DB41∕T 2595-2024 豬急性腹瀉綜合征診斷技術(shù)

412024-02-01發(fā)布I 2 3 3 5 8 本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別專利物疫病預防控制中心、修武縣云臺山鎮(zhèn)綜合行政執(zhí)法郭育培、劉影、宋丹、劉禮杰、趙美雪、張利平、趙勝杰、冉曉龍、曹俊偉、1豬急性腹瀉綜合征診斷技術(shù)4縮略語SADS：豬急性腹瀉綜合征（SwineacuteDiarrhoeaSynSADS-CoV：豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒（SwineacuteDiarrhoeaSyndromeCoronaRT-PCR：反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(yīng)（Reversetranscription-polymerasechainreacFQ-PCR：熒光-聚合酶鏈式反應(yīng)（FluorescenceQuantitative-polymerasechainreacEDTA：乙二胺四乙酸（EthylenediaminPBS：磷酸鹽緩沖液（PhosphatebufferedsalDEPC：焦碳酸二乙酯（Diethypyrocarbona5.1流行病學率相對較低；成年豬感染后多數(shù)只出現(xiàn)輕度腹瀉，2發(fā)病仔豬出現(xiàn)急性腹瀉、嘔吐，脫水、體重迅速下降或死亡；成年豬感染出現(xiàn)25.3病理變化5.4結(jié)果判定易感動物符合5.1且出現(xiàn)5.2臨床癥狀、5.3病理），6.2.2個人防護用具：防護服、防護鏡、6.2.3采樣記錄用品：采樣單、記號筆、防水無菌采集疑似SADS-CoV感染腹瀉豬急性期的新鮮糞便（1.0g～2.0g）或小腸中段（1.0cm~0.22μm微孔濾器過濾，分裝20℃保存?zhèn)溆谩Ｈ缧栝L期保存，應(yīng)置于-80℃冰箱。3置于2℃~8℃冰箱中可保存一周，保存時間超過一周以上應(yīng)置于-20℃以下冷凍保存。7.2.6冰箱（2℃~8℃、－20℃、－80℃等不同溫度）。Vero細胞系。48.2.5單道微量移液器（0.1μL～0.25μL；0.5μL～采用核酸提取試劑盒或全自動核酸提取儀提取各類樣本中的病毒核酸。如在2h內(nèi)檢測可將提取的M-MLV5×Reactionbuffer(含Mg2+)44M-MLV（200U/μL）152ExTaqDNA聚合酶(5U/μL)分子量標準加到凝膠孔中。5V/cm恒壓下電泳369.2儀器設(shè)備5’-GCATTCGCCAGCGTTTTT-3’；TaqMan探針S9.4檢測程序2ExTaqDNA聚合酶(5U/μL)9.5試驗結(jié)果成立條件79.6結(jié)果判定9.6.3當35＜Ct值＜38且出現(xiàn)特異性擴增曲線，判為疑似。對疑似樣品，模任一項判為核酸陽性的，可判定為豬急性腹瀉綜合征確診病8氯化鈉（NaCl）85.00g氯化鈉（NaCl）磷酸氫二鈉（Na2HPO4?12H2O）30.0gA.3細胞培養(yǎng)液DMEM培養(yǎng)液A.4細胞維持液DMEM培養(yǎng)液A.51×TAE核酸電泳緩沖液Tris堿，24.2g；冰乙酸，5.71mL；0.5mol/LEDTA(pH8.0)，10mL；加蒸餾水至1009Vero細胞培養(yǎng)物。SADS-CoVRT-PCR產(chǎn)物電泳圖及熒光PCR擴增曲線圖B.1SADS-CoV熒光PCR