DB12T 651-2016 轉基因耐除草劑大豆GTS40-3-2及其衍生品種定量檢測 實時熒光PCR方法　　

B23DB12Detectionofgeneticallymodifiedplantsandderivedproducts—QuanlitativePCRmethodforherbicide-resistantso天津市市場和質量監(jiān)督管理委員會發(fā)布I本標準起草單位：天津市農業(yè)質量標準與檢測技術研究所、中國農業(yè)科學院生物技術研究所、天轉基因耐除草劑大豆GTS40-3-2及其衍生品種定量檢測實時熒光PCR方法本標準適用于轉基因耐除草劑大豆GTS40-3下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和NY/T672轉基因植物及其產品檢測通用要求Lectin基因LectingeneGTS40-3-2轉化體特異性序列event-specificsequ進行實時熒光PCR擴增。根據(jù)標準樣品模板拷貝lec-1269P：5,-AGCTTCGCCGCTTCCGTS40-3-2F：5'-CCTTTAGGATTTCAGCATCAGTGGGTS40-3-2R：5'-GACTTGTCGCCGGGAATGGTS40-3-2P：5'-CGCAACCGCCCGCAAATCC準物質基因組DNA，用0.1×TE或水稀釋5.3.6.1標準樣品和試樣實時熒光P3然后取出PCR管，放入PCR儀中。運行實時熒光PCR反應。反應程序為：95℃變—2.0μL2.0μL—25.0μL表2Lectin內標基因PCR反應體系—0.5μL0.5μL0.5μL2.0μL—25.0μL應設置陰性對照和空白對照。以非轉基因大豆材料提取的DNA作為GTS40-3-2轉化體特異情況進行調整。設定閾值處，要求不同濃度梯度標準品的擴增曲線平行，而且同一樣品的不同平45.3.7.3繪制標準曲線y=+b(1yb—標準曲線的截距。以進行結果計算。否則重新進行實時熒光PCR擴增。n—模板拷貝數(shù)a—標準曲線的斜率；b—標準曲線的截距。nLectin—大豆內標準基因Lectin拷貝數(shù)。的Ct值<36，表明樣品中檢出耐除草劑大豆GTS40-3-2轉化體。表述為“樣品中檢測出GTS40-3-2轉曲線，表明樣品中未檢出耐除草劑大豆GTS40-3-2轉化體。表述為“樣品中未檢測出GTS40-3-2轉化判斷；如重復實驗GTS40-3-2轉化體出現(xiàn)典GTS40-3-2轉化體，表述為“樣品中檢測出GTS40-3-2轉化體”。驗。如重復實驗結果符合6.1-6.4的情況，依照6.1-6.4進行判斷；如重復實驗Lectin內標基因和A.1Lectin基因實時熒光PCR擴增產物核苷酸序列（AccCTTCTATGCCCCTGACACAAAAAGGCTTGCA1GCCCTCTACTCCACCCCCATCCACATTTGGGACAAAGAAACCGGTAGCGCTTCTATGCCCCTGACACAAAAAGGCTTGCATCTGGCCTTTCCGGAACCGTCCGCATTCCCGGC