DB51T 1317-2011 蜜蜂白堊病診斷規(guī)程

ICS65.202.30備案號(hào)：30920-2011DB51/T1317—2011蜜蜂白堊病診斷規(guī)程四川省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布IDB51/T1317—2011 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語(yǔ)和定義 14診斷人員 25發(fā)病規(guī)律 26現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè) 27實(shí)驗(yàn)室檢測(cè) 28結(jié)果判定 3本標(biāo)準(zhǔn)由四川省畜牧食品局提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局批準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省蜂業(yè)管理站、四川省蜂產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心起草。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：王順海、鄒志堅(jiān)、趙平、李念周、羅勤、唐友海。11范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了蜜蜂白堊病的發(fā)病規(guī)律、現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)等方面的內(nèi)容。本標(biāo)準(zhǔn)適用于蜜蜂白堊病的診斷、檢疫。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682-2008分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法DB51/T657-2007蜜蜂檢疫技術(shù)規(guī)范3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。由受精卵發(fā)育而成的生殖器官發(fā)育不完全的雌性蜂，具有二倍染色體，是蜂群的主體，擔(dān)負(fù)著蜂群3.2雄蜂dronebee由未受精卵發(fā)育而成，具單倍染色體，頭近圓形，身體粗壯。主要是尋求與處女王交配，只有在蜂3.3由12日-18日齡的工蜂分泌蠟鱗筑造成蜂巢排列而成，是蜜蜂繁衍生息、儲(chǔ)藏食糧的場(chǎng)所。每片培育蜜蜂卵、幼蟲(chóng)、蛹的巢脾稱(chēng)為子脾；儲(chǔ)存蜂蜜、花粉的巢脾稱(chēng)為蜜脾、粉脾。3.4封了蓋的巢脾。封蓋子一般位于巢脾的中下部，呈黃褐色，形狀規(guī)則，輪廓清晰；封蓋蜜一般位于巢脾的上部，色淺，輪廓不清晰，具波浪紋。23.5蜜蜂白堊病beechalkbrooddisease又名“石灰質(zhì)病”,是蜜蜂球囊菌寄生而引起的蜜蜂幼蟲(chóng)死亡的傳染性真菌病。一般4日齡的蜜蜂幼蟲(chóng)，特別是雄蜂幼蟲(chóng)易感染。4診斷人員4.1診斷人員符合DB51/T657-2007蜜蜂檢疫技術(shù)規(guī)范中對(duì)檢疫人員的要求。5發(fā)病規(guī)律5.1發(fā)病條件多流行于初夏、秋季節(jié)，特別是陰雨潮濕，溫度變化頻繁的氣候條件下易產(chǎn)生。5.2病原來(lái)源被病原污染的飼料、患病的幼蟲(chóng)尸體或被病原污染的巢脾是病害傳播的主要來(lái)源。5.3典型癥狀漸變成灰色至黑色。蟲(chóng)尸干枯后，變成一塊似白堊狀的質(zhì)地較為堅(jiān)硬的塊狀物，表面覆蓋白色的菌絲與深墨綠近黑色孢囊。6現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)6.1箱外檢查蜂箱外巢門(mén)近旁有被工蜂拖出的幼蟲(chóng)干尸，質(zhì)硬，有的干尸呈蒼白色，表面有一層絨毛膜，劈開(kāi)幼蟲(chóng)干尸可見(jiàn)內(nèi)心為淺棕色；有的干尸為部分或全部黑色，表面有一層黑色顆粒狀物質(zhì)。6.2開(kāi)箱檢查在已封蓋的子脾上有呈星點(diǎn)式分布的被工蜂咬開(kāi)的巢房，巢房?jī)?nèi)有向一側(cè)帖壁的幼蟲(chóng)干尸，形態(tài)完整，質(zhì)地柔軟，無(wú)光澤，無(wú)臭味，干尸有的為白色，有的為部分或全部黑色。7實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)7.1設(shè)備、材料和試劑7.1.1設(shè)備低倍光學(xué)顯微鏡、恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)。7.1.2材料3無(wú)菌培養(yǎng)皿、載玻片、試管(10ml)、無(wú)菌鑷子、接種針。7.1.3試劑實(shí)驗(yàn)室用水(符合GB/T6682-2008中三級(jí)水的規(guī)格要求)、馬鈴薯酵母膏瓊脂培養(yǎng)基、青霉素、鏈7.2抽樣7.2.1抽樣比例當(dāng)蜂群數(shù)量小于或等于10群時(shí)，均采樣；在10群～100群時(shí)，以10群采樣量為基礎(chǔ)，每增加10群，采樣量增加1群；在101群～200群時(shí)，按總?cè)簲?shù)的15%采樣；在201群以上時(shí)，按總?cè)簲?shù)的10%采樣。采樣增加采樣的比例。7.2.2抽樣方法從每個(gè)蜂群中隨機(jī)抽取子脾一張，按照5點(diǎn)式采樣方法，分別從巢脾四角與中央各開(kāi)啟相鄰的封蓋幼蟲(chóng)房5個(gè)，觀察是否有患病幼蟲(chóng)存在。采樣時(shí)，若發(fā)現(xiàn)明顯變色或死亡的幼蟲(chóng)則不受所圈定的部位限7.3實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)7.3.1鏡檢法取幼蟲(chóng)尸體樣品于無(wú)菌培養(yǎng)皿中，刮取樣品表層物于干凈的載玻片上，加一滴無(wú)菌蒸餾水，制成水浸片，等5分鐘后在低倍光學(xué)顯微鏡下觀察。放大倍數(shù)為400或600。有呈白色似棉花狀的菌絲和橢圓形內(nèi)含有孢子的孢囊，可初診為白堊病。7.3.2分離培養(yǎng)將馬鈴薯酵母膏瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化冷卻至47℃時(shí)加入青霉素、鏈霉素各50萬(wàn)單位抑制雜菌生長(zhǎng)，然后用接種針取病死幼蟲(chóng)體表物接種到培養(yǎng)基上，一般接種3個(gè)點(diǎn)~4個(gè)點(diǎn)，置27℃~29℃培養(yǎng)，72小時(shí)后進(jìn)行觀察，當(dāng)真菌在培養(yǎng)基上產(chǎn)生孢囊后，用接種針取少許孢囊置載玻片上，做水浸片，在低倍光學(xué)8結(jié)果判定在現(xiàn)場(chǎng)檢查時(shí)，若見(jiàn)到巢門(mén)前、箱底或巢脾上長(zhǎng)有白色菌絲或黑白兩色的幼蟲(chóng)尸體等臨床癥狀時(shí)，在分離培養(yǎng)時(shí)，菌落呈白色