臨床常見(jiàn)微生物的鑒定-革蘭陰性需氧和兼性厭氧性桿菌鑒定

一、埃希菌屬（大腸桿菌，E.coli）生物學(xué)性狀形態(tài)染色：符合腸桿菌特點(diǎn)，周鞭毛菌，有菌毛培養(yǎng)特性：符合腸桿菌特點(diǎn)

EMB——紫黑色有金屬光澤S-S——桃紅色生化反應(yīng)：IMViC（++--）,見(jiàn)教材表格?？乖璒抗原（O1---O173）H抗原（H1---H56）K抗原（K1---K100）血清型表示法：O：K：HEMB平板上的E.coli大腸埃希菌KIA（AA＋－）MIU（＋＋－）大腸埃希菌IMViC試驗(yàn)（＋＋－－）

右側(cè)為對(duì)照（－－＋＋）

屬鑒定特征甲基紅（+）枸櫞酸鹽（-）尿素（-）發(fā)酵多種糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣氧化型發(fā)酵型產(chǎn)堿型腸桿菌科與其它革蘭陰性桿菌區(qū)別

致病性致病物質(zhì)除內(nèi)毒素、莢膜腸桿菌科共有的毒力因子外，大腸埃希菌具有獨(dú)特的毒力因子有：黏附素——具有高度特異性

吸附、定植、致病外毒素（由ETEC產(chǎn)生的腸毒素）1、不耐熱腸毒素（LT），分LT-I和LT-Ⅱ兩型蛋白質(zhì)對(duì)熱不穩(wěn)定，與霍亂腸毒素相似

A亞單位——毒素活性成分機(jī)制

B亞單位——與腸上皮細(xì)胞受體（GM1神經(jīng)節(jié)苷脂） 結(jié)合B單位與受體結(jié)合→導(dǎo)致A進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)→激活腺苷酸環(huán)化酶ATPCAMP↑小腸液過(guò)度分泌腸腔積液、腹瀉2、耐熱腸毒素（ST），分STa、STb兩型為低分子多肽，對(duì)熱穩(wěn)定機(jī)制為激活細(xì)胞鳥苷酸環(huán)化酶，使cGMP↑導(dǎo)致腹瀉

LT和ST同時(shí)存在，致病性要強(qiáng)所致疾?。耗c道外感染（內(nèi)源性感染）化膿性感染——定位轉(zhuǎn)移腹膜炎、闌尾炎、創(chuàng)傷感染、手術(shù)刀口感染、肺炎、敗血癥、新生兒腦膜炎等泌尿道感染——病原菌來(lái)自病人腸道（上行性）占泌尿道感染首位、女性多見(jiàn)（尿道炎、膀胱炎、腎盂腎炎等）1.腸致病性大腸埃希菌（enteropathogenicE.coli,EPEC）：嬰兒腹瀉（水樣腹瀉）2.腸侵襲性大腸埃希菌（enteroinvasiveE.coli,EIEC）：成人腹瀉，與菌痢相似(醋酸鹽、葡萄糖胺利用實(shí)驗(yàn)、黏質(zhì)酸鹽實(shí)驗(yàn)）腸道感染——胃腸炎（腹瀉）/（外源性感染）3.腸出血性大腸埃希菌（enterohemorrhagicE.coli,EHEC）：O157:H7出血性結(jié)腸炎，溶血性尿毒綜合征（HUS）4.腸凝聚性大腸埃希菌（enteroaggregativeE.coliEAEC）：嬰兒腹瀉（持續(xù)性）耐藥性耐藥性越來(lái)越嚴(yán)重：產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBL)比例增高，對(duì)青霉素類和1-4代頭孢菌素及單環(huán)菌素耐藥，僅對(duì)頭霉素類、碳青霉烯類、含酶抑制劑類抗生素敏感。微生物學(xué)檢查與防治腸道外感染標(biāo)本→涂片、染色→分離培養(yǎng)→鑒定尿路感染時(shí)每ml尿含菌≥10萬(wàn)，有診斷價(jià)值腸道內(nèi)感染用弱選擇性培養(yǎng)基分離培養(yǎng)+生化反應(yīng)+血清分型+毒素測(cè)定+核酸檢測(cè)等衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)檢查

衛(wèi)生學(xué)標(biāo)準(zhǔn)：每ml飲水中細(xì)菌總數(shù)≤100個(gè)，每1000ml水中大腸桿菌≤3個(gè)，每100ml瓶裝汽水、果汁中，大腸桿菌≤5個(gè)。大腸埃希菌檢驗(yàn)程序四、變形桿菌G-桿菌，有多形性，周身鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑，在普通培養(yǎng)基上呈擴(kuò)散性生長(zhǎng)，稱為遷徙生長(zhǎng)現(xiàn)象變形桿菌的周身鞭毛遷徙生長(zhǎng)變形桿菌KIA（KA++）MIU（++/-+）變形桿菌苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)（＋）

迅速分解尿素，尿素（++++）為本菌特征，乳糖（-）外斐試驗(yàn)（Weil-Felix）：

本菌某些特殊菌株如X19、X2、XK

的O抗原與某些立克次氏體有共同抗原成分，臨床上應(yīng)用OX19、OX2、OXK

代替立克次氏體抗原與斑疹傷寒或恙蟲病患者血清做凝集試驗(yàn)，以輔助診斷立克次體病。不動(dòng)桿菌屬臨床多見(jiàn)鮑曼不動(dòng)桿菌革蘭陰性桿菌，不發(fā)酵糖類，氧化酶陰性，無(wú)鞭毛專性需氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高，普通平板、Mac平板上可生長(zhǎng)氧化酶－；硝酸鹽還原－醫(yī)院感染常見(jiàn)致病菌檢驗(yàn)程序膿汁、痰液、尿液腦脊液、血液分離培養(yǎng)（血液瓊脂、麥康凱瓊脂）增菌培養(yǎng)直接涂片革蘭染色挑選可疑菌落生化反應(yīng)初步鑒定KIA：底層、斜面不變硝酸鹽還原、氧化酶、動(dòng)力最后鑒定35℃18~24h不動(dòng)桿菌屬及產(chǎn)堿桿菌屬檢驗(yàn)程序不動(dòng)桿菌屬－－鑒定要點(diǎn)革蘭陰性球桿菌，易染成革蘭陽(yáng)性無(wú)動(dòng)力氧化酶－硝酸鹽還原－/+KIA：底層斜面不變色注意與不分解糖的產(chǎn)堿桿菌鑒別耐藥性強(qiáng)大多對(duì)氨芐西林、氯霉素、一二代頭孢一代喹諾酮類耐藥。染色為革蘭陰性球菌或球桿菌，成雙排列。氧化酶（－），硝酸鹽還原（－）。動(dòng)力（－），不發(fā)酵葡萄糖。符合上述五項(xiàng)即可判定為不動(dòng)桿菌屬的細(xì)菌。產(chǎn)堿桿菌屬糞產(chǎn)堿桿菌脫硝產(chǎn)堿桿菌產(chǎn)堿桿菌屬－－主要特征革蘭陰性桿菌、有周鞭毛、無(wú)芽孢、多數(shù)無(wú)莢膜專性需氧營(yíng)養(yǎng)要求不高，普通平板和Mac平板上可生長(zhǎng)氧化酶和觸酶陽(yáng)性、不分解任何糖，分解部分有機(jī)鹽和胺類產(chǎn)堿，在含蛋白的肉湯中產(chǎn)氨。部分菌株還原硝酸鹽，利用枸櫞酸鹽是醫(yī)院感染病原菌之一，糞產(chǎn)桿菌多見(jiàn)?？芍碌挚沽Φ拖碌幕颊甙l(fā)生菌血癥藥敏分組同假單胞菌，常用哌拉西林和替卡西林產(chǎn)堿桿菌屬－－鑒定要點(diǎn)革蘭陰性桿菌氧化酶＋O/F：－部分菌株硝酸鹽還原＋KIA：底層斜面不變色液體培養(yǎng):表面形成菌膜，管底有粘性沉淀。在含蛋白胨的肉湯中產(chǎn)氨，使PH達(dá)8.6，為本菌鑒別特征。糞產(chǎn)堿桿菌菌落特征（MAC）氧化酶陽(yáng)性的革蘭氏陰性桿菌麥康凱上生長(zhǎng)通過(guò)周鞭毛運(yùn)動(dòng)在含蛋白的肉湯中產(chǎn)氨硝酸鹽還原－＋＋枸櫞酸鹽利用＋＋＋氧化酶＋＋＋尿素酶＿＿/＋＿丙二酸鹽＋＿＋/＿O/F試驗(yàn)葡萄糖＿O/－＿木糖＿O/－＿DNA中G＋C（mol%）

55.9~59.466.0~69.8

63.9~68.9O：氧化；F：發(fā)酵；糞產(chǎn)堿桿菌木糖氧化亞種去硝化亞種

產(chǎn)堿桿菌的鑒別

革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌腸道感染細(xì)菌

通過(guò)糞—口途徑進(jìn)行傳播的細(xì)菌主要包括——腸桿菌科細(xì)菌（最重要）——弧菌屬細(xì)菌——幽門螺桿菌和彎曲菌屬

腸桿菌科

是一大群生物學(xué)性狀相似的革蘭氏陰性短小桿菌，有的為致病菌，多為腸道內(nèi)正常菌群，可引起醫(yī)院感染。條件致病菌臨床可查到四十種以上。

包括——埃希菌屬——志賀菌屬——沙門菌屬

——耶爾森菌屬

——變形桿菌屬——克雷伯菌屬——摩根菌屬——枸櫞酸菌屬——腸桿菌屬——沙雷菌屬等致病菌腸道正常菌群條件致病菌醫(yī)院感染腸道桿菌共同特點(diǎn)形態(tài)結(jié)構(gòu)

G—小桿菌，鈍圓桿菌，無(wú)芽孢，多數(shù)有鞭毛及菌毛培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧營(yíng)養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基可生長(zhǎng)，菌落相似，形成灰白色中等大小S型菌落。腸道選擇培養(yǎng)基：

EMB（伊紅——美蘭培養(yǎng)基），乳糖、伊紅、美蘭選擇作用（弱選）大腸埃希菌（非致病菌）乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸伊紅結(jié)合美蘭形成紫藍(lán)色金屬光澤化合物有色的乳糖發(fā)酵菌落傷寒沙門菌等（致病菌）乳糖不發(fā)酵伊紅美蘭不能結(jié)合無(wú)色的乳糖不發(fā)酵菌落SS培養(yǎng)基（沙門志賀培養(yǎng)基）乳糖、中性紅指示劑、膽鹽、煌綠等抑制劑選擇抑制作用（強(qiáng)選）大腸埃希菌產(chǎn)酸桃紅色乳糖發(fā)酵菌落傷寒沙門菌無(wú)色乳糖不發(fā)酵菌落膽鹽、煌綠：抑制大腸埃希菌及G+菌，提高腸道致病菌檢出率乳糖發(fā)酵中性紅呈紅色乳糖不發(fā)酵生化反應(yīng):活躍，常用于鑒別腸道桿菌。發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣，氧化酶（-），觸媒（+），還原硝酸鹽抵抗力：不強(qiáng)。耐受膽鹽，抵抗多種染料的抑菌作用抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜菌體（O）抗原鞭毛（H）抗原表面（K、Vi）抗原易出現(xiàn)各種變異：耐藥性

初步鑒定到科的特征葡萄糖發(fā)酵（+）硝酸鹽還原（+）氧化酶（-）鄰單胞菌屬除外觸酶（+）痢疾志賀菌除外某些最終尚需血清學(xué)鑒定到型硝酸鹽還原試驗(yàn)

陽(yáng)性：紅色陰性：淡黃色

氧化酶試驗(yàn)

陽(yáng)性：紫紅色

陰性：無(wú)色第三節(jié)非發(fā)酵革蘭陰性桿菌是一大群不發(fā)酵葡萄糖或以氧化形式利用糖、需氧或兼性厭氧、無(wú)芽孢的革蘭陰性桿菌。非發(fā)酵菌主要種類銅綠假單胞菌不動(dòng)桿菌屬產(chǎn)堿桿菌屬莫拉菌屬黃桿菌屬嗜麥芽假單胞菌屬熒光假單胞菌屬等非發(fā)酵菌主要特點(diǎn)氧化酶：＋；不動(dòng)桿菌屬除外O/F試驗(yàn)：O/－動(dòng)力試驗(yàn)：多數(shù)有鞭毛，但半固體動(dòng)力試驗(yàn)不明顯，常采用鏡檢或鞭毛染色（不動(dòng)桿菌、黃桿菌屬和莫拉菌屬除外）葡萄糖氧化發(fā)酵試驗(yàn)（O/F）

O/F培養(yǎng)基（半固體高層）指示劑：溴麝香草酚藍(lán)培養(yǎng)基pH：7.0O/F：OO/F：F葡萄糖氧化發(fā)酵試驗(yàn)（O/F）O/F：OO/F：FO/F：－腸道桿菌、非發(fā)酵菌、弧菌科鑒別鑒定試驗(yàn)?zāi)c桿菌科非發(fā)酵菌弧菌科氧化酶－＋＋葡萄糖氧化/發(fā)酵（O/F）FO／－F鞭毛周鞭毛單、叢、周單、叢菌屬氧化酶葡萄糖O/F動(dòng)力觸媒硝酸鹽還原麥康凱上生長(zhǎng)假單胞菌屬+O/-+++/-+不動(dòng)桿菌屬-O/--+-+產(chǎn)堿桿菌屬+-+++/-+莫拉菌屬+--++/-+黃桿菌屬+O/F-+-+/-

非發(fā)酵菌主要菌屬的生化反應(yīng)非發(fā)酵菌－－檢驗(yàn)程序標(biāo)本增菌分離培養(yǎng)（血平板、麥康凱）可疑菌落涂片染色鏡檢血標(biāo)本涂片動(dòng)力觀察革蘭染色鞭毛染色氧化酶O/F硝酸鹽還原KIA斜面底層不變色其他生化反應(yīng)非發(fā)酵菌－－檢驗(yàn)程序標(biāo)本增菌分離培養(yǎng)（血平板、麥康凱）可疑菌落涂片染色鏡檢血標(biāo)本涂片動(dòng)力觀察革蘭染色鞭毛染色氧化酶O/F硝酸鹽還原KIA斜面底層不變色其他生化反應(yīng)銅綠假單胞菌－－檢驗(yàn)程序標(biāo)本增菌分離培養(yǎng)（血平板）最后鑒定可疑菌落（性狀、色素）初步鑒定涂片染色鏡檢血標(biāo)本涂片鏡檢氧化酶菌落特征綠膿素氣味色素鑒定生化反應(yīng)42℃生長(zhǎng)分型O/F：O枸櫞酸鹽利用＋精氨酸雙水解＋明膠液化＋一、假單胞菌屬假單胞菌科細(xì)菌根據(jù)rRNA-DNA同源性分為5群，其中Ⅰ群屬于假單胞菌屬，共7種細(xì)菌，代表菌種為銅綠假單胞菌。多為條件致病菌，是醫(yī)院感染的主要病原菌假單胞菌屬共同點(diǎn)革蘭陰性桿菌，無(wú)芽孢、無(wú)莢膜，單或叢鞭毛專性需氧營(yíng)養(yǎng)要求不高氧化酶：＋O/F：OMac生長(zhǎng)：＋觸酶陽(yáng)性，有的產(chǎn)生水溶性色素銅綠假單胞菌－－形態(tài)染色革蘭陰性桿菌，無(wú)芽孢、無(wú)莢膜，單或叢鞭毛銅綠假單胞菌－－培養(yǎng)特性專性需氧、營(yíng)養(yǎng)要求不高最適溫度35℃，20-42℃生長(zhǎng)，4℃不生長(zhǎng)產(chǎn)生熒光素和藍(lán)綠色水溶性的綠膿素，培養(yǎng)物呈藍(lán)綠色。培養(yǎng)物有生姜?dú)馕丁?/p>

銅綠假單胞菌菌落特征（普通瓊脂平板）

銅綠假單胞菌菌落特征（MAC）銅綠假單胞菌－－菌落特征典型菌落：扁平濕潤(rùn)，邊緣不規(guī)則，常呈融合狀態(tài)，培養(yǎng)基綠色黏液型菌落：菌落凸起，呈粘液狀在血平板上形成透明溶血環(huán)在SS、Mac上形成不發(fā)酵乳糖菌落銅綠假單胞菌－－生化反應(yīng)氧化酶＋O/F：O枸櫞酸鹽利用＋，還原硝酸鹽精氨酸雙水解＋明膠液化＋氧化酶試驗(yàn)（＋）銅綠假單胞菌－－抗原結(jié)構(gòu)和抵抗力抗原結(jié)構(gòu)

O抗原：包括外膜蛋白和脂多糖

H抗原抵抗力：對(duì)外界環(huán)境抵抗力強(qiáng)對(duì)多種抗生素不敏感銅綠假單胞菌－－臨床意義致病物質(zhì)：內(nèi)毒素、外毒素、胞外酶、菌毛、多糖莢膜、綠膿菌素所致疾病

條件致病菌，經(jīng)多種途徑傳播，抵抗力低下時(shí)易感

醫(yī)院感染的重要病原菌

大面積燒傷創(chuàng)面感染的重要病原菌細(xì)菌耐藥機(jī)制外膜通透性降低產(chǎn)生滅活酶或鈍化酶主動(dòng)外排系統(tǒng)將抗生素泵出胞外抗菌藥物作用靶位改變本菌對(duì)氨芐西林、安美汀、四環(huán)素、優(yōu)力新、一、二代頭孢菌素、頭霉素、大環(huán)內(nèi)酯類、磺胺等天然耐藥。各種抗生素治療銅綠假單胞菌所致感染過(guò)程中都可能發(fā)生耐藥。銅綠假單胞菌－－檢驗(yàn)程序標(biāo)本增菌分離培養(yǎng)（血平板）最后鑒定可疑菌落（性狀、色素）初步鑒定涂片染色鏡檢血標(biāo)本涂片鏡檢氧化酶菌落特征綠膿素氣味色素鑒定生化反應(yīng)42℃生長(zhǎng)分型O/F：O枸櫞酸鹽利用＋精氨酸雙水解＋明膠液化＋銅綠假單胞菌－－檢驗(yàn)方法顯微鏡檢查：標(biāo)本直接涂片革蘭染色鏡檢；鞭毛染色鏡檢培養(yǎng)：標(biāo)本接種血平板、Mac平板分離培養(yǎng)，血標(biāo)本先增菌，再轉(zhuǎn)種鑒定：

初步鑒定：菌落特征、水溶性綠色色素、生姜?dú)馕?、氧化酶、O/F

全面鑒定：色素不典型者需全面鑒定銅綠假單胞菌－－分型檢查血清學(xué)分型噬菌體分型質(zhì)粒指紋圖譜分析脈沖場(chǎng)凝膠電泳分型檢查意義：對(duì)醫(yī)院感染的流行病學(xué)調(diào)查有重要意義銅綠假單胞菌的鑒定要點(diǎn)及與其他假單胞菌的區(qū)別

試驗(yàn)銅綠假單胞菌熒光假單胞菌惡臭假單胞菌斯氏假單胞菌嗜麥芽假單胞鼻疽假單胞菌類鼻疽假單胞氧化酶＋＋＋＋＿＋/＿＋熒光素＋/＿＋＋/＿＿＿＿＿青膿素＋/＿＋/＿＋/＿＿＿＿＿動(dòng)力＋＋＋＋＋＿＋葡糖氧化＋＋＋＋＋＋＋乳糖氧化＿＋＿＿＋＋＋蔗糖氧化＿＋＿＿＋＋＋木糖氧化＋＋＋＋＋＿＋賴氨酸脫羧酶＿＿＿＿＋＿＿精氨酸水解酶＋＋＋＿＿＋＋硝酸鹽還原＋/＿＿/＋＿＋＿＿＋明膠液化＿/＋＋＿＿＋＿＋42℃生長(zhǎng)＋＿＿＋/＿＋/＿＿＋六、克雷伯菌屬（7個(gè)種）肺炎克雷伯菌（3個(gè)亞種）的肺炎亞種，俗稱肺炎桿菌，與人類感染有關(guān)G-球桿菌，無(wú)動(dòng)力，有較厚的莢膜，多有菌毛普通平板呈M型菌落（易拉成絲）存在正常人體，目前為除大腸埃希菌以外最重要的條件致病菌?？死撞鷮勹b別菌落較大，粘稠，挑取時(shí)易拉成絲。無(wú)動(dòng)力對(duì)氨卞西林和羧卞西林天然耐藥。莢膜腫脹試驗(yàn)肺炎克雷伯菌的菌落特征（MAC）肺炎克雷伯菌粘絲試驗(yàn)肺炎克雷伯菌KIA（AA＋＋）、MIU（－－＋）

肺炎克雷伯菌IMViC試驗(yàn)（－－＋＋）克雷伯菌屬的細(xì)菌多感染免疫力低下的人群，是醫(yī)院感染中最重要的條件致病菌。所致疾?。悍窝住⒛X膜炎、腹膜炎、泌尿系統(tǒng)感染、敗血癥臨床意義

肺炎克雷伯菌易產(chǎn)生超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBL），近年來(lái)文獻(xiàn)報(bào)道我國(guó)產(chǎn)酶率已達(dá)30%左右，產(chǎn)酶株對(duì)青霉素類、第1、2、3代頭孢菌素及單環(huán)β-內(nèi)酰胺類抗生素均產(chǎn)生耐藥，而僅對(duì)頭霉素類、碳青霉烯類及酶抑制劑敏感。ESBL檢測(cè)現(xiàn)已作為醫(yī)院細(xì)菌室常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目。

膿汁、痰液、尿液腦脊液、血液分離培養(yǎng)（血液瓊脂、麥康凱瓊脂）增菌培養(yǎng)直接涂片革蘭染色挑選可疑菌落生化反應(yīng)初步鑒定KIA：底層、斜面不變硝酸鹽還原、氧化酶、動(dòng)力最后鑒定35℃18~24h不動(dòng)桿菌屬及產(chǎn)堿桿菌屬檢驗(yàn)程序其他革蘭陰性苛養(yǎng)菌嗜血桿菌屬鮑特菌屬軍團(tuán)菌屬布魯菌屬一、嗜血桿菌屬G-小桿菌，多形性有毒菌株形成莢膜培養(yǎng)基中需加入血液，以提供X因子和V因子（巧克力色培養(yǎng)基）

X因子－－血紅素

V因子－－輔酶Ⅰ或輔酶Ⅱ菌落光滑、無(wú)色透明、露滴狀CO2培養(yǎng)“衛(wèi)星現(xiàn)象”衛(wèi)星現(xiàn)象流感嗜血桿菌與金黃色葡萄球菌在血平板上共同孵育時(shí)，由于后者能合成較多的V因子，在金黃色葡萄球菌菌落周圍生長(zhǎng)的流感嗜血桿菌的菌落較大，離金黃色葡萄球菌菌落越遠(yuǎn)的越小。根據(jù)莢膜抗原分ABCDEF六型，B型毒力最強(qiáng)所致疾病

原發(fā)感染：腦膜炎、鼻咽炎等，多見(jiàn)于兒童

繼發(fā)感染：鼻竇炎等，多見(jiàn)于成人

敏感藥物：氨芐西林、阿莫西林首選微生物學(xué)檢查

標(biāo)本（腦脊液、痰、血液、膿液）涂片染色鏡檢分離培養(yǎng)鑒定試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告G-性桿菌多形性“衛(wèi)星現(xiàn)象”檢出流感嗜血桿菌鑒定依據(jù)革蘭陰性小桿菌、多形性培養(yǎng)采用巧克力色培養(yǎng)基，CO2培養(yǎng)血平板上有“衛(wèi)星現(xiàn)象”X、V因子需求試驗(yàn)菌名生長(zhǎng)需要X因子V因子流感＋＋副流感－＋檢驗(yàn)方法X因子V因子需要試驗(yàn)流感嗜血桿菌副流感嗜血桿菌

二、鮑特菌屬G—小桿菌，兩極濃染，有莢膜和菌毛，多無(wú)鞭毛和芽胞專性需氧，營(yíng)養(yǎng)要求較高，常用鮑—金培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，生長(zhǎng)緩慢，3-5天細(xì)小灰色不透明、帶珠光完全溶血菌落致病物質(zhì)包括莢膜、菌毛及多種毒素百日咳毒素絲狀血凝毒素腺苷酸環(huán)化酶毒素氣管細(xì)胞毒素皮膚壞死毒素細(xì)菌附著纖毛上皮細(xì)胞，引起其壞死脫落，使其運(yùn)動(dòng)受抑制，促進(jìn)黏液分泌，但不能及時(shí)排出，局部炎癥、缺血、壞死，引起劇烈陣發(fā)性痙咳傳染源：早期病人、帶菌者傳播途徑：飛沫傳播潛伏期：1-2周病程分三期：（兒童易感）卡他期：低熱、輕咳，1-2W（傳染性強(qiáng)）痙攣期：陣發(fā)性痙咳，吸氣吼聲，10-20次/天（1-6W）恢復(fù)期：陣咳減輕，可有繼發(fā)感染，肺炎、中耳炎等實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本采取用咳碟法病后牢固免疫力白—百—破三聯(lián)疫苗（DPT），治療首選紅霉素三、軍團(tuán)菌屬絕大多數(shù)病例由嗜肺軍團(tuán)菌引起，是引起軍團(tuán)菌病的病原體首發(fā)于1976年的美國(guó)一次軍人聚會(huì)，故稱作軍團(tuán)病1982年,在我國(guó)南京首次證實(shí)了軍團(tuán)菌病。形態(tài)染色革蘭陰性，但不易被著色桿菌，形態(tài)有多形性Gimenen染色，菌體呈紅色，背景為綠色不形成芽孢，無(wú)莢膜有端生或側(cè)生鞭毛

嗜肺軍團(tuán)菌革蘭染色培養(yǎng)特性營(yíng)養(yǎng)要求高專性需氧需2.5～5％CO2生長(zhǎng)緩慢。3-5天常用培養(yǎng)基及菌落特征

BCYE培養(yǎng)基：灰白色、圓形光滑濕潤(rùn)菌落

F-G培養(yǎng)基：針尖大小、紫外線下發(fā)出黃色熒光軍團(tuán)菌菌落形態(tài)(BCYE瓊脂培養(yǎng)基)抗原結(jié)構(gòu)Ｏ抗原：具有型特異性軍團(tuán)菌病約90%的是由嗜肺軍團(tuán)菌所致,已發(fā)現(xiàn)15個(gè)血清型，其中以Lp1血清型最常見(jiàn),Lp6次之。抵抗力分布廣泛、抵抗力強(qiáng)水中存活時(shí)間長(zhǎng)，蒸餾水100天，下水道污水可存活一年軍團(tuán)菌病的主要污染源是供水系統(tǒng)及冷卻塔和空調(diào)系統(tǒng)

定期清洗空調(diào)預(yù)防軍團(tuán)菌病臨床意義致病物質(zhì)：內(nèi)毒素、外毒素、侵襲性酶?jìng)魅就緩剑汉粑溃ㄎ牒熊妶F(tuán)菌的氣溶膠）所致疾病：軍團(tuán)菌病肺炎型非肺炎型（類似感冒）免疫性：感染者血清中出現(xiàn)特異性IgG、IgM抗體大環(huán)內(nèi)酯類、喹諾酮類有效。對(duì)青霉素、頭孢類無(wú)效微生物學(xué)檢查標(biāo)本（痰、支氣管分泌物、血液、）涂片染色鏡檢（Gimenen染色）分離培養(yǎng)（BEYE瓊脂）鑒定試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告形態(tài)染色菌落特征氧化酶、觸酶熒光抗體染色等血清學(xué)試驗(yàn)檢測(cè)指標(biāo)：檢測(cè)患者血清中特異性抗體方法：ELISA意義：檢測(cè)特異性IgM：診斷軍團(tuán)菌病檢測(cè)特異性IgG：軍團(tuán)菌病流行病學(xué)調(diào)查四、布魯菌屬羊布氏桿菌（主要）牛布氏桿菌豬布氏桿菌犬布氏桿菌（少見(jiàn)）引起布魯菌?。ú顭幔┛梢鹑诵蠊不疾∥覈?guó)流行菌種主要是羊、牛、豬布魯菌，以羊布魯菌最常見(jiàn)屬細(xì)胞內(nèi)寄生菌生物學(xué)性狀1、G—短小球桿菌，無(wú)芽孢，無(wú)鞭毛；2、需氧菌，初次分離需5-10%CO2，營(yíng)養(yǎng)要求較高，常用肝浸液培養(yǎng)基。生長(zhǎng)較緩慢，5-7天微小灰色菌落，無(wú)生長(zhǎng)30天報(bào)結(jié)果，不溶血。3、生化反應(yīng)多數(shù)氧化酶、觸酶：＋氧化分解葡萄糖多數(shù)還原硝酸鹽分解尿素（脲酶活性：豬>羊>牛）4、抗原與分型，A抗原和M抗原，不同菌含量不同可供鑒別菌種A抗原：M抗原羊布魯菌1：20牛布魯菌20：1豬布魯菌2：15、抵抗力強(qiáng)

內(nèi)毒素——致病作用（發(fā)熱、白細(xì)胞↑、肝脾腫大等）由于反復(fù)菌血癥，使病人熱型呈波浪狀發(fā)熱時(shí)，血培養(yǎng)陽(yáng)性率高（70%）易轉(zhuǎn)為慢性，引起全身遷延性病變，較難根治。7.免疫性:胞內(nèi)寄生菌，以細(xì)胞免疫為主6.致病物質(zhì)：莢膜、侵襲性酶和內(nèi)毒素微生物學(xué)檢查及防治原則分離培養(yǎng)與鑒定急性期——血其它期——骨髓血清學(xué)試驗(yàn)（測(cè)抗體，病后2周不完全抗體，3周出現(xiàn)IgG抗體）皮膚試驗(yàn)（超敏反應(yīng)）高危人群需接種減毒活疫苗治療首選強(qiáng)力霉素，用藥4-6周

三、沙門菌屬

是腸桿菌科中最復(fù)雜的菌屬，有2000種以上血清型

對(duì)人類有致病性腸熱癥——傷寒沙門菌，甲型副傷寒沙門菌、乙型傷寒沙門菌、丙型傷寒沙門菌食物中毒——鼠傷寒沙門菌、豬霍亂沙門菌、腸炎沙門菌敗血癥——豬霍亂沙門菌最常見(jiàn)生物學(xué)性狀形態(tài)染色符合腸桿菌特點(diǎn)，多為周毛菌，有菌毛傷寒桿菌的周身鞭毛培養(yǎng)特性EMB、SS上呈無(wú)色透明乳糖不發(fā)酵菌落麥康凱培養(yǎng)基上的傷寒桿菌菌落

EMB培養(yǎng)基，上為E.coli，下為傷寒桿菌生化反應(yīng)乳糖（-），葡萄糖（+）/+，多數(shù)H2S+，動(dòng)力+，尿素（-），甲基紅（+），枸櫞酸鹽利用（+），賴氨酸脫羧酶（+），產(chǎn)酸產(chǎn)氣抗原結(jié)構(gòu)O抗原——特異性低、穩(wěn)定、分群（組）H抗原——特異性高，不穩(wěn)定，分型Vi抗原（毒力抗原）——不穩(wěn)定，可阻止“O”凝集抵抗力：不強(qiáng)傷寒沙門菌KIA（KA－＋）MIU（＋－－）沙門菌IMViC試驗(yàn)（－＋－－）致病性與免疫性致病物質(zhì)侵襲力菌毛——吸附Ⅲ型分泌系統(tǒng)——穿入細(xì)胞，擴(kuò)散Vi抗原——微莢膜（抗吞噬）內(nèi)毒素外毒素——個(gè)別（鼠傷寒沙門菌）產(chǎn)生，與ETEC腸毒素相似所致疾病菌毛穿入淋巴液胸導(dǎo)管第二次菌血癥遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)腸壁壞死、潰瘍高熱、肝脾腫大、玫瑰疹、白細(xì)胞↓等全身中毒癥狀肝脾腎淋巴結(jié)膽囊尿排菌糞便排菌發(fā)病期（1-4W）潛伏期2W腸熱癥傷寒沙門菌等經(jīng)口吸附小腸黏膜細(xì)胞上在腸壁、腸系膜淋巴組織中繁殖（致敏）血流（第一次菌血癥）腸出血、腸穿孔腸熱癥臨床過(guò)程潛伏期2W發(fā)病初期：第1W（第一次菌血癥）、高熱、肝脾腫大、皮疹、WBS↓等全身中毒癥狀，此期血液（80%）、骨髓90%（+）有大量細(xì)菌胃腸炎（食物中毒）潛伏期短，6-24h，起病急，病程短2-4天，發(fā)熱、惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉敗血癥經(jīng)口感染，經(jīng)腸道入血，敗血癥癥狀明顯而腸道癥狀不明顯帶菌者健康帶菌者，恢復(fù)期帶菌者免疫性腸熱癥，病后免疫牢固，其它可重復(fù)感染微生物學(xué)檢查與防治分離培養(yǎng)與鑒定標(biāo)本采取腸熱癥：第1-2W，血、骨髓；第2-3W，糞便、尿食物中毒：糞便、嘔吐物、可疑食物敗血癥：血帶菌者：糞便分離鑒定：增菌（血、骨髓）→EMB、SS→生化反應(yīng)→血清鑒定沙門菌檢驗(yàn)程序

、

血清學(xué)診斷——肥達(dá)反應(yīng)（Widal）原理用已知傷寒沙門氏菌O抗原及H抗原，以及引起副傷寒的沙門氏菌H抗原與待檢血清作凝集試驗(yàn)，測(cè)定待檢血清中有無(wú)相應(yīng)抗體及其效價(jià)。（TO、TH、PA、PB）方法：試管凝集法（定量）TO≥1：80，TH≥1：160，PA、PB均≥1：80才有意義動(dòng)態(tài)觀察：雙份血清抗體四倍升高有診斷意義肥達(dá)反應(yīng)(Widaltest)O凝集（1:20～1:1280，效價(jià)1:80）H凝集（1:20～1:1280，效價(jià)1:320）臨床意義

O抗體（IgM），H抗體（IgG）O、H抗體均升高，患傷寒的可能性大O、H抗體不升高，患傷寒的可能性小只有H升高，則可能是預(yù)防接種過(guò)或非特異性回憶反應(yīng)，只有O升高而H不高，則可能是感染早期或其他沙門菌的交叉反應(yīng)。沙門菌檢驗(yàn)程序

、

彎曲菌檢驗(yàn)程序

微需氧菌彎曲菌G-菌體彎曲呈S形或螺旋狀，常2-3個(gè)菌連接排列，單毛/雙毛菌，運(yùn)動(dòng)活潑（螺旋樣運(yùn)動(dòng)——特征）微需氧，（5%O2+10%CO2+85%N2）37℃生長(zhǎng)，42℃選擇性好，營(yíng)養(yǎng)要求高，生化反應(yīng)不活潑空腸彎曲菌——細(xì)菌性胃腸炎（經(jīng)口＞104感染）胎兒彎曲菌——腸外感染（心內(nèi)膜炎、血栓性靜脈炎，關(guān)節(jié)炎等）海鷗彎曲菌——尿路感染簡(jiǎn)潔彎曲菌——牙周炎彎曲菌檢驗(yàn)程序

幽門螺桿菌G—

，菌體彎曲呈螺旋型、S形、海鷗形，有鞭毛（從毛菌）微需氧，營(yíng)養(yǎng)要求高，生化反應(yīng)不活躍，但尿素酶豐富——快速脲酶實(shí)驗(yàn)強(qiáng)陽(yáng)性（主要鑒定依據(jù)）慢性胃炎胃潰瘍胃癌胃黏膜相關(guān)B細(xì)胞淋巴瘤本菌檢出率很高（80-100%）幽門螺桿菌檢驗(yàn)程序

五、鼠疫耶氏菌

屬腸桿菌科耶爾森菌屬，俗稱鼠疫桿菌，是我國(guó)法定烈性傳染病鼠疫的病原體歷史：三次世界性大流行目前：仍有散在及爆發(fā)（死亡率10-30%）監(jiān)控：是我國(guó)重點(diǎn)監(jiān)控的自然疫源性傳染病1、生物學(xué)性狀

形態(tài)染色：G—球桿菌，兩極濃染，有莢膜，無(wú)鞭毛，無(wú)芽胞，慢性病灶，陳舊培養(yǎng)物，高鹽培養(yǎng)基上呈多形性?？乖瓨?gòu)造復(fù)雜F1抗原——莢膜抗原V/W抗原——毒力抗原外膜蛋白——突破防御、增強(qiáng)致病性鼠毒素（外毒素）——對(duì)鼠類有劇烈毒性內(nèi)毒素——發(fā)熱、休克、DIC等抵抗力對(duì)理化因素抵抗力弱，但在自然環(huán)境中存活時(shí)間長(zhǎng)2、致病性與免疫性致病物質(zhì)F1、V/W、外膜抗原、鼠毒素、內(nèi)毒素等，實(shí)質(zhì)器官出血性炎癥、組織壞死及全身中毒癥狀，該菌毒力強(qiáng)，少量細(xì)菌即可致病所致疾病