T-CI 390-2024 健康人（異體）免疫細(xì)胞（CIK）的制備技術(shù)和應(yīng)用規(guī)

CCSC272024-06-24發(fā)布IT/CI390－2024 Ⅲ健康人（異體）免疫細(xì)胞（CIK）的制備技術(shù)和應(yīng)用規(guī)程 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語(yǔ)和定義 4儀器設(shè)備條件和細(xì)胞培養(yǎng)器材 5溶液配制和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù) 6CIK細(xì)胞制備規(guī)程 7質(zhì)量檢測(cè)和標(biāo)準(zhǔn) 8檢驗(yàn)與放行 9標(biāo)注，運(yùn)輸與追蹤 610CIK細(xì)胞臨床治療方案和療效評(píng)價(jià) 6 912參考文獻(xiàn) 11T/CI390－2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由澳科大生命科技集團(tuán)有限公司提出。本文件由中國(guó)國(guó)際科技促進(jìn)會(huì)歸口。本文件起草單位:澳科大生命科技集團(tuán)有限公司、廣州市坤圣生物科技有限公司、南方醫(yī)科大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院、廣州市番禺區(qū)化龍醫(yī)院、廣州中醫(yī)藥大學(xué)金沙洲醫(yī)院、青島瑞思德生物科技有限公司、青島瑞思德醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室有限公司。本文件主要起草人員：祁巖超、張衛(wèi)東、祁秋干、紀(jì)娜、王遠(yuǎn)東、史強(qiáng)、楊高遠(yuǎn)、段紅偉、周晶、陳夢(mèng)夢(mèng)、張炳強(qiáng)。本文件是首次發(fā)布。T/CI390－2024本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)對(duì)于該專利的真實(shí)性、有效性和范圍無(wú)任何立場(chǎng)。該專利持有人已向本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)保證，他愿意同任何申請(qǐng)人在合理且無(wú)歧視的條款和條件下，就專利授權(quán)許可進(jìn)行談判。該專利持有人的聲明已在本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)備案。相關(guān)信息可以通過(guò)以下聯(lián)系方式獲得：專利持有人姓名：廣州市坤圣生物科技有限公司地址：廣州市黃埔區(qū)廣州國(guó)際生物島寰宇一路27號(hào)云潤(rùn)大廈703室聯(lián)系人：祁巖超電話箱：ycqi@163.net請(qǐng)注意除上述專利外，本文件的某些內(nèi)容仍可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。1T/CI390—2024健康人（異體）免疫細(xì)胞（CIK）的制備技術(shù)和應(yīng)用規(guī)程本文件規(guī)定了CIK免疫細(xì)胞的制備技術(shù)規(guī)程。本文件適用于人免疫細(xì)胞的生產(chǎn)、運(yùn)輸、存放。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。YY0572-2015《血液透析及相關(guān)治療用水》YY0598-2006《血液透析及相關(guān)治療用濃縮物》T/CGCPU019—2022《免疫細(xì)胞產(chǎn)品供者材料管理要求》3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1免疫細(xì)胞產(chǎn)品immunecellproducts經(jīng)過(guò)體外分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增后制成的人源活免疫細(xì)胞3.2供者donor用于免疫細(xì)胞產(chǎn)品（3.1）采集、制備的細(xì)胞的來(lái)源是人3.3供者材料suppliermaterials從供者外周血，臍帶血獲得的用于免疫細(xì)胞產(chǎn)品生產(chǎn)的免疫細(xì)胞。3.4生物安全biosafety細(xì)胞的采集和制備處于沒(méi)有危險(xiǎn)和不受生物因子及相關(guān)因素威脅的狀態(tài).2T/CI390—20244儀器設(shè)備條件和細(xì)胞培養(yǎng)器材4.1儀器設(shè)備條件4.1.1場(chǎng)地條件：（1）GMP千級(jí)凈化室（百級(jí)超凈工作單元）100-300M2，（2）普通實(shí)驗(yàn)室（質(zhì)量檢測(cè)）50-100M2，（3）洗涮、準(zhǔn)備間200-500M24.1.2大型設(shè)備：（1）血細(xì)胞分離機(jī)（單采機(jī)）（2）流式細(xì)胞儀（3）酶標(biāo)分析儀（4）內(nèi)毒素檢測(cè)儀（5）常速，超速離心機(jī)（6）常溫，低溫冰箱（柜）（7）圖像儀器，倒置顯微鏡4.2細(xì)胞培養(yǎng)器材4.2.1清洗與消毒玻璃器皿的清洗清水浸泡——洗衣粉刷洗——自來(lái)水沖洗——晾干，浸酸過(guò)夜——自來(lái)水沖洗10次以上——蒸餾水洗2-3次——烘干，包裝——滅菌，貯存?zhèn)溆?。培養(yǎng)板和培養(yǎng)瓶用符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的商售一次性使用培養(yǎng)瓶，袋物品。載玻片用一次性使用的物品。膠塞的清洗。自來(lái)水浸泡——2%NAOH煮沸10~20分鐘——自來(lái)水沖洗——1%稀HCL浸泡30分鐘——自來(lái)水沖洗——蒸餾水沖洗2~3次——晾干，備用。4.3滅菌4.3.1使用前，先檢查高壓滅菌器主體內(nèi)水位是否超過(guò)電熱管。4.3.2在加熱開始時(shí)，放氣閥垂直，使空氣隨加熱由桶內(nèi)逸出。待有較急的蒸汽噴出時(shí)，即將放氣閥撥回水平位置。4.3.3瓶皿121-126℃15MIN;器械121-126℃10MIN;橡膠121℃15MIN;溶液121-126℃20-40MIN4.3.4當(dāng)壓力到達(dá)所需的范圍時(shí)，開始計(jì)算時(shí)間。124-126℃滅菌時(shí)，安全閥能使之維持恒壓；低于124℃時(shí)，則應(yīng)在蒸汽壓力到達(dá)所需范圍時(shí)，適當(dāng)調(diào)節(jié)開關(guān)使之維持恒壓。3T/CI390—20244.3.5滅菌完，要迅速使之干燥者，將滅菌器內(nèi)的蒸汽通過(guò)放氣閥迅速排出。等壓力為0時(shí)，再稍等1-2分鐘，然后將蓋打開，繼續(xù)加熱10-15分鐘，使物品上殘留的水蒸汽得到蒸發(fā)，隨后關(guān)掉；滅菌液體時(shí)，應(yīng)將液體灌裝在玻璃瓶中，以不超過(guò)3/4體積為好，瓶口用棉花紗布塞好，并用繩子扎在瓶頸上，使瓶?jī)?nèi)的空氣能自然泄出，而又不致使瓶塞落入瓶?jī)?nèi)。滅菌完，先關(guān)電源，等壓力為0時(shí)，再稍等幾分鐘，打開放氣閥，排出余氣后，才能將蓋開啟。5細(xì)胞培養(yǎng)操作技術(shù)5.1洗液的配制重鉻酸鉀先溶于水中，然后，將濃硫酸緩慢加入。[強(qiáng)液]重鉻酸鉀63G，濃硫酸1000ML，蒸餾水200ML「常用」重鉻酸鉀63G溶于800ML蒸餾水,再緩慢加入濃硫酸1000ML.「本室」重鉻酸鉀120G：濃硫酸200ML：蒸餾水1000ML5.2細(xì)胞培養(yǎng)液5.2.1商售一次性應(yīng)用的完全培養(yǎng)液：1640完全培養(yǎng)液。5.2.2配置：1640干粉（1）把干粉加入15-30℃（室溫）三蒸水中，緩慢攪拌令之溶解，并將袋中微量粉末沖下。（2）加NAHCO32.0G/L1640培養(yǎng)液或3.7G/LDMEM培養(yǎng)液。稀釋至1L。（3）用1NHCL或1NNAOH將PH調(diào)低于正常PH*7.2—7.3。（在正常情況下，培養(yǎng)液PH介于7.2-7.4間，呈桃紅色。（4）立即除菌過(guò)濾，用0.22UM除菌濾膜的濾器負(fù)壓抽濾（5）分裝，放置4℃條件下保存，備用5.3消化液的配制（0.25%胰蛋白酶）（1）將PH7.2的PBS液高壓消毒滅菌。（2）稱取胰蛋白酶粉末0.25G，先用少許消毒的鹽溶液調(diào)成糊狀，然后再補(bǔ)足鹽溶液，攪拌混勻，置室溫4小時(shí)或冰箱內(nèi)過(guò)夜，并不時(shí)攪拌振蕩。(3).除菌過(guò)濾，分裝入瓶，-20℃冰箱保存。5.4BSS的配制(PBS克/升）（1）準(zhǔn)確稱量試劑。(含有水份的水化物，與不含水份者的稱量不同，應(yīng)加以換算)。KCL0.2，KH2PO40.2，NACL8.0，NA2HPO4·7H2O.56。（2）依次溶解在750ML水中，待前一種試劑完全溶解后，再溶解下一種成分。（3）補(bǔ)足水分至1000ML。除菌過(guò)濾或高壓滅菌10MIN，分裝瓶中，4℃保存。5.5細(xì)胞培養(yǎng)操作程序5.5.1細(xì)胞計(jì)數(shù)法（1）懸液制備：取待測(cè)細(xì)胞，向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加1ML0.25%胰蛋白酶液，37℃溫箱中消化，至細(xì)胞接近脫離瓶壁前吸出消化液，加新的培養(yǎng)液5.0ML，輕輕吹打制備成細(xì)胞懸液。4T/CI390—2024（2）染色：取吸管1支，伸入培養(yǎng)瓶中，輕輕反復(fù)吹打細(xì)胞懸液使細(xì)胞重懸均勻后，立即吸細(xì)胞懸液少許，向離心管中滴入9滴，再滴入0.4%的臺(tái)盤藍(lán)染料1滴，混勻，置2-3MIN。（3）鏡檢：把計(jì)數(shù)板平放在顯微鏡臺(tái)上，從邊緣滴1-2滴已染色的細(xì)胞懸液。鏡下觀察可見(jiàn)細(xì)胞分散各處，健康細(xì)胞胞體完整，透明不著色，凡著色細(xì)胞均為不健康者。（4）細(xì)胞活度：每100個(gè)細(xì)胞減去著色細(xì)胞數(shù)，如有5個(gè)著色細(xì)胞，活度為95%。（5）細(xì)胞計(jì)數(shù)：細(xì)胞數(shù)/懸液=（4大格細(xì)胞總數(shù)/4）*104*毫升數(shù).（6）接種：一般接種量在105-106細(xì)胞/ML范圍.5.5.2細(xì)胞傳代（1）將瓶中的培養(yǎng)液倒出，鏡檢，離心重懸細(xì)胞，用吸管將瓶壁上的細(xì)胞吹打均勻。（2）培養(yǎng)中的細(xì)胞分瓶，并加入培養(yǎng)液8-10ML，置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（3）懸浮細(xì)胞傳代時(shí)，只需吸出少量細(xì)胞轉(zhuǎn)入新瓶，并補(bǔ)足營(yíng)養(yǎng)液即可。6CIK細(xì)胞制備規(guī)程6.1制備程序6.1.1包被培養(yǎng)瓶（1）取50ML離心管，分別移入10MLD-PBS。（2）每管加入專用試劑若干，CD3AB50ΜL，混勻后移入75CM2培養(yǎng)瓶，標(biāo)記。（3）將培養(yǎng)瓶平放在4℃冰箱內(nèi)，避光過(guò)夜。6.1.2分離培養(yǎng)PBMC(1)單采機(jī)采取分離出相應(yīng)數(shù)量單個(gè)核細(xì)胞。(2)取上述單核細(xì)胞液50ML，平均移入兩個(gè)50ML離心管中，加入全血體積20%（每管5ML的羥乙基淀粉，垂直靜置30-60分鐘。（一般降到1/2體積）(3)將兩管中的上層（血漿+淋巴細(xì)胞）移入新的離心管，350G/10MIN離心,(4)取上清（血漿）移入新的離心管，56℃水浴/30MIN滅活。(5)水浴滅活后的血漿，室溫800G/20MIN離心，取上清（即自體血漿）留用。(6)取10MLFICOLL移入新的50ML離心管(7)細(xì)胞沉淀用20MLD-PBS重懸，細(xì)胞懸液緩慢加入FICOLL層，室溫380G/20MIN離心,(8)吸取PBMC層，加D-PBS至40ML洗滌，室溫350G/8MIN離心(8)棄上清，細(xì)胞沉淀加培養(yǎng)基至40ML洗滌，取樣計(jì)數(shù)，室溫，300G/8MIN離心(9)計(jì)數(shù)細(xì)胞，測(cè)定細(xì)胞活度,>95%(10)取包被的培養(yǎng)瓶，棄包被液，用D-PBS和培養(yǎng)基分別洗一次(11)調(diào)制細(xì)胞懸液，分別加入培養(yǎng)瓶。接種細(xì)胞數(shù)3×107(106/ML)/30ML/瓶,(12)每瓶加入IL-230ΜL（1000U/ΜL），IFN-Γ15ΜL(1000U/ML)，自體血漿1.5ML(即血漿濃度為5%)。顯微觀察，置于5%CO2，37℃培養(yǎng),(13)顯微觀察細(xì)胞狀態(tài)，理論上，若第2天細(xì)胞狀態(tài)好，可不加血漿，并且轉(zhuǎn)袋前盡量減少移動(dòng)細(xì)胞，使細(xì)胞與包被液試劑充分接觸。6.1.3細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)袋5T/CI390—2024（1）在接種的4天，用巴氏吸管吹打貼附在培養(yǎng)瓶上的細(xì)胞，細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至50ML離心管中，取樣計(jì)數(shù)。（2）吹打后，顯微鏡下觀察貼壁細(xì)胞情況，如仍較多，每培養(yǎng)瓶加入5—10ML培養(yǎng)液繼續(xù)吹打。（此時(shí)細(xì)胞一般不用酶來(lái)消化，以免損傷細(xì)胞）。（3）計(jì)數(shù)細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞活度，殺傷活性，流式細(xì)胞儀測(cè)定等。（4）分離細(xì)胞通過(guò)注射器套筒轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)袋，培養(yǎng)液調(diào)至200ML（1×105/ML添加IL-2100ΜL，自體血漿6MLIL-2為500U/ML，補(bǔ)救措施為將血漿含量提高到3%，細(xì)胞濃度一般不可低于0.4×105/ML）。（5）每天顯微觀察細(xì)胞狀態(tài)。（6）隔天等量添加培養(yǎng)液并取樣計(jì)數(shù)細(xì)胞等。同時(shí)添加IL-2,500U/ML，自體血漿1%及8萬(wàn)U/2ML慶大霉素一支所加培養(yǎng)液已加入白蛋白，含量為0.3%，即1000ML培養(yǎng)液加入20%白蛋白15ML）。6.2回收細(xì)胞（1）在培養(yǎng)袋三次加液后（分離接種細(xì)胞的第12天），袋中培養(yǎng)液體積為1200-1800ML(初轉(zhuǎn)袋時(shí)150或200ML),收集細(xì)胞，（2）用50ML離心管分離細(xì)胞，D-PBS洗滌2次，取樣進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)。7質(zhì)量檢測(cè)和標(biāo)準(zhǔn)7.1顯微觀察細(xì)胞狀態(tài)，取樣計(jì)數(shù)（1）肉眼觀察，培養(yǎng)袋或培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液清澈，無(wú)混濁。（2）顯微觀察細(xì)胞狀態(tài)良好，大小基本均勻，反光度好，如有集落形成，證明生長(zhǎng)良好。取樣計(jì)數(shù)備用。7.2細(xì)胞活度：“臺(tái)盼蘭拒染細(xì)胞活度鑒定法”，細(xì)胞活度達(dá)90%以上為合格。7.3殺傷活性：效應(yīng)細(xì)胞為CIK細(xì)胞，靶細(xì)胞為K562細(xì)胞。效：靶=20:1,殺傷活性達(dá)80%以上為合格。7.4流式細(xì)胞儀檢測(cè)CIK細(xì)胞表型：CD3CD56雙陽(yáng)性細(xì)胞達(dá)20%或以上為合格。CD3CD4/CD8雙陽(yáng)性細(xì)胞在50%以上。具體方法見(jiàn)：流式細(xì)胞儀檢測(cè)CIK細(xì)胞表型具體方法介紹。7.5安全檢測(cè)：熱源，病毒,支原體，細(xì)菌（霉菌）檢測(cè)合格。7.5.1熱源檢測(cè)-定性檢測(cè)法：取CIK細(xì)胞培養(yǎng)上清液用鱟試劑凝膠法檢測(cè)：結(jié)果陰性（-）為合格。注：原理:熱源又叫內(nèi)毒素，是革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁組成部分。醫(yī)學(xué)工業(yè)普遍接受的觀點(diǎn)---控制內(nèi)毒素污染，就等于控制了熱源（細(xì)菌）污染。鱟試劑內(nèi)含有被微量?jī)?nèi)毒素激活的凝固酶可和鱟試劑產(chǎn)生凝集反應(yīng)形成凝膠。據(jù)此可判斷熱源（細(xì)菌）污染與否。7.5.2熱源檢測(cè)-定量檢測(cè)法：檢測(cè)流程儀器及軟件準(zhǔn)備：試驗(yàn)前開啟動(dòng)態(tài)試管檢測(cè)儀，溫度在37OC.(1)樣品陽(yáng)性對(duì)照液制備，每個(gè)樣品取已制備的樣品溶液0.4ML加入到細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品中，放置漩渦混合器上混合1MIN,得到樣品陽(yáng)性對(duì)照液。(2)樣品溶液制備：用配套的采樣瓶采集樣品，每種樣品分別取0.1ML加入到0.9ML樣品稀釋瓶里，混勻，即得樣品溶液。,6T/CI390—2024(3).鱟試劑復(fù)溶:開啟鱟試劑和試劑復(fù)溶液，取0.25ML試劑復(fù)溶液加入鱟試劑瓶中，搖勻，放置1MIN,得鱟試劑溶液，取若干反應(yīng)試管，每管加0.05ML鱟試劑。(4)加樣及反應(yīng)：陰性對(duì)照項(xiàng)：取0.1ML樣品稀釋瓶中的溶液加入到0.05ML鱟試劑溶液的反應(yīng)試管，平行兩管，輕輕混勻立即插入動(dòng)態(tài)試管儀中反應(yīng)。(5)陽(yáng)性對(duì)照項(xiàng)：取0.1ML陽(yáng)性對(duì)照液加入到0.05ML鱟試劑溶液的反應(yīng)試管，平行兩管，輕輕混勻立即插入動(dòng)態(tài)試管儀中反應(yīng)。(6)樣品檢測(cè)項(xiàng)及樣品陽(yáng)性對(duì)照項(xiàng)：每個(gè)樣品取0.1ML樣品溶液及樣品陽(yáng)性對(duì)照溶液加入到0.05ML鱟試劑溶液的反應(yīng)試管，各平行兩管，輕輕混勻后立即插入動(dòng)態(tài)試管儀中反應(yīng)。結(jié)果分析：(1)試驗(yàn)有效性條件：陰性對(duì)照項(xiàng)檢測(cè)值應(yīng)小于標(biāo)準(zhǔn)曲線最低點(diǎn)的檢測(cè)值。(2)試驗(yàn)準(zhǔn)確性判斷：陽(yáng)性對(duì)照項(xiàng)回收率應(yīng)在50－200%之間。(3)樣品無(wú)干擾的判斷：樣品陽(yáng)性對(duì)照項(xiàng)的回收率應(yīng)在50－200%之間。(4)檢測(cè)結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞培養(yǎng)液等，細(xì)菌內(nèi)毒素不大于0.5EU/ML，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)《中國(guó)藥典》;(5)病毒檢測(cè)：HIV、HBV、HCV、TP檢測(cè)全部合格---全部陰性：方法按檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。8檢驗(yàn)與放行細(xì)胞制品達(dá)到：（1）無(wú)微生物，無(wú)內(nèi)毒素；（2）細(xì)胞活性>90%；（3）細(xì)胞表型達(dá)到本標(biāo)準(zhǔn)的要求；有專職的質(zhì)量控制員和技術(shù)長(zhǎng)聯(lián)合簽名發(fā)放。9標(biāo)注，運(yùn)輸與追蹤9.1發(fā)放的細(xì)胞產(chǎn)品留樣（5ML）深低溫活細(xì)胞保存3年，必備用復(fù)查。9.2外發(fā)的細(xì)胞制品：（1）有細(xì)胞名稱，數(shù)量，外觀項(xiàng)目，發(fā)放人簽名標(biāo)注。（2）按規(guī)定進(jìn)行一次性密封，密封口有簽名的一次性密封條加封。（3）放置帶有溫度記錄的血液保存-輸送箱中，外加封條。（4）24小時(shí)內(nèi)簽收。9.3追蹤制備方必須向應(yīng)用方進(jìn)行常規(guī)進(jìn)行細(xì)胞治療追蹤和記錄。10CIK細(xì)胞臨床治療方案和療效評(píng)價(jià)10.1臨床治療方案10.1.1病例選擇病例入選標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理證實(shí)、診斷明確的各種惡性腫瘤。②患者年齡、性別不限。③手術(shù)、放療和化療后病情穩(wěn)定或有復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的患者。7T/CI390—2024.病例排除標(biāo)準(zhǔn)1）有嚴(yán)重過(guò)敏體質(zhì)的病人。（2）嚴(yán)重心，肝，腎功能衰竭的病人。（3）臨床醫(yī)生認(rèn)為不適應(yīng)的病人。10.1.2治療方案參照2021年2月國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品評(píng)審中心公布的《細(xì)胞治療產(chǎn)品臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》中的“劑量探索和劑量遞增”原則，每例患者至少二個(gè)療程；每療程輸注6次，CIK細(xì)胞總數(shù)為150-300X108個(gè)。采用輸血器靜脈輸注細(xì)胞，可考慮采用藥物，如地塞米松5MG，于CIK輸注前靜推，預(yù)防不良反應(yīng)，常規(guī)情況下可不用，有過(guò)敏史者，應(yīng)提前預(yù)防。靜脈輸注：每次30-50×108細(xì)胞懸于150-200ML生理鹽水中，每分鐘60滴左右滴注。每天或隔天一次。6次一療程：第一年以2-3個(gè)療程，第二年半年重復(fù)一療程，以后每年做一療程，五年后視情況再定。肝動(dòng)脈灌注：每周一次，每次10-20×108細(xì)胞懸于50-60ML生理鹽水中，3次一療程。不良反應(yīng)及其處理本研究采用的健康人CIK細(xì)胞是異體免疫細(xì)胞，因?qū)＠夹g(shù)處理，治療相當(dāng)安全。有部分病人（3-5%）在細(xì)胞回輸后2-10小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)體溫升高。中度發(fā)熱（38.50C以下）一般2-6小時(shí)內(nèi)可自行緩解。超過(guò)390C者可用藥物或物理療法對(duì)癥處理。10.2臨床療效評(píng)價(jià)10.2.1一般臨床癥狀治療前后變化：包括：精神狀況、睡眠情況、體重、食欲、痛疼等（詳見(jiàn)觀察表格）10.2.2實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)：癌標(biāo)記物原發(fā)性肝癌治療前后查AFP，CA19-9等非小細(xì)胞肺癌治療前后查CEA和CA125等結(jié)直腸癌治療前后查CEACA724等具體各種癌癥病人治療前后均查AFP、CEA、CA125、CEA。收集資料可綜合分析不同癌標(biāo)記物在不同腫瘤中的臨床意義。.患者自身外周血淋巴細(xì)胞亞群測(cè)定治療前、后分別采取病人靜脈全血1ML通過(guò)流式細(xì)胞儀（FCM）測(cè)定其細(xì)胞亞群、T,B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞的絕對(duì)數(shù)量變化。（見(jiàn)附表）患者自身免疫能力（NK活性）測(cè)定治療前、后分別采取病人外靜脈血10ML，檢測(cè)患者自身外周血免疫細(xì)胞對(duì)K562細(xì)胞的殺傷活性，即NK活性。臨床影像學(xué)指標(biāo)療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)參照1979年WHO確定的實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)擬訂：完全緩解(COMPLETEREMISSION,CR)：所有病灶完全消失，至少維持4周；部分緩解(PARTIALREMISSON,PR)：雙徑可測(cè)病灶，各病灶最大徑乘積之和縮小50％以上，至少維持4周；單徑可測(cè)病灶，各病灶最大徑之和減少50%,8T/CI390—2024至少維持4周。穩(wěn)定(STABLEDISEASE,SD)：雙徑可測(cè)病灶，各病灶最大徑乘積之和縮小不足50％,或增大不超過(guò)25％,至少維持4周。進(jìn)展(PROGRESSIVEDISEASE,PD):一個(gè)或多個(gè)病灶增大超過(guò)包括：CT、B超、PET等，同時(shí)參照【實(shí)體腫瘤應(yīng)答評(píng)估方案】。完全緩解（CR）所有病變完全消失并維持4周以上部分緩解（PR）腫瘤最大橫徑與最大垂直徑的乘積減少50%以上，并維持4周以上好轉(zhuǎn)（MP）腫瘤病灶二徑乘積縮小25%以上，不足50%，無(wú)新病灶出現(xiàn)維持4周以上。穩(wěn)定（SD）腫瘤病灶二徑乘積縮小或增大均<25%，4周無(wú)新病灶出現(xiàn)。進(jìn)展（PD）腫瘤病灶乘積增大25%以上，并有新病灶出現(xiàn)。有效率（%）=（CR+PR）例數(shù)/治療總例數(shù)×100%存活時(shí)間病人的帶瘤生存和無(wú)瘤生存時(shí)間應(yīng)是療效評(píng)估的重要指標(biāo)。本研究擬采用1、2、3、5年生存時(shí)間作為CIK療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。時(shí)間：從病人確診之日計(jì)起，至去世之日止。治療組：用CIK生物治療5個(gè)療程以上的病例。對(duì)照組：和臨床應(yīng)用單位同時(shí)期內(nèi)，只用三大常規(guī)療法，不用CIK生物治療的同種病例相比較。9T/CI390—2024一CIK（NK）活性檢測(cè)表1.制備效靶細(xì)胞時(shí)分抽靜脈血ML，時(shí)分得PBMC取PBMCML（/ML）加稀釋液ML，調(diào)濃度為/ML，共ML取K562ML（/ML）加稀釋液ML，調(diào)濃