DB51T 3065-2023 克氏原螯蝦斑綜合征診斷和防控技術規(guī)程

CCSB52DB512023-06-19發(fā)布I 4 4 4 5本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。1克氏原螯蝦白斑綜合征診斷和防控技術規(guī)程本文件規(guī)定了由白斑綜合征病毒(whitespotsyndromevirus，WSSV)引起的克氏原螯蝦本文件適用于克氏原螯蝦白斑綜合征的診斷以及四川行政區(qū)域內稻田和池塘養(yǎng)殖克氏原螯蝦白斑GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格GB/T28630.2-2012白斑綜合NY/T5361無公害農產品淡水養(yǎng)殖產地環(huán)境條件克氏原螯蝦白斑綜合征whitespotsyndromeofProtocrayfishclarkii4.1試劑和材料4.1.1試劑檢驗中所需試劑的配制按照GB/T28630.2-2012和SC/T7014.1.2水2用來從第一步PCR擴增的1447bp產物中再擴增出941bp的產擴增十足類動物DNA中848bp的片段產物，-4.2設備與器械設備和器械應當符合GB/T28630.2患病克氏原螯蝦主要臨床癥狀為體色變暗、攝食4.3.2剖檢4.4實驗室樣品采集4.5.1樣品準備制的75%酒精中5min，無菌水充分清洗兩次后，方4.5.3微量分光光度計測定核酸濃度和純度4.5.3.1在上樣孔處點入1.5μL無菌水，點樣時不要有氣泡殘留，對儀器進行校準。使用內參引物F3和R3，按照GB/T28630.2-2012中6.4的規(guī)定進行樣品提取質量及反應34.8.1瓊脂糖凝膠制作4.8.3PCR擴增產物純化、測序及序列比對4.8.3.2按每0.1g瓊脂糖凝膠加0.1mL酚，將酚加入4.8.3.1含有目的條帶膠塊的離心管中，漩渦震蕩4.8.3.337℃水浴將凍結的凝膠融化后，在漩渦震蕩儀上震蕩1min～2min；14000r/min離心5min，取上層水相轉入另一個離心管中，加入等體積的酚-三氯甲烷-異戊醇(25:24:1)，混勻，12000r/min4.8.3.614000r/min離心10m4.9.1提取質量及體系監(jiān)控DNA提取質量和體系監(jiān)控中，所有樣品在848bp處應有一條特定4.9.2各對照組空白對照無任何條帶；第二步PCR，經瓊脂糖凝膠電泳后，陽性對照在941bp處有條帶，陰性4.9.3被檢測樣品后在1447bp處無條帶且第二步PCR后在941bp處電泳條帶的亮暗表示PCR產物數量的多少，但并不對4.10綜合判定4——臨床癥狀與4.3相符；——套氏PCR擴增結果與4.9相符；5.1養(yǎng)殖環(huán)境前，應用1%～3%氯化鈉對苗種進行浸泡，浸泡時間為7min～10mi稻田每畝放養(yǎng)規(guī)格為150尾/kg～200尾/kg的苗種30kg～40kg，池塘約5.4免疫增強劑防控每年4月至7月，在飼料中添加β-葡聚糖、殼聚糖、多種維生素等免疫增強劑，每間隔15天連續(xù)投5.5微生態(tài)防控在疾病流行季節(jié)或發(fā)病時，用聚維酮碘對養(yǎng)殖水體潑灑消毒，隔天1次，連續(xù)潑在疾病流行季節(jié)或發(fā)病時，按飼料質量1.5%等比添加板藍根、大蒜素，連續(xù)投喂75(資料性)白斑綜合征病毒基因參考序列1ACTACTAACTTCAGCCTATCTAGTAAAAC61CTTCCCTGCCGCCCTCACCTGCGCTTCTCACCTCATGCTTTCTTCCATGGATTCCCATAC121AAAGTCATCTTTCATGGACAACATCAAA181GAACATTGAACGATTTGAGAAATTCTTGGGAAGATATGGGGACGAATACGCCATGTC241CAAGCAAAATTGTAACTGccCcTTCCATCTCCACCACACTTTTACTC301GCATCTGGTATCCTCTTTCGCATTCGCCCGCCCAGAAGTCTC361CACACCCTATCAGGCCAACAAGCTTATTAGTGACAAACATTACGTGATGAACATGTCCAA421GATCGATTCTAGAGTAACAGGATCTTCCCTCCTTAAGAAGGTTAGCGAATGGACTGAAAT481GAGAATGAACTCCAACTTTAATGGAACATTTGAACCATCAAGACTCGCCC541TGGCATGACAACGGCAGGAGTCAACCTCGACGTTATTGTCAAACCAAATAATGCAAGAAG601TGTACTAGGAATATTGGAATGTCATCGCCAGCACGTGTGCACCGCCGACGC661TGTCGCTTCAGCCATGCCAGCCGTCTTCCAGGCAACCGATGGAAACGGTAACGAATCTGA721ACTGATCCAGAATGCTCTGCCAAGGAACAGATACATCCAAAAGAG781AACTGTCGTGTTTGCTAATGTTTTGGAACAACTTATCGCCGATCT841GAACGAACTGGCCGGCACCATCGCTGAATCTGTACCAGAAAGCGTATATGAA901GGAAATGATTGATAGACTAGGCTCTGACGACCTCTTCAAATCTAATAATAATGGAGGAGT961AGAATCAATGGATTATGAAGATAGCGAAACAACATCCAACAATG1021AGAAGCCATGAAGAATGCCGTCTATCACACACTAATTTCCGGCAAGGCAGCTCGCC1081AAATGTACCATTCGCCTCATGCGCCAGCGGCCCTCTCGCCTTTGATTTCCTTCTGTCAAA1141GGGAGATACATTCGAAGAAAAGAACGCGAACAAGGTGC1201CTATTCTTCCTCTTCTAACACTACTCTTCGTAAGCATTTGGCTCGAGTTTTCGAAGC1261CTCTAAGCAA