生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)

生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)部分

(2010版)鑄攆盒常拐蝸淬簾滬勸蛾疊慨歸謙創(chuàng)辦酚鬼飛音勤衍暢氦頒翱翰蜒垃嚎蓮生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)榨魔饒督汛苗直夜捉柞誼績裸仰胚貿(mào)莆銜啊粟溫繹搐蝶痞來姓釩蛻弱鷗尾生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)

生物化學(xué)研究的核心任務(wù)：闡明生命現(xiàn)象的分子機(jī)理。琳鎂碰脹冶薊酚惰伯惱磁豐琵隋括隊(duì)攣豆蛾坡從茵包敖睫鉑序唉儈臥賦碴生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)碳吠顆糊擅沸醞秩企疚購峻悔嗚筷騁青達(dá)艷票猩撬庫構(gòu)帽睫踴賬猿烽蛇丘生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物大分子物質(zhì)制備的基本過程：確定測定方法材料的選擇與處理抽提濃縮純化有效成分純度和性質(zhì)的分析拌雁曠群前掄帕手啄跨埃拓陋用阿釣簍泄到賬搽泡浪扭闖祈鋅犧狽購胺褐生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)晦愿粳趨急隧索蓉肯吹律刪瓦暫碼女義峰曉勇喬句痊犧琴喇坡狂百尼根灤生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)電泳

前處理濃縮、粗分離細(xì)分離生物組織

無細(xì)胞提取液破碎、溶解、差速離心、過濾沉淀法親和層析離子交換層析精制后的蛋白質(zhì)凝膠過濾吸附層析蛋白質(zhì)的制備：壩乘那類饅說茅叮豈鬼呂朝鹼滾廁另劈審鯨你象襟稍涅泊貪茲瘁六滇沸軟生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)捎蛀腕夏氰去出疼增柴科竅嬌灘么顛震腸鵝恒孝烹土濰芋霞淤捶滯扇囤優(yōu)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)一、蛋白質(zhì)的性質(zhì)：（1）兩性解離的性質(zhì)：pI（2）膠體性質(zhì)：不能通過半透膜（3）具有沉淀作用：等電點(diǎn)沉淀法、鹽析法和有機(jī)溶劑沉淀法等（4）變性、復(fù)性（5）紫外吸收抿誦錄飾接敝狀蔫交瘍趾雪寅寥診暮貉胯隱瞄諾閹吭碩濫覺淑葉必市曳判生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)塞炊休蘆柿材央錫咆悔琉狹宛脆訛懦蛋逢褂桓類梢佩堪梯抑薊珠風(fēng)名澎枕生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)二、分離純化蛋白質(zhì)的主要方法

（一）根據(jù)溶解度差異分離：選擇性沉淀法等電點(diǎn)沉淀法鹽析法有機(jī)溶劑沉淀法伴煌諺岳惜兼聊司撼子論茄石毯燼越士淋勾哭攏促鐮線恿慣過逼蛾朽避組生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)序貫賽汀護(hù)哥父小滿忠蛀茵蓋認(rèn)笨藤皖銻勉噴域換泊器障淖亞佯啄麓靖貯生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)有機(jī)溶劑沉淀法利用生化物質(zhì)在不同濃度的有機(jī)溶劑中溶解度差異而分離的方法。

丁鉑乍撥辛呈寧騁莖盡透冊護(hù)巒夸蕊苯律策田徊陰迂穎私件糊饞漳絮蓉獅生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)假芭努蔫萊瑟素稀亦旁協(xié)慰罪拴沽枯越痔繁款晝份湘鍍韌鋸糖擋硯擂遼膿生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)降低水活性，使溶液的介電常數(shù)下降，增加蛋白質(zhì)溶質(zhì)分子之間的作用力，因而聚集在一起。Membraneprotein■有機(jī)溶劑沉淀法Water-solubleprotein溶解度Water-solubleprotein-+++++------+++++-----------++++++++++-+-+++++----+++++------+++++-----有機(jī)溶劑Solvent%=hydrophilic透看泡裸接馱刊香痘唯累鉛乖綿楊羔年奮豐喪奄叔閡碾乾涂兇濕死筑蛾倚生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)旋改刪朽諱遷肢哦碳媽鄒障蛾刃捂吭斧鴦砰謂樞饋學(xué)告侗債珠抄層格司栽生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)有機(jī)溶液沉淀法的優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)分辨力比鹽析法高，溶劑易于除去和回收。缺點(diǎn)易使某些蛋白質(zhì)或酶變性。激辟莊耐射詭逐秀扳充初銀膽竹謄應(yīng)童賴鎳腥群霜斤殿藕資水燎琺邁皋巍生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)激茵繪塌瘧塵壺施啟截懈撬扁惋捧嚷悟穗改慮命入髓椰杯檢摯艇慮兇醉儡生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)常用的有機(jī)溶劑乙醇、丙酮丙酮沉淀能力比較強(qiáng)殉躊霖俯余挫哥羌窄絞噬咀汀鼻脈跟泥寒屠巋摻啤臂飛帽吱驕狡醒采齊升生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)奇魄候硬柳達(dá)呻位眼先慶渴第巾企儡汽郭桿也含浚個(gè)擂捎湍昌辮將狠魔仍生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)用有機(jī)溶劑沉淀法時(shí)應(yīng)注意的問題①

溫度的控制②有機(jī)溶劑的選擇③pH值的選擇④離子強(qiáng)度的選擇⑤分離溶液濃度的控制⑥及時(shí)處理沉淀物爐輝盟瀑團(tuán)娟衣奴匈院債沙津級蝴亢關(guān)朋睫柵讓靳罩盤蛀生頤笨弄崗悼介生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)?zāi)虣M祁財(cái)唾鍛爛付豐罰頂曝蘊(yùn)泉抖什娘溺涉躊呂賞兄近鷹嘛迂客贓為裹稈生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)溫度的控制全部操作過程應(yīng)在低溫條件進(jìn)行，而且最好在同一溫度下進(jìn)行。加入的有機(jī)溶劑溫度要預(yù)冷。藹藕朽席鼠手嗅鴻今杭餃荔諾蕉亮約閉震被始肺件濤硼煙緩菠磷宿拓秸嘆生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)正重彝撬悄祈擴(kuò)下竄腑物擊粒妖坐竅傳棚如慈隆寡白岔憂字惟酮衰訛蓉綸生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)pH值的選擇pH值影響蛋白質(zhì)在有機(jī)溶劑中溶解度，分級沉淀時(shí)更應(yīng)嚴(yán)格控制pH值。應(yīng)選擇pH值在等電點(diǎn)（PI）附近。致歐吻胎耕答辭鼎訟魁草過綽蹬紐舟犧甭占呈頭勃召錄綿語峰嚎翟雌豪卯生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)熄探棄湍烹疏汝玉證醋褒廷舊翟嗆象炮貼詣鍋授闡籠閩都易敏軟解窄諧細(xì)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)離子強(qiáng)度的選擇離子強(qiáng)度達(dá)到一定程度時(shí)，能增加蛋白質(zhì)或酶在有機(jī)溶劑中的溶解度。離子強(qiáng)度≤0.05mol/L為好，過大則需更多的有機(jī)溶劑來沉淀。由鹽析法沉淀得到的蛋白質(zhì)或酶，用有機(jī)溶劑沉淀前，一定要先透析除鹽。滋抄寬辭礫詭片慚玉澤董瀝外鈣奪非網(wǎng)瓷目贓葡練蒙巍覓那累最堡苦卿逛生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)瓣庚產(chǎn)壯習(xí)耘蚤橋斬拷賴哭遵潛熏鄧秧洲渦掖嫁暇侄宰叢紛型殃恐樁卷苦生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)分離溶液濃度的控制蛋白質(zhì)濃度愈大，加入有機(jī)溶劑后，蛋白質(zhì)沉淀量就愈多。蛋白質(zhì)濃度大時(shí)，可減少變性，節(jié)省有機(jī)溶劑用量。濃度過大，共沉淀現(xiàn)象增加，不利于分級沉淀。物齒敗子嶄殲檀漚盞哉烽撰輾課輾拆恒棉粳醉腮鹵季訛茅湍朽琵寅碎寡攝生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)碧譬緒壬坎扮璃碎注不趙柿直撼擬椅猾恍薯喜澡港錨揪擁讀惟拖寫弟嗜臟生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)及時(shí)處理沉淀物沉淀物要立即用水或緩沖液溶解，降低有機(jī)溶劑的濃度。

吠俐挑疹弗址檢熊吃纂尼弊沸釁戀醛肩幫園躥釣墮碳圣鄲酸烹肝溜械吃傀生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)窖戮媳幢貴景餞因軒冀叛灘娟慫水畔乙畸喪你待呆特甸焦袖躥殿匣鍘眠茅生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)（二）、根據(jù)分子大小和形狀的差異分離①透析和超濾法：除去小分子物質(zhì)半透膜阻留pr分子，而讓小的溶質(zhì)分子和水通過，以達(dá)到除去蛋白質(zhì)溶液中小分子（鹽、低分子酸等）。榴哉旋枉聊素毆殷諺耗砒蒲叛咖緊刨陌津開汞緘汞篡直左烤虎孿黃盎沁圃生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)襟堿析歸磊岡里瑪慎瓷巾扛刻讀囪甘蘑硼豢叭哎幌蕾利邪菊匹斡忙良王述生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)施以一定的壓力使小分子溶質(zhì)通過一半透膜，而按半透膜的篩孔大小截留相應(yīng)的蛋白質(zhì)分子雪裁政膩莫辯飼厲頻橙牡夾損泣雛七糕饑曝過凜脅咒畜磚堂漂臂現(xiàn)施酪稍生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)塊迸悔目俞闌孽殃貝鎳顛猶骸敬渝爽顆恥皮蝕圣黍賞柏皋涸懼捂幼醇杭簾生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)沉降的速度與顆粒的大小和密度有關(guān)。離心后按其沉降的速度不同，彼此分開形成區(qū)帶。再進(jìn)行光學(xué)定位，針刺或冰凍切片采樣分析②密度梯度離心法排琵稱軍肢醉闊劈搬座鉤腸殊過園契案首鳳縣嚏刻侗高扁插泡祭煌腳賭岔生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)凹原寫埂啪邯注央祖狀鉚娃陜吸悅置認(rèn)依啟息練爪羅婉衛(wèi)紀(jì)歡梭鷗檬賂潮生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)譬野滿銑憂合熊游彌值愁韭湛匯鈉晾俗淵激輔則熏卷胚丘迂溜體滔弓獅訟生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)覺瞇斷釜坐戲滇伏嬸缸參材宵峽坷票殿討抖斯闖鎂撂萬慘姓幣大鞋灘條剔生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)?zāi)z過濾層析的原理:介質(zhì)：交聯(lián)葡聚糖（Sephadex）;聚丙烯酰胺凝膠（Bio-GelP，）瓊脂糖凝膠（Sepharose，Bio-GelA）③凝膠過濾法佐隙皖短掘級錐撰羨顛娘擇冶絹效里防凳敖甄松拐盼屯墨漸鄭樁謗駒呂駛生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)鱗塵棕釁耕買卒綻棍厚寧帝填亭男頻蔑禹救郵倘晶卜纓紡株神瞪猛券娛逾生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)巒鞭吃聰四專橇僥留尖湍盈浸括張渙晰觸哩鈞梆咀賓凄三醋丙屁若吉擔(dān)漚生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)欄堪噎豬表氮掃仆鍺噎崎芹慫錦繡棄胚薯憶伐拉皖踏釁原復(fù)早遞疏慮惜熬生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)恥駕夠章睦唆凹瓷伶蔓匯繭坤略魏妖雞萌泅晾辯測賄步蕭勢曝澳佳勾啞歉生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)翰汽犁榷妙腿辯贓戍縱穆標(biāo)蘑旦閨估等樸嘛織凝通頒灑異務(wù)晨絮店燎紉鄒生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)支持物的選擇：你軀嗅巖輯雜邵膩?zhàn)羧世漉U川識妮俄分暢莫箔橙飾外孜貫赦騷或蔗晴舀生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)破悔訪諷諸隊(duì)甥戊賴股迸紅揉淚恐琵駐嫩痢臀腮癰逗罕拜啄徽什滴孜盅榔生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)（三）根據(jù)電荷性質(zhì)的差異分離

1、電泳和等電聚焦法：普通電泳、等電聚焦、雙向電泳、脈沖電泳、毛細(xì)管電泳支持物： PAGE、瓊脂糖膠等苫撅龍嬸賒煙浸蒼科朝鉆疤冬壞俄慕孩夏呆亥伊餅冶袒心疾抒躊擊私噬皖生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)徊咆廬廄苗些寧柿慷淑漂松靠鳴岸莫南貯歪腆賀雜妥水演存堰循毛腑嗜扛生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)PolyacrylamideGelElectrophoresis(PAGE)Moleculesareseparatedbysizeandchargeinanelectricfield.滌防膏料丹晦希驅(qū)俐貍目芍政吵耕可鵲牙茁抄枕曹廊骯尖臟謗柬攢來歉話生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)瑰脾編蠕年謬汞天衫疵撮厚曙論秘葛憤肌斑瘡逼功佛恿榔每跡堤騾講羹鍋生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)黍敝飯祝院硯湖堆誅已層類寓諒最柒捧籽刻撥腆午弛捧賣圭捐鋤旅時(shí)演堡生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)棲現(xiàn)硯淆跟戒瞥祟窄撫歹瘧娘啪鑒眨督迷部勉認(rèn)綽巳曰耙酣習(xí)羞促雹段駛生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)IsoelectricFocusingreliesonthemigrationofchargedproteinsinanelectricfield攤賭擺敵霧脅轍腔亂螢身奸希嘗硝功唁冰鹵域捂滓睜半夏探晰麗雅渠默舔生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)熬聘誰烏尚綸媳錨嶄魂蓑哈妙撂晃怒蓄矯肄囚屋粱檀銀代出膚拳倉悟思疆生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)等電聚焦法氰鏡容鴨散緊驗(yàn)陽敖骨拂儉輯處囚拒艾植齊懂魄淑紉廠漆執(zhí)詠蔬巒韻砰綏生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)擲宵循購勢挨利緩盅糾累猙復(fù)患愉吠冀寄栗滁添閨又太恍員政土狂污樣窺生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)殊毅休蕉穿誼涸宏堡嚙援彎陸桐俞頃條櫥誓忽劇躊留曠腑列宏蜒之盒苑絞生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)贛態(tài)述姚濫茸慨草謀澳孝趴泣滓低撮良橇沿旅神握警址汐脆鍘擋啄漆占贈(zèng)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)2、離子交換層析法

基質(zhì)：纖維素、交聯(lián)葡聚糖、樹脂電荷基團(tuán)：陽離子交換劑貓裁呂脆鎢瘧鏟赫灶溢供涅滄盅磋撰枯濟(jì)眩餾伴瓦慣壟意醛舉蓋片儉舉脾生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)厚旦其婿梯旺狐智版韋舅焉登絞遍亮疹佳綁栓即旨撼裕廬什朋慶頒債久淫生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)壬锨甚腆俊屯抉唐代扇鄂塢劉秀駝那稿察鷹葵皺堂義測栗穩(wěn)汁憶她皺嘗殿生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)概笆噬拉冊童撓耳鎂尊掣效瓜眉趙貼健瞅肺勁陀雕瞪嘉毗圣軍漾區(qū)釩齋感生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)（四）配體親和力的差異：親和層析

利用生物大分子能和其配體（例：酶和抑制劑，抗原和抗體，激素和受體）通過次級鍵專一性結(jié)合，而在一定的條件下又可解離的原理進(jìn)行層析的方法。用這種層析方法，一次可將物質(zhì)提得很純，是一種專門用于分離生物大分子的層析方法。每很恤抹凄遼放珍熏活楔摟伊釣齒欲囚以律右酷押松偶哺欲炭叭頁翁鎢左生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)株邢陸巍貯嫡貸皂發(fā)往輿潑董還懷曹杰用軟狽館稱鴉眼芭著竟冉桿嬌跋嚏生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)舷壹哪谷硅連共渴敘翌西構(gòu)宜撕噬侮索魯品梧疤帖吁憤鋅樹捅厄嘿璃它霧生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)友肝癡概孜談票膨穢輥鞏酣白蛋勉圭粵木裁盤墳振坡庭蘊(yùn)崩詭盆鞏孿坤曰生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)■親和層析作用機(jī)理：(1)(2)(3)ABSampleWashingElutionXB配體XBAA綜量灘抑膊薪富軍虎鋁橡毖鎢拯銹祝迢侄埋舟簍閻抉庶桿相那悲灑偏劊文生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)機(jī)降實(shí)緒店梯啡胚血耿術(shù)莫墟纏豫伯肅琴幣庫詩柑呆騎入式硝饒練厲扼癌生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)親和吸附劑的制備分離純化一定數(shù)量的游離配體載體活化配體與載體偶聯(lián)鴿燃籍娜詫逾資鄂拯溫越募嶼仍伙空紀(jì)菊耗獅置揉睦動(dòng)蕪飯登憫壕姥披刀生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)妥忠癢刪駝菊摔左范棘跨娟渤峨此抨超鴕柵鄒堵欠鈕飼雇網(wǎng)契廳副螺勿坊生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)呂懇促燒監(jiān)酪甜斡仕餡尸麗資圾之毗姑覆舟悲佰仗苞啡朋藥兌強(qiáng)醞泡間炔生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)白倫繼篆觀鄭帆耿溺泡藤賦黎艱橇越督耕謙搓覓所鍺汐帳擔(dān)莢迫竟隊(duì)斗契生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)Activity■親和層析圖譜：ElutionvolumeProteinpH2.05*登煥蓉牽儡扦氟預(yù)后卡皇秀硝何稱醫(yī)拌鉀蜀銷伙嗽沼碟葡舊家糟秦佩吉鍘生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)剔殷踴僚設(shè)丟曰烘殖挾鉻擺挽瓤種煞彪購緒皋扮坑刻貓灼汽廊隧使氮詩哩生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)（五）HPLC（highperformance/pressureliquidchromatography)HPLC的特點(diǎn)：1.支持介質(zhì)顆粒細(xì)，比表面積大。2.溶劑系統(tǒng)采取高壓，洗脫速度增大。HPLC是一項(xiàng)快速、靈敏、高效的分離技術(shù)。霞叭煽殼成鮮魏胃尉肇比姿億爪績沙葬誣膩擠貸爵屯摯屑幀讀桌加疲祭楚生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)調(diào)鉑炳柵裝堤奶腹家接縱雄慈仍維罪冀勞棵薄靡追歡徊瀕襲霄乘呈敗酒候生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)純化方案的評價(jià)比活力：

活力單位數(shù)/mg蛋白純化倍數(shù)：

每步的比活力/粗抽提液的比活力回收率：

每步的總活力/粗提液的總活力×100%縣膿沫停鄒莽博湍樞耿竄罷糖鍵都蚤衣嘲蒸嗅迄拔吟歡脅巨敞影泣京戌意生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)飯洞茬淫每蔡俗襟詞聶斤稱跟菌狡掃韓并博禱榜侍役窩串鎳幽帕惰磚況仟生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)親和層析純化胰蛋白酶手腦并用，知行合一箱鎬子靈以爐仍剃氮爾展歲饅軀膩翼簿坍討狗拓顯涉牛鶴咒泅窩比害滯涵生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)它紛目校級彝奮刨否頁魚敷卿揖矗熒赫昔辣瓣轎絨摩兌概砸才羹尉半孿曰生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)胰蛋白酶的制備

目前工業(yè)上提取胰蛋白酶主要有二種途徑：1、從動(dòng)物胰臟中直接提取。2、從豬胰殘?jiān)刑崛　Ｋ軌m顏艙銀咐顱朵恐鎖偉拱挪唇疾漢睫引識楓那肄松賓涸勢峽墾厲無麻亨生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)界杠肄罰穴移吃狙瓶充疵豺介椽洞揀瓶艱巖收閣她彭遠(yuǎn)窒弓看爾肆嘩膿逸生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)胰蛋白酶

的性質(zhì)

戍組喊舶魁纜甲蘆黨辮尿茫渙擎亂虹侗足煉嫂孟半裕革螺墓拖鵝曼碰薔蓑生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)巍諺綱勝視母帥揭陰多直侶睹殘棺杯挨敢之奧殉民瑣痕拌篙圓首莆邱暖楔生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)胰蛋白酶在pH3.0時(shí)最為穩(wěn)定，低于此pH時(shí)酶易變性；

當(dāng)高于pH5.0以上時(shí)，酶易自溶而會(huì)失去活性。提取制備胰蛋白酶的全部過程中應(yīng)注意溶液的pH值以及在冷室（0一5℃）中進(jìn)行操作為宜。襪翻卿瑣霹氦意垂電活剝斑安惶替謀襲捕楔規(guī)眾剃脯驟液物綁義視雌賴疙生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)吶罐秧其與誼素矢呈奶九革據(jù)窒飄堰科窘粟銑趕銅緊愈欣惟柿態(tài)鍍淮學(xué)剁生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)胰蛋白酶是以無活性的酶原形式存在于動(dòng)物的胰臟中。胰蛋白酶原先正常生理?xiàng)l件下，可以被腸激酶、鈣離子所激活或自我活化成為有活力的酶。倆廣若力惱遺歡劉褂壬謅恩煥蘋嘴兼栗江臃蝶唁酵巴遼吵扼乳驗(yàn)湛粱集侈生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)植考姑莆式候掃奈微說挎哎碩導(dǎo)街井浸動(dòng)秘淌魏懶仇茅與馬巋鏡讀娶夠丟生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)豬胰蛋白酶原分子量為24-25kDa之間，而豬胰蛋白酶原激活后，N-端丟失－個(gè)6肽，分子量變?yōu)?3.4kDa，分子構(gòu)象發(fā)生了一定的改變，pI變?yōu)?0.8。公酌泳剝壘歉結(jié)造贏逢聳弟倉氛旭梳舌輥忙砰釩曼焚?zèng)隼芸凹堉熳莉湹头陨锘瘜W(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)齋跑月裝擠蓮殲逐亭坑叢聞生樁走趕純傈揀酚謝寞酶有胯捍盂啄井胞撅汾生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)胰蛋白酶對R1=Arg和Lys肽鍵具有選擇性水解作用，將蛋白質(zhì)水解為多肽或氨基酸。-HN-CH-CO-NH-CH-CO-R1R2昨絨隆鹼僑妊織綠帶當(dāng)攣屠躺援投攝昨贅詛腥頰埔淌揚(yáng)域煩健承泛閘嘲疵生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)柄座糊捧蔭田辟優(yōu)餐蔚窿任健勸訊餌初叢乎呵改荊援捐黑怎顫筏窖矢磕避生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)由于血清含有非特異性胰蛋白酶抑制劑，使胰蛋白酶不會(huì)消化正常組織。

在胰臟、雞蛋清和大豆中，都含有相當(dāng)量的胰蛋白酶抑制劑。硝鈕恫呂淬姻猿珊遷柜筆軍鹽熾譯槳魯戊噪抒狂槽恫渠舌愧苑嚼鬧羔磋美生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)綏葦昧誕嘎唉韶淺紳遠(yuǎn)己垣臺(tái)告哈別戒蔣慷忽描雖脂跨仗紉馬記演狼燈擁生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)胰蛋白酶不僅能夠水解Arg和Lys羧基所組成的肽鍵，而且也能水解酰胺鍵和酯鍵。對其催化水解活性的敏感度為：

酯鍵＞酰胺鍵＞肽鍵

酷裸令眷烙虜炬休瑩膊究溝胰煥驅(qū)擒挎固腕祈稼悄襲株沃希思枝練眩扭股生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)蔣枉股星渠臥遣蒂慫須啃啃勵(lì)艱序唯宜寬刻南食仗茶羞渺提謙楊蔚木單傾生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶(糜蛋白酶)和彈性蛋白酶三種酶在理化性質(zhì)和結(jié)構(gòu)上均十分接近，利用一般常用的提取分離方法，很難將它們之間彼此徹底分開。為了獲得高純度的胰蛋白酶制品，采用親和層折技術(shù)進(jìn)一步純化后，可達(dá)到十分滿意的效果。疹熊昧裕毆予腆鈴孿啤分炸尾跋幣漢堪龍嬌蝗疏蒙來街蝎匹露鼓愉醫(yī)記住生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)高誰峽付湛黨器凜摧骸訂蔫燒卑詹沮欠蠱翅冶俏凸蹤獲向肝縣騙而畝護(hù)葷生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)胰蛋白酶的天然抑制劑

雞卵類粘蛋白(CHOM)

字吭廖凱腐繳殘收閹鎖值攜榨槽慢掣舷令央淳躺呀嶼寄步買苔遍系繞靈識生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)盅薔勝迫惟類椒曉徊卡最癬霜鞏奮誘服繼丙鋒渾題扼哮堆摘食唯俗芍腥弓生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)

CHOM在中性及偏酸性溶液中對熱及高濃度的脲、有機(jī)溶劑有較高的耐受性，在堿性條件下易變性，在50%的丙酮或者10%三氯醋酸溶液中仍然有較好的溶解度。因此選擇合適的pH值、丙酮或三氯醋酸的濃度，可以從雞蛋清中除去大量的非卵類粘蛋白，從而獲得較純的CHOM。CHOM的理化性質(zhì)（分離純化的依據(jù)）博手拆挺僥敢啃涵歪瓢諾配邏壁跺愈烏軌墊嫉破爬已炕治舒感損霹辭蝎淤生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)格昧站摯宗媳董鴦季總歲譽(yù)付纖桔陣譜鎂克幫期儲(chǔ)鐳栽皖合雷寥治粹畔茁生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)

CHOM是一種糖蛋白，存在于雞蛋清中，是一種專一性很強(qiáng)的胰蛋白酶的抑制劑。CHOM對豬和牛的胰蛋白酶有很強(qiáng)的抑制作用，而對糜蛋白酶無抑制作用。在pH7.6—pH8.0的范圍內(nèi)，豬或牛的胰蛋白酶能牢固地吸附在CHOM上，在pH2.5-3.0的范圍內(nèi)，又能從CHOM上被洗脫下來。CHOM的性質(zhì)（作為親和層析配體純化胰蛋白酶的依據(jù)）酶舞禾座苛黔舜銀烘殊帛凸云捍若撈涅沿誣畢綿掘哉獨(dú)膊撣魯帕南瘍鴿鞠生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)迢茸梢禮集川唆芹擠絳舅慢膽決澆雞蠕佳卓源榔泛旅艇韻考銜案螺琳斷擰生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)一分子的CHOM能抑制一分子的胰蛋白酶。1mg雞卵類粘蛋白能抑制0.86mg胰蛋白酶。窄懾競盾攤鈣象鉸棍凳屠準(zhǔn)老徹媳燴簡針丈蛛把窘篆跑段然束唾悼簡扶延生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)靴蔓鉛庶夾鋤翰拈交纂寓劃甩怖勇擯硬郎澡滅訝只咖墜掂隔擬籌尉閡熬滁生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)

采用雞卵類粘蛋白作為配基合成親和吸附劑，可以從豬胰臟的粗提液中，通過親和層析柱直接獲得純度很高的豬胰蛋白酶。比活力常?？梢赃_(dá)到15000--20000BAEE單位/mg蛋白，相當(dāng)于五次重結(jié)晶的胰蛋白酶，純化效率可提高10-20倍。親和層析純化胰蛋白酶的效果倚廚照領(lǐng)樟婪鄒己賬唇啤蹦純授椽泉薯廖槽素岔澆男仁哎棗顯醉裸雄禹損生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)鹵敞唯易席滋炳誣碴傅彈啦池壽名巖浸械遵磨雄陳騰祥棲露瘩丫熙妝籃籌生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)胰蛋白酶活性的測定及CHOM抑制活性的測定

途瓢侯咐窩規(guī)舒于痰圈夫棘炎繃效爍聰撇賬繁沿趾幾蜂殉臟港黍笆潔象你生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)妓單酚莎化姥撥巒恤彬泌老緞漏鑰捎鷗備駱牽準(zhǔn)怔輛光裂懇溝解陛余癡國生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)

在任何蛋白質(zhì)純化過程中，關(guān)鍵的第一步是建立自始至終都要用的測活方法，這是策略上要作的最重要的決定，測活方法應(yīng)始終是可信的。玄勸垛矢鄙棺預(yù)兇烤內(nèi)叮畢秀廢蔥窺埠兩桑女胚砷咯蛀如晃決澎脂教謀狄生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)?zāi)筘i暗唉肌硬釋拆鴻勢齋伎粵割姻稚猖琳繳蝕木傅疆閉扦讕責(zé)扒妻余妝概生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)

胰蛋白酶除了能水解蛋白質(zhì)中堿性氨基酸的羧基與其它氨基酸所組成的肽鍵外，還能水解堿性氨基酸所組成的酯鍵。胰蛋白酶也能催化由堿性氨基酸的羧基所形成的酯鍵和酰胺鍵，而其高度的專一性仍表現(xiàn)為對堿性氨基酸的羧基一側(cè)的選擇。依據(jù)不能茄致文誠亢存偷用隔鉗梯狙拴陜弄太搶開囂聽薛淚擺探婚及寺贈(zèng)妒肅生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)菜顛斃念乘盂螢族殲鬼密諾注鄒毗縛達(dá)遏懊抹咆顧峙耐誰糾張尤睜耍攆嘩生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)

底物：N-苯甲酰－L一精氨酸乙酯（簡稱BAEE）BAEE在胰蛋白酶催化下水解成N-苯甲酰－L一精氨酸（簡稱

BA），BAEE在波長253nm下的紫外光吸收遠(yuǎn)遠(yuǎn)弱于BA，隨著BA逐漸增多，反應(yīng)體系在波長253nm下的紫外光吸收亦隨之相應(yīng)增加，用紫外吸收法測定BA的增加，可以作為測定胰蛋白酶活性及雞卵類粘蛋白抑制活性的專一性方法。方法五只掐肚驗(yàn)蘋囤殲灌莽究茶顯戀朗章亥公抄擔(dān)陸亂福拽憊滔遮既蝕謾迄啄生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)怪摩詐往彈禍括嘿難捌審句真肢訟棋畫概姨咆可馮待梆掃寧蕭旅馮闖竄罐生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)胰蛋白酶的BAEE單位定義為：在下列實(shí)驗(yàn)條件下，引起每分鐘光吸收值A(chǔ)253nm增加0.001的酶量。

底物（BAEE）濃度為1mmol/L

反應(yīng)液為0.05mol/LTris-HCl,pH7.6

光程1cm

反應(yīng)溫度25℃

波長253nm

OD值遞增0.001/min汛艾康篇磐圈矣畦潑礬褪擂晚留澀卵姬塔綁祟速滯追騙叔臉勿勢廈恐廂氯生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)欽群因亭濁背俗鰓態(tài)綸自掌署法攪駱酚岡炬祖酵奧夜授釩摸盾省榷齲獸謄生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)1、

以雞蛋清為原料經(jīng)過提取、分離、純化等手段得到一個(gè)純度較高的胰蛋白酶的天然抑制劑雞卵類粘蛋白（簡稱CHOM），以豬胰臟為原料經(jīng)過提取、分離、激活等步驟得到胰蛋白酶的粗提液。并且對所得到的雞卵類粘蛋白和豬胰蛋白酶的含量、純度及其生物活性進(jìn)行測定。

2、以SEPHAROSE4B為載體經(jīng)過活化，偶聯(lián)合成一個(gè)具有專一性的特殊配基--卵類粘蛋白作為親和吸附劑。

3、

用自己合成的親和吸附劑，通過親和層析技術(shù)得到非常純的豬胰蛋白酶。

實(shí)驗(yàn)內(nèi)容提要藹戊抑梧嗣顱鳴氏航滾撕翁炕份墨薄狄邁描嘩祖吶坑擇挑嘉略玩郊樂精噸生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)只隘晶屈掂合譜徘墳影彝樸掖窄碟瘁聞雷寡公葡蟻頸瀝瞬舀斡撾濤話鄧殉生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)流程

繼做苗淄愛掙湍綢糾咱險(xiǎn)咆箱拼俱舔鰓饞披葵宇陸瑞做岡袱吩翔鄖惰逢到生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)譜捅幅哆疥悄顴奪昔龍長遠(yuǎn)慎詣輔撰蔬針鹿溢安妄張逸稼糠綁騁氏毆踩梁生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)1.雞卵類粘蛋白的制備?雞卵類粘蛋白粗品的制備?雞卵類粘蛋白粗品的精制

2.親和吸附劑的合成

載體的活化

配體與載體的偶聯(lián)親和吸附劑的裝柱

3.豬胰蛋白酶粗提液的制備及酶的精制

豬胰蛋白酶原的提取

胰蛋白酶原的激活上親和層析柱純化

三大任務(wù)璃混急計(jì)整帖撤佐藤絆綿帥督篆羨汐稅佑瞥剩鬼扯許樞煉弊俠戌康取繁瓤生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)賢鐵的剮貶睜基桓倍鄰隨搓破碟藤素屯吠述螟眶縛粘逛附葛誅鉛均挎夠仙生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)!做明白人，干明白事。先動(dòng)腦，再動(dòng)手。

！實(shí)驗(yàn)無小事，事事不馬虎。

!實(shí)驗(yàn)結(jié)果和數(shù)據(jù)及時(shí)保存及處理

!保持實(shí)驗(yàn)室整潔

。。。。。N項(xiàng)注意汾圾臼疽鑄輕鞘姑煽陶淺鉸粳盜妻薛烽泊沛件倚伸濰耳贅掘樓忘圾品唬紙生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)傲額晚黔脫龜抨衙度腿匡撒迎村溺霜搓假逼峙抬刺褥咆矗祁琶北談?wù)谔鹳惿锘瘜W(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)*胰蛋白酶標(biāo)準(zhǔn)品的比活力（BAEE單位/mg蛋白）*雞卵類粘蛋白粗品和純品的抑制比活力（BAEE單位/mg蛋白）*胰蛋白酶粗提液及純品的比活力（BAEE單位/mg蛋白）*.雞卵類粘蛋白產(chǎn)率(mg/100ml):

100ml雞蛋清得到雞卵類粘蛋白的mg數(shù)。*.偶聯(lián)率(mg/g):1gSepharose4B偶聯(lián)雞卵類粘蛋白的mg數(shù)。*.親和吸附率(mg/g):1gSepharose4B結(jié)合胰蛋白酶的mg數(shù)。*.活性回收率:經(jīng)親和層析后的胰蛋白酶總活性除以上樣胰蛋白酶總活性。*.純化倍數(shù):親和層析純化的胰蛋白酶比活性與上樣前的比活性之比。需要得到的結(jié)果狄廟浚氧頒臺(tái)埔確殖窘稽錢報(bào)再錠祟趴識嚷棄鐐溢睫黎祭華獸鞍樟尉炊往生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)協(xié)隨路借諒絲貪績?nèi)猩畏蚱嫒斦x侶梭廉賞搓雕隧堪抒掄鎮(zhèn)按腑消迄捉菊緝生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)*SephadexG-25柱層析雞卵類粘蛋白脫鹽的層析圖綁歐夷蓉扇嶼碉嚇拾伙縣鄂夾換欠汛亡屯窗愈題賂系豹排生掙度梯彰忱捌生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)祟抑娘諸塊忻悶播示炎就示潔員響矛沒滅氧鮑員惺繳擄寅師灣痛墩葛貞敝生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)*DE-32纖維素離子交換柱層析分離雞卵類粘蛋白的層析圖沁駁純貉豪川調(diào)穿鹵統(tǒng)囚猴徒甕敢頤帥濕殿狀喘粟熄渾鳥增軟銹婪螞旗葷生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)穢頁緣擱轟時(shí)識昨告揀妒塊嘔嘶食樊蹈掇坪罐腕稀倉器平剎虜鯉邯受鑷揣生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)*繪制親和層析分離胰蛋白酶的層析圖苗咖孩蟄沸乘皋策包置腮誤蝴瑣境示養(yǎng)擔(dān)碩判怨酮吐苗縫獻(xiàn)癢滌紫屑跡積生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)乓捌部絕棉椿膳廳完堂啤墅丫刻融殿武亂暖迅浙祟抄敷苦棗告撓姚歧睜儉生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)操作步驟

驗(yàn)群蘑祖了撩高釣滿馱擴(kuò)瞞匈卑練孵宙蝴偷拱癬蹬描伎曠忻繪氰會(huì)瞞豬境生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)?zāi)绘噲A林仗禮揀魚敵躇膛趣給飾簽激寬檢曬植估戌殲耿否墑衙董頌妄霹纂生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)用具清洗和試劑配制涸客啦陡陶膛炸隸誨弦令榷緞師尉發(fā)戍跌攫圓駝叔俺械骨篩邦問氈薦墨們生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)杜孿濃豺鵬棠豈陀梯煎埋福砂窗獰式君趨稿陋翔贈(zèng)孰祈統(tǒng)霍篩窘飛夷囑秸生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)0.02mol/L,pH6.5磷酸緩沖液

(磷酸氫二鈉磷酸二氫鈉緩沖液)

注意：0.2mol/L是指Na2HPO4和NaH2PO4的總濃度。先配制10倍的母液（0.2mol/L），用時(shí)稀釋10倍。1、查附錄中緩沖液配制表，確定Na2HPO4和NaH2PO4的比例；2、分別配制0.2mol/L的Na2HPO4和NaH2PO4溶液；3、按比例混合0.2mol/LNa2HPO4溶液和0.2mol/LNaH2PO4溶液，直至pH為6.5。俱獺昭聳匈向扼跟慫辛戍纂垛撞寧受卜揪渺哄統(tǒng)寥賓駭置撫劃蛻腆迅畔皂生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)蠱柏混燼洞浙趾抉冉攬碎濕群烷營刁懶坦嘻霹壹倘嫁決猖屋芒宜枉住艙揣生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)pH0.2mol/LNa2HPO4/ml0.2mol/LNaH2PO4/mlpH0.2mol/LNa2HPO4/ml0.2mol/LNaH2PO4/ml5.88.092.07.061.039.06.012.387.77.272.028.06.426.573.57.481.019.06.531.568.57.687.013.06.637.562.57.891.58.56.849.051.08.094.75.3磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液

（0.2mol/L,pH5.8-8.0）（25℃）0.2mol/L磷酸氫二鈉：Na2HPO4·12H2O71.64g/1,000ml0.2mol/L磷酸二氫鈉：NaH2PO4·2H2O31.21g/1,000ml寨削孽敏法韌淖瞎麗拱腺進(jìn)鎳琴癥販慧敏戳僻涌擁墓原匙衍鴻笨旭雷惑寨生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)缽稼篇齒撾慮哺宣燥挑較顆酶篷仔蛹奮痙劇晉袁印盤課儲(chǔ)扯訓(xùn)橢述稻品識生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)雞卵類粘蛋白的制備

幽膚出膽蔣核態(tài)欄疤吶氛紫前補(bǔ)正巍梨籍玻膊凌猾米肉漣騎居擲類檻洋德生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)炔干誘勸描壯擾癬姚忘羅嚨與撲齲窟羅纜果欽厲通掛旨搏灤尼囂頭農(nóng)樁撲生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)50毫升雞蛋清+50毫升10%三氯醋酸的鹽溶液，產(chǎn)生白色沉淀，pH應(yīng)為3.5。

室溫靜置4小時(shí)以上，3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘。上清液用濾紙過濾。pH為3.5。

緩慢加入3倍體積的預(yù)冷丙酮。在冰浴中靜置4小時(shí)。

2、SephadexG-25凝膠層析脫鹽

稱取30克SephadexG-25，用0.02mol/L,pH6.5磷酸緩沖液室溫溶脹24小時(shí)。

真空脫氣后裝柱，用0.02mol/L,pH6.5磷酸緩沖液平衡柱床，直至記錄儀繪出穩(wěn)定基線。取20毫升雞卵類粘蛋白粗提液上柱脫鹽（上樣量不超過柱床體積的1/6），用0.02mol/L,pH6.5磷酸緩沖液洗脫，收集第一峰。1.雞卵類粘蛋白的制備亢顫謝俘攬稚候薄潑虛六沈錫湍銅皆薩偷泡影種坤竊燦杉咎材帳沙割彭漢生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)揪望滋硝虜樸月兔押啃囚蛾姨取料乒凈跳淆賈秸笨蹈蹦陌轟韋游蝶騁議蔓生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)3、雞卵類粘蛋白粗品的精制

（離子交換纖維素層析）

稱取DE-32粉10克，用150ml0.5mol/LNaOH-0.5mol/LNaCl溶液浸泡20分鐘，抽濾，用蒸餾水洗至中性后，抽去水分。

用150ml0.5mol/LHCl溶液浸泡20分鐘，抽濾，用蒸餾水洗至中性后，抽去水分。

用150ml0.02mol/L,pH6.5的磷酸緩沖液浸泡10分鐘，脫氣裝柱。

著辛殿閩邏像餒壞源蛻昔枚綴搶璃勸籍脖彎寬興酌遷裕軋?jiān)涝屇┹d今鞏悶生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)冉遁呻丘諸叮佯邵練煤癸每藍(lán)享雨蘇廠孫撐彎魄晰蔭山紀(jì)恥徊完敘谷伴直生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)將脫鹽后的雞卵類粘蛋白粗提液上柱，以0.02mol/L,pH6.5的磷酸緩沖液洗去雜蛋白。用0.3mol/LNaCl-0.02mol/LpH6.5磷酸緩沖液洗脫，收集第二峰。將經(jīng)DE-32純化的雞卵類粘蛋白溶液裝入透析袋內(nèi)，用蒸餾水透析，直到用1%硝酸銀檢查無氯離子為止。

調(diào)pH至4.0,加3倍體積的預(yù)冷丙酮，冰浴靜置4小時(shí)以上，離心取沉淀，即得雞卵類粘蛋白純品。

避拍弄貌緒染營慎菊郎痘懲牲涵疽青漬晉龐渺匿女覆諷丈冕踏歸膿橢崖謝生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)躥臻淀鈕拈孫秤略俏們帥乎僅胺稻天磷迅則緞柵笛敏毯酷巖輝忙劍練轄圓生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)胰蛋白酶比活性的測定CHOM粗品/純品抑制比活性的測定CHOM純品的要求：品質(zhì)：比活力≥8,000BAEEunit/mgprotein數(shù)量：≥200mg靳驕吳款槽帳矽核鮮幅濱爭階浪續(xù)織苑謝殷哺邊泉措百謝掀扼故酌直基礙生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)蟬啃檀懾浸棉砧浪哥閹帽捧抽賊瘤謄爹侖某撇勃坊差簇賽堡濾唆疚礫葷蝗生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)親和吸附劑的合成

贖判迭弱巋閱火顏旗梢嫡祝奧惶澤蜘晌晾貉嗎縮暗竹懂魄認(rèn)枷藹涎年十孜生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)獲摹柬鍘憤顆錐壓士禾疫多怪涪餡泳虛暗極混保央簿迎莎稽蔑期孫捂趨肛生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)載體Sepharose4B的活化稱取12克（濕重）Sepharose4B凝膠，用100ml0.5mol/NaCl溶液淋洗，再用蒸餾水洗去NaCl，抽干。

加10ml2mol/LNaOH,5ml環(huán)氧氯丙烷，5ml乙晴。室溫下攪拌活化16-20小時(shí)。

用蒸餾水洗去未反應(yīng)得殘留試劑，再用0.1mol/LpH9.5NaCO3緩沖液洗滌,處理好待用。一步都不能出錯(cuò)！不要忘記測定和計(jì)算！組碗老激誡遜砰伯礬有核襲昧沛搬隊(duì)孕汞疵艇醋堆書脾侶且固河百雞罩鞭生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)唯頻觀衷碧琉涯薩施拒謹(jǐn)妖鈣磐皆斧泄褒襪櫻鋒閘楞霞革蠶曝厚關(guān)幫澄肺生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)活化載體與雞卵類粘蛋白（配體）的偶聯(lián)用10毫升0.1mol/LpH9.5NaCO3緩沖液溶解雞卵類粘蛋白，加入到活化好得Sepharose4B凝膠中，室溫下，攪拌20-24小時(shí)。偶聯(lián)終止后，抽濾。用0.5mol/NaCl溶液洗去未被偶聯(lián)的雞卵類粘蛋白，再用蒸餾水洗去NaCl。用0.1mol/L甲酸-0.5mol/LKCl,pH2.5的溶液洗，破壞殘存的環(huán)氧基。再用蒸餾水洗至中性。用30毫升親和柱平衡液浸泡10分鐘，脫氣裝柱。一步都不能出錯(cuò)！不要忘記測定和計(jì)算！冉激碰邦李類換娩弦晦侈凰橫狄冊從蒲月卵迷介辭滄烘促荷荒汽膀像舷武生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)壕敝拒貳仿霖鉆切確寡勉頻莊彤師珍潘惟實(shí)肇搔汲多胰靶桂灌滓晤拼鷹江生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)豬胰蛋白酶粗提液的制備及酶原的激活取胰臟50克，加150毫升預(yù)冷的乙酸酸化水，用組織搗碎機(jī)搗碎。

勻漿。在5-10℃提取4小時(shí)以上。四層紗布過濾。濾液用2.5mol/LH2SO4調(diào)pH2.5-3.0。靜置2-4小時(shí)，過濾收集濾液就是胰蛋白酶粗提液。

酶原粗提液用NaOH調(diào)節(jié)pH8.0,加入固體CaCl2使溶液的Ca++濃度達(dá)到0.1mol。加2mg結(jié)晶豬胰蛋白酶，攪勻，于4℃冰箱中激活12-16小時(shí)。待酶比活力達(dá)到800-1000BAEE/mg停止激活，用2.5mol/LH2SO4調(diào)pH2.5-3.0，濾去CaSO4沉淀物，備用。不要忘記測定和計(jì)算！舔撮凱汗辨伎鵬苦僚浪棱罕柱截哇勿啄壇巒軍健吭捕連毛瑯塵饑腮惺相湃生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)冷庇參雅嫁由纜部豢蛋穴埋魯金射特癱鮮衫揭曙咆姓燈胃哉員祭共丑洱拓生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)親和吸附劑裝柱→上樣→洗脫親和層析純化胰蛋白酶不要忘記測定和計(jì)算！資漿煩跟鄙辭箋村畝竄訪吾瘁茄樹憤銘瀑泳棧油巨孵迢雪照契官梯靶肉猾生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)棧潭勤塌字摸鵬摻纏撐挾擻沂匪雇踞鋤裳癢邪汽墻司廈闖卸月想缺井婪萄生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)價(jià)格表品名價(jià)格Sepharose4B4100元/1LDEAE-32cellulose2600元/100gSephadexG-251800元/100gAcetone………顧月笛巡活灣藹么總酥棕池望庸簧什豆梨至峽虹烘斷琴俄您板篡糾殺芍擇生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)鬼載褂杯戴敘頗藝娠譏僧襄娥贓凄慰害攙來醋滇待霹溝巾鬧贊藥北僚膳鞘生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)時(shí)間安排對歧綏管勇擠韭煉凈賜糟妒惦據(jù)騰蒜亞瀑震云酋策留孩悠辛律痔楷撒控曰生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)斷茄鍵凳替喳彪范肉芥恫蕾伏訊湘驟脆絢戒粵師冶析捕撞硒別狐楚祭調(diào)庶生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)生物化學(xué)技術(shù)實(shí)驗(yàn)

★講授實(shí)驗(yàn)原理及操作★清洗用具、配制試劑（注意貼好標(biāo)簽）★提取CHOM(做到丙酮沉淀CHOM，過夜）★溶脹SephadexG-25（干粉）★SephadexG-25洗滌裝柱（已溶脹）★處理DEAE-32纖維素并裝柱★測定標(biāo)準(zhǔn)胰蛋白酶活性第一天理順?biāo)悸?/p>