地標-編制說明-混合型飼料添加劑中解熱鎮(zhèn)痛類藥物測定技術(shù)規(guī)范

混合型飼料添加劑中解熱鎮(zhèn)痛類藥物測定技術(shù)規(guī)范編制說明標準制定工作簡況任務(wù)來源本標準任務(wù)來源于上海市市場監(jiān)督管理局，由上海市動物疫病預(yù)防控制中心負責(zé)起草，按照《上海市地方標準管理辦法》及編制制修訂程序開展工作。項目名稱為《混合型飼料添加劑中解熱鎮(zhèn)痛類藥物測定技術(shù)規(guī)范》，本標準由上海市農(nóng)業(yè)農(nóng)村委員會提出，由上海市畜牧標準化技術(shù)委員會歸口。標準制定背景近年來飼料中解熱鎮(zhèn)痛類藥物非法添加現(xiàn)象屢禁不止，一方面由于我國過去是抗生素使用大國，長期以來解熱鎮(zhèn)痛類藥物并沒有像抗生素一樣受到高度的關(guān)注，同時解熱鎮(zhèn)痛類藥物的違法違規(guī)使用并沒有引發(fā)重大的社會性食品安全事故。另一方面因解熱鎮(zhèn)痛類藥物的治療用藥的特性，在食品安全領(lǐng)域并無相關(guān)的殘留限量要求。因此，解熱鎮(zhèn)痛類藥物的監(jiān)管長期處于被動和缺失的狀態(tài)。隨著飼料“?？埂睍r代的開啟，解熱鎮(zhèn)痛類藥物在植物提取物等混合型飼料添加劑中以“替抗”為目的被大量添加，但目前并無相關(guān)的監(jiān)測技術(shù)手段。隨著《上海市養(yǎng)殖業(yè)布局規(guī)劃（2015-2040年）》的深入落實，堅持“合理布局、控制總量、規(guī)模養(yǎng)殖”等原則，上海市畜牧業(yè)減量提質(zhì)、轉(zhuǎn)型發(fā)展迅速的特點明顯。根據(jù)2020年1-10月統(tǒng)計，上海市飼料加工產(chǎn)品總產(chǎn)量105.4萬噸，同比增長1.2%，本市總產(chǎn)值已達81.6億元。其中飼料添加劑和混合型飼料添加劑加工產(chǎn)品總產(chǎn)量6.0萬噸,同比增長40.9%，增速呈現(xiàn)強勁的勢頭。因此上海市飼料添加劑工業(yè)綠色、高質(zhì)量發(fā)展要求不容忽視。在畜牧業(yè)生產(chǎn)迅速發(fā)展的當(dāng)下，本標準的建立可以有效填補混合型飼料添加劑中解熱鎮(zhèn)痛類藥物的檢測技術(shù)空白，有助于本市參與開展“三年行動方案”中重點關(guān)注品種的“控藥殘、治違禁”工作，全面了解本市混合型飼料添加劑中解熱鎮(zhèn)痛類藥物的風(fēng)險情況，并以此作為推動全國“三年行動方案”的工作試點，以期進一步保障現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)建設(shè)和食品安全質(zhì)量。（三）主要工作過程成立標準編制小組2021年12月，標準起草組成立，并舉行了第一次工作會議，確定標準編制大綱。對該標準的具體工作進行了任務(wù)分工，確定了總體工作方案。落實人員與分工。查詢國內(nèi)外相關(guān)標準和文獻資料2022年1月～4月，本標準編制組成員查詢和收集了國內(nèi)外相關(guān)標準和文獻資料，確立了建立標準的指導(dǎo)思想，制定了標準的技術(shù)路線，充分學(xué)習(xí)了相關(guān)標準中的術(shù)語定義內(nèi)容。確定標準修訂技術(shù)路線，主要內(nèi)容2022年5月～7月，上海市獸藥飼料所召開了標準開題論證會，會上標準編制組介紹了對國內(nèi)外相關(guān)分析方法的研究，標準制定的技術(shù)路線和技術(shù)難點，以及擬開展的主要工作等內(nèi)容。編寫標準征求意見稿在前期研究工作的基礎(chǔ)上，2024年11月完成了《混合型飼料添加劑中對乙酰氨基酚、安乃近、氨基比林、安替比林四種解熱鎮(zhèn)痛類藥物檢測技術(shù)規(guī)范》標準文本及編制說明征求意見稿。標準編制原則和主要技術(shù)內(nèi)容確定的依據(jù)標準編制原則依據(jù)依據(jù)GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》和GBT20001.5-2017《標準編寫規(guī)則第5部分：規(guī)范標準》。主要內(nèi)容及其確定依據(jù)本次標準的內(nèi)容主要分為三大部分：第一部分：分析方法樣品采集和制備要求的確定，主要參考了GB/T14699以及GB/T20195規(guī)定的方法和程序進行采樣。且本標準的采樣對象只限于混合型飼料添加劑。第二部分：分析方法試驗研究，包括樣品前處理要求、所用儀器的一般要求，主要參考了農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第289號公告。第三部分：分析結(jié)果的判斷，包括不同儀器的判定要求和定量要求，主要參考了農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第289號公告和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第312號公告。以及以下列出的相關(guān)標準。GB/T1.1－2020標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則GB/T20001.5-2017標準編寫規(guī)則第5部分：規(guī)范標準GB/T27417－2017合格評定化學(xué)分析方法確認和驗證指南GB/T32465－2015化學(xué)分析方法驗證確認和內(nèi)部質(zhì)量控制要求GB/T23182－2008飼料中獸藥及其他化學(xué)物檢測試驗規(guī)程GB/T32467－2015化學(xué)分析方法驗證確認和內(nèi)部質(zhì)量控制術(shù)語及定義GB/T33464－2016化學(xué)分析標準操作程序編寫與使用指南GB/T35655－2017化學(xué)分析方法驗證確認和內(nèi)部質(zhì)量控制實施指南色譜分析GB/T35656－2017化學(xué)分析方法驗證確認和內(nèi)部質(zhì)量控制實施指南報告定性結(jié)果的方法1）術(shù)語與定義GB/T27417-2017（合格評定化學(xué)分析方法確認和驗證指南）、GB/T32467－2015（化學(xué)分析方法驗證確認和內(nèi)部質(zhì)量控制要求）中確立的術(shù)語和定義適用于本標準。2）采樣與樣品制備在實際檢測過程中，主要依據(jù)樣品的種類選取適宜的樣品制備方式和前處理方式。樣品采集制備流程與GB/T14699以及GB/T20195兩個標準中描述的相符合。3）樣品前處理要求在選擇前處理技術(shù)時，應(yīng)綜合考慮樣本特性和目標化合物的物理化學(xué)特性，同時確保與液相色譜和質(zhì)譜系統(tǒng)的兼容性。本標準規(guī)定前處理程序通常包括提取、凈化和富集/稀釋等步驟。所選方法應(yīng)與樣本基質(zhì)和目標化合物特性相適應(yīng)，并確保最終樣本溶液與流動相兼容，避免色譜分離過程中出現(xiàn)結(jié)晶。原則上，應(yīng)針對解熱鎮(zhèn)痛類藥物的目標化合物，確保其完全提取并在提取液和進樣溶液中保持穩(wěn)定。前處理參照了農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第289號公告中的程序，且在長期的實際檢測中，項目組摸索出了一套適用與解熱鎮(zhèn)痛類藥物的重現(xiàn)性較好的前處理方法：稱取試樣2g（精確至0.01g），于50mL離心管中，準確加入25mL甲醇，渦旋1min，振蕩提取20min，9000r/min離心5min，準確移取上清液適量，用甲醇稀釋至適宜濃度，混勻，過膜上液相。取上清液適量，用0.1%甲酸溶液稀釋為備用液，準備凈化后上質(zhì)譜。質(zhì)譜上機凈化過程如下：依次用3mL甲醇和3mL水活化固相萃取小柱，取備用液全部過柱，用3mL水淋洗，抽干小柱，用3mL5%氨水甲醇溶液洗脫，收集洗脫液于50℃下用氮氣吹干，準確加入2.5mL甲醇，渦旋溶解，過膜，待測。凈化過程需全程避光操作。4）儀器要求本標準基于高效液相色譜儀-二極管陣列檢測器、高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀的檢測原理，規(guī)定了液相色譜和質(zhì)譜儀器的基本要求。參照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第169號公告和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第289號公告。根據(jù)實際檢測經(jīng)驗，項目組總結(jié)了一套適用于解熱鎮(zhèn)痛類藥物的液相及液相串聯(lián)質(zhì)譜參考條件。液相色譜參考條件：液相色譜參考條件如下：色譜柱：C18柱，柱長250mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5.0μm，或性能相當(dāng)者；柱溫：40℃；檢測波長：245nm；流速：1.0mL/min；進樣量：20L。流動相：A相為磷酸鹽緩沖液（取磷酸氫二鈉3.0g，加水1000mL，用磷酸調(diào)pH值至7.0），B相為乙腈，梯度洗脫程序見表1。梯度洗脫程序時間minA相%B相%0.0087139.0087139.10752518.00752518.10871330.008713液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜參考條件：液相色譜參考條件如下：色譜柱：C18柱，柱長100mm，內(nèi)徑2.1mm，粒徑1.7μm，或性能相當(dāng)者；b）流動相：A相為0.1%甲酸溶液,B相為乙腈,梯度洗脫程序見表2；c）柱溫：35℃；d）流速：0.3mL/min；e）進樣量：2μL。梯度洗脫程序時間minA相%B相%0.0090102.5090105.6010906.5010906.6090109.009010質(zhì)譜參考條件質(zhì)譜參考條件如下：電離方式：電噴霧電離，正離子模式（ESI+）；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；脫溶劑氣：800L/Hr；反吹氣：50L/Hr；霧化器溫度：500℃；電離電壓：2.5kV；離子源溫度：150℃。多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）離子對、錐孔電壓及碰撞能量見表3。各目標物多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）離子對、錐孔電壓及碰撞能量參考值被測物名稱母離子m/z子離子m/z錐孔電壓V碰撞能量eV對乙酰氨基酚152.093.01520110.0a15124-甲氨基安替比林218.097.0102056.0a1022氨基比林232.0113.01015187.0a1012安替比林189.0104.01512131.0a1512a為定量離子5）結(jié)果判定要求本部分主要針對解熱鎮(zhèn)痛類物質(zhì)識別和確證的重要性以及對色譜和質(zhì)譜的測定要求專門做了相應(yīng)規(guī)范。主要參考了歐盟有關(guān)食品飼料中農(nóng)藥殘留測定質(zhì)控和確認要求、國內(nèi)標準如農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第289號公告中規(guī)定的“試樣溶液中待測物的保留時間應(yīng)與濃度相近的標準溶液中待測物的保留時間一致，其相對偏差LC不大于±2.5%”以及農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第312號公告的相應(yīng)要求。并在定量部分給出了具體計算公式。無與國際、國外同類標準技術(shù)內(nèi)容的對比情況在我國，根據(jù)GB31650-2019《食品中獸藥最大殘留限量》中明確規(guī)定安乃近在動物性組織中的殘留限量為100μg/kg，在奶中的殘留限量為50μg/kg；對乙酰氨基酚僅適用于豬的口服用獸藥。目前我國針對解熱鎮(zhèn)痛類藥物的研究及監(jiān)管多集中于中成藥的非法添加、獸藥的非法添加等。在現(xiàn)有檢測技術(shù)規(guī)范中，農(nóng)業(yè)部第2448號公告規(guī)定了黃芪多糖注射液中非法添加解熱鎮(zhèn)痛類、抗病毒類、抗生素類、氟喹酮類等11種化學(xué)藥物（物質(zhì)）檢查方法；以及阿莫西林可溶性粉中非法添加解熱鎮(zhèn)痛類藥物的檢查方法。同時《中華人民共和國獸藥典》2020年版對安乃近、對乙酰氨基酚、安替比林、氨基比林均有收載，并規(guī)定采用高效液相色譜法、滴定法、紫外—可見分光光度法對以上藥物進行含量測定或有關(guān)物質(zhì)檢查。安乃近作為解熱鎮(zhèn)痛類的代表藥物早在70年代已被禁止用于食源性動物，目前已被30多個國家禁用。歐盟對安乃近在牛奶及食源性動物組織均設(shè)定了嚴格的限量要求。美國環(huán)境保護署（EPA）在1694號方法（PharmaceuticalsandPersonalCareProductsinWater,Soil,Sediment,andBiosolidsbyHPLC/MS/MS(2007)）中也涵蓋了對乙酰氨基酚的檢測。但是，國內(nèi)外對飼料中解熱鎮(zhèn)痛類藥物的檢測方法少有文獻報道，混合型飼料添加劑中的解熱鎮(zhèn)痛類藥物檢測方法和技術(shù)標準更是近乎空白，飼料行業(yè)中解熱鎮(zhèn)痛類藥物的標準化檢測技術(shù)有效供給不足。表2國內(nèi)外相關(guān)標準文獻分析方法匯總表標準名稱測定方法檢測條件適用范圍EPA1694:《PharmaceuticalsandPersonalCareProductsinWater,Soil,Sediment,andBiosolidsbyHPLC/MS/MS(2007)》液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法酸性提取，電噴霧正離子化（ESI+）流動相：乙腈-0.1%的甲酸水溶液（1:9）梯度水《中華人民共和國獸藥典》一部液相色譜、紫外分光光度法、容量法甲醇：水（40:60）檢測波長241獸藥BJS201713飲料、茶葉及相關(guān)制品中對乙酰氨基酚等59種化合物的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法甲醇或0.1%甲酸甲醇提取流動相：5mmol/L甲酸銨溶液（含0.1%的甲酸）-0.1%甲酸乙腈，梯度飲料、茶葉及相關(guān)制品DB65/T3951-2016水質(zhì)多種藥物殘留的測定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法流動相：乙腈-2mM乙酸銨（pH3.2）水GB/T20747-2006牛和豬肌肉中安乃近代謝物殘留量的測定液相色譜-紫外檢測法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法液相色譜、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法硫酸鈉溶液提取液相流動相：水-甲醇，梯度質(zhì)譜流動相：5mmol/L乙酸銨溶液（pH4.5）-乙腈，梯度牛和豬肌肉GB/T22971-2008牛奶和奶粉中安乃近代謝物殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法流動相：5mmol/L乙酸銨溶液（pH3.0）-甲醇，梯度牛奶、奶粉農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第2333號公告《扶正解毒散中非法添加茶堿、安乃近檢查方法》、《黃連解毒散中非法添加對乙酰氨基酚、鹽酸溴己新檢查方法》液相色譜流動相：磷酸二氫鈉溶液（pH7.0）-甲醇（70: