6）-:鏡下未見紅細(xì)胞凝集，紅細(xì)胞均勻分布。7）MF:即混合凝集外觀，是指鏡下可見少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而絕大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布。7.2Rh(D)血型鑒定操作規(guī)程7.2.1方法：試管法。7.2.2原理：根據(jù)Rh(D)血型定型試劑與對應(yīng)紅細(xì)胞上的抗原凝集反應(yīng)，區(qū)分Rh(D)陽性、陰性。7.2.3標(biāo)本種類：2-5%紅細(xì)胞懸液。7.2.4試劑及器材：IgM單克隆抗D試劑，效價≥64(ccDee);生理鹽水。試管架；清潔干燥試管；清潔干燥吸管；清潔干燥載玻片；生物顯微鏡；血庫專用離心機(jī)。7.2.5操作步驟：7.2.5.1檢查所用試劑的批號、外觀、有效期及相應(yīng)的器材。7.2.5.2檢查標(biāo)本的狀態(tài)和類型。7.2.5.3加樣：標(biāo)記試管1支，加抗D試劑1滴，再加受檢者2-5%紅細(xì)胞懸液1滴，混勻。7.2.5.41000×g離心15秒，輕輕搖動試管，觀察結(jié)果。7.2.5.5檢查是否有溶血(溶血可能是陽性結(jié)果，或者是細(xì)菌污染),然后輕輕搖晃使紅細(xì)胞再懸浮起來，觀察凝集的狀況，并立即記錄結(jié)果，必要時可借助顯微鏡。7.2.5.6若是陰性結(jié)果，需37℃孵育15分鐘左右，然后再離心觀察結(jié)果。7.2.6結(jié)果判讀：7.2.6.1陽性反應(yīng)：出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集，為Rh(D)陽性。7.2.6.2陰性反應(yīng)：紅細(xì)胞不出現(xiàn)凝集，為Rh(D)陰性。7.2.7備注：凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)1）4+:紅細(xì)胞凝集成一大塊，血清清晰透明。2）3+:紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。3）2+:紅細(xì)胞凝塊分散成許多小塊，周圍可見到游離紅細(xì)胞。4）1+:肉眼可見大顆粒，周圍有較多游離紅細(xì)胞。5）±:鏡下可見數(shù)個紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細(xì)胞。-:鏡下未見紅細(xì)胞凝集，紅細(xì)胞均勻分布。6）MF:即混合凝集外觀，是指鏡下可見少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而絕大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布。7.3鹽水+凝聚胺介質(zhì)法篩選不規(guī)則抗體操作規(guī)程7.3.1方法：試管法。7.3.2原理：由于輸血或妊娠等外源性抗原的同種免疫作用，使機(jī)體對外源性抗原產(chǎn)生同種免疫抗體，當(dāng)再次輸入相應(yīng)抗原時就會產(chǎn)生抗原抗體反應(yīng)。應(yīng)用特定的抗體篩選紅細(xì)胞(I、Ⅱ、Ⅲ號),與受檢者血清/血漿在二種介質(zhì)(鹽水、凝聚胺)中反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)結(jié)果判斷機(jī)體所產(chǎn)生的同種抗體類別(IgM、IgG)。7.3.3標(biāo)本種類：血清或血漿。7.3.4試劑及器材：特定的I、Ⅱ、Ⅲ號2-5%篩選紅細(xì)胞；低離子強(qiáng)度溶液(LIM)、凝聚胺溶液、懸浮液；生理鹽水。試管架；清潔干燥試管；清潔干燥吸管；清潔干燥載玻片；生物顯微鏡；血庫專用離心機(jī)。7.3.5操作步驟：7.3.5.1檢查所用試劑的批號、外觀、有效期及相應(yīng)的器材。7.3.5.2檢查標(biāo)本的狀態(tài)。鹽水法：7.3.5.3取潔凈試管3支，分別標(biāo)明I、Ⅱ、Ⅲ,用滴管分別加入受檢者血清/血漿2滴。7.3.5.4再對應(yīng)加入2-5%I、Ⅱ、Ⅲ號抗體篩選細(xì)胞1滴，混勻。7.3.5.51000×g離心15秒或按試劑說明書操作，察看上清液有無溶血，輕輕搖動試管，肉眼觀察有無凝集結(jié)果，記錄鹽水介質(zhì)反應(yīng)情況。肉眼觀察無凝集，用滴管吸取管內(nèi)懸液少許于玻片上，在顯微鏡下察看有無凝集現(xiàn)象。凝聚胺法：7.3.5.6取潔凈試管3支，按照鹽水法的操作滴加受檢者血清/血漿、抗體篩選細(xì)胞，各管加低離子溶液(LIM)0.65ml,混勻，再各加凝聚胺溶液2滴，混勻。7.3.5.71000×g離心15秒或按試劑說明書操作，倒掉上清液，讓管底殘留約0.1ml液體，輕輕搖動試管，目測紅細(xì)胞有無凝集，如無凝集，必須重做。7.3.5.8最后各加2滴懸浮液，輕輕搖動試管混合，同時肉眼觀察結(jié)果。7.3.5.9如果60秒內(nèi)凝集散開，再進(jìn)一步用顯微鏡觀察有無凝集，鏡下無凝集紅細(xì)胞則為凝聚胺引起的非特異性凝集，不規(guī)則抗體篩選結(jié)果陰性；60秒內(nèi)凝集不散開