DB51T 1078-2010 飼料中T-2毒素的測定 高效液相色譜法

備案號：28168-2010DB51DB51/T1078—2010飼料中T-2毒素的測定2010-06-01發(fā)布2010-07-01實施I 12規(guī)范性引用文件 1 14試劑和溶液 15儀器與設(shè)備 1 27分析步驟 28結(jié)果計算 29精密度 3附錄A(資料性附錄) 4DB51/T1078-2010本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省畜牧食品局提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局批準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省飼料工作總站負(fù)責(zé)起草。本標(biāo)準(zhǔn)起草人：柏凡、李云、魏敏、王宇萍、張靜、趙立軍。1DB51/T1078-2010飼料中T-2毒素的測定本標(biāo)準(zhǔn)中檢出限為0.1mg/kg。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T14699.1飼料采樣GB/T20195動物飼料試樣的制備3原理試樣經(jīng)甲醇-水提取，提取液經(jīng)過免疫親和柱凈化，濃縮，衍生后，用高效液相色譜儀-熒光檢測器檢測，外標(biāo)法計算T-2毒素含量。4.4甲醇-水(8+2)提取液：取80mL甲醇，加20mL水，混勻。4.54-二甲基氨基吡啶(DMAP)溶液：準(zhǔn)確稱取0.0325g于100mL容量瓶中，用甲苯稀釋至刻度。4.61-氰酸蒽(1-AN)溶液：準(zhǔn)確稱取0.030g于100mL容量瓶中，用甲苯稀釋至刻度。4.7T-2毒素標(biāo)準(zhǔn)品：含量大于98%。4.7.1標(biāo)準(zhǔn)貯備液：精密稱取10mgT-2毒素標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈溶解、定容至100mL,此貯備液濃度為100μg/mL,置于冰箱中-20℃保存，有效期6個月。μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL,5.00μg/mL,置于冰箱中2℃~8℃保存，有效期1個5.3離心機(jī)：轉(zhuǎn)速為5000r/min以上。2DB51/T1078-20105.5渦旋混合器。5.6高效液相色譜儀：配備熒光外檢測器。5.7氮吹儀。5.80.45μm濾膜。6試樣制備按GB/T14699.1規(guī)定采集試樣后，按GB/T20195規(guī)定，選取具有代表性的實驗室樣品1kg,四分法縮減分取200g左右，粉碎過1mm孔篩，混勻裝入磨口瓶中備用。7分析步驟7.1試樣溶液的制備稱取25g試樣(精確至0.01g)于錐形瓶中，加入100mL甲醇-水(8+2)提取液(4.4),超聲提取20min,離心，取上清液過濾，移取10.0mL濾液，加入40.0mL水稀釋混勻，待凈化。將免疫親和柱連接于20mL注射器下，準(zhǔn)確吸取10.0mL提取液以1mL/min的速度通過免疫親和柱，用10mL水淋洗，抽干柱子，用2mL甲醇(4.2)洗脫。洗脫液50℃氮氣吹干，待衍生。7.1.3衍生于凈化吹干的樣品中，分別加入50μL4-二甲基氨基吡啶(DMAP)溶液(4.6)和50μL1-氰酸蒽(1-AN)溶液(4.6),渦旋混合1min,于50℃水浴中反應(yīng)15min,在冰水中冷卻10min。50℃以下氮氣吹干后，準(zhǔn)確加入流動相(7.2.3)1.0mL,渦旋30s,過0.45μm濾膜，上機(jī)測定。7.2色譜條件7.2.1色譜柱：C?8柱，柱長250mm,內(nèi)徑4.6mm,粒度5μm;或性能相當(dāng)?shù)纳V柱。7.2.2柱溫：30℃。7.2.4流速：1.0mL/min。7.2.5檢測器：熒光檢測器，Ex:381nm,Em:470nm。按上述色譜條件，分別將標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液上機(jī)測定，按照保留時間進(jìn)行定性，單點或多點校正外標(biāo)法定量。8結(jié)果計算試樣中T-2毒素的含量X,以質(zhì)量分?jǐn)?shù)毫克每千克(mg/kg)表示，單點校正按式(1)計算：式中：V——上機(jī)定容體積，單位為毫升(mL);AsT-2毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液對應(yīng)的色譜峰面積；A——試樣溶液對應(yīng)的色譜峰面積；Cs——T-2毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);