屆碩士學(xué)位論文答辯會復(fù)習(xí)課程

2006屆碩士學(xué)位論文答辯會鼻咽癌腫瘤干細(xì)胞及其表面標(biāo)志物的初步研究

研究生：邵世宏導(dǎo)師：姚運(yùn)紅副教授

廣東醫(yī)學(xué)院病理教研室

2006年6月11日

研究背景以及國內(nèi)外研究現(xiàn)狀干細(xì)胞具有自我更新、高度增殖和分化能力，分為胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞，在胚胎發(fā)育和維持組織器官結(jié)構(gòu)及功能完整性過程中起到重要的作用?，F(xiàn)在發(fā)現(xiàn)，人體各種組織中都存在干細(xì)胞，包括以前認(rèn)為的不可再生組織，如心肌和神經(jīng)組織等研究背景成體干細(xì)胞具有可塑性，在體外培養(yǎng)超過4－5個月便會發(fā)生癌變。干細(xì)胞是突變的靶細(xì)胞，突變的干細(xì)胞即為腫瘤干細(xì)胞，其不斷增殖分化形成異質(zhì)性群體的腫瘤。腫瘤可能是一種干細(xì)胞疾病，是干細(xì)胞在長期的自我更新過程中累積損傷導(dǎo)致干細(xì)胞生長增殖分化失去調(diào)控，而停滯在分化的某一階段無限增殖所形成的異常的組織或器官。

腫瘤干細(xì)胞是腫瘤治療失敗復(fù)發(fā)的根源

研究目的研究鼻咽癌中是否存在少部分細(xì)胞為腫瘤干細(xì)胞

研究E-cad、CD44H、β-cat和EBERs在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移中的作用;探討各指標(biāo)與鼻咽癌干細(xì)胞的關(guān)系探討針對腫瘤干細(xì)胞的治療方法在鼻咽癌治療中的可行性,為臨床上鼻咽癌的治療提供一個新的方向。

技術(shù)路線

臨床病理部分技術(shù)路線臨床病理部分鼻咽粘膜慢性炎鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶鼻咽癌CD44H、β-cat和E-cad的表達(dá)IHCEBERs的表達(dá)ISH

技術(shù)路線實(shí)驗(yàn)病理部分CNE-2Z細(xì)胞裸鼠移植瘤成瘤率及其生長情況CD44H、β-cat和E-cad的表達(dá)

EBERs的表達(dá)鼻咽癌原代細(xì)胞克隆形成能力接種裸鼠IHCISH

結(jié)果和討論

臨床病理部分組

別NE-cadherinCD44H?-catenin

Positive(%)Positive(%)Positive(%)鼻咽粘膜慢性炎1919(100.0)2(10.52)17(89.47)鼻咽癌3318(54.54)25(75.76)16(48.48)鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移287(25.00)27(96.43)22(78.56)E-cadherin、CD44H和?-catenin在鼻咽粘膜慢性炎、鼻咽癌及鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá)χ2檢驗(yàn)：E-cad、CD44H和?-cat的表達(dá)在鼻咽粘膜慢性炎組和鼻咽癌組間比較，差異均有顯著性(P<0.05)，χ2值分別為15.850，12.076和9.952。E-cad、CD44H和?-cat的表達(dá)在鼻咽癌組和鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組間比較，差異均有顯著性(P<0.05)，χ2值分別為5.467，5.146和5.838。臨床病理部分結(jié)果臨床病理部分鼻咽癌中E-cadherin和?-catenin表達(dá)的相關(guān)分析

E-cadherin

?-catenin

正常表達(dá)

異常表達(dá)

-312

+144Spearman相關(guān)分析：?-catenin異常表達(dá)和E-cadherin失表達(dá)具有相關(guān)性，r=0.555，P<0.001

結(jié)果

結(jié)果

空白對照(SPx200)

E-cad在鼻咽粘膜慢性炎中的陽性表達(dá)

（SP×400）結(jié)果E-cad在鼻咽癌中的陽性表達(dá)（SP×200）E-cad在鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的陽性表達(dá)（SP×200）

結(jié)果CD44H在鼻咽粘膜慢性炎中的陽性表達(dá)（SP×400）

CD44H在鼻咽癌中的陽性表達(dá)

（SP×200）結(jié)果

CD44H在鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的表達(dá)（SP×200）β-cat在鼻咽粘膜慢性炎中的陽性表達(dá)（SP×200）

結(jié)果β-cat在鼻咽癌中的異常表達(dá)（SPX200）β-cat在鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的異常表達(dá)（SPX400）臨床病理部分(ISH)

鼻咽癌癌旁組織380(0)38(100.0)

鼻咽癌3832(84.21)6(15.79)EBERs在鼻咽癌癌旁組織及鼻咽癌中的表達(dá)

組別NEBERsPositive(%)negative(%)χ2檢驗(yàn)：EBERs的表達(dá)在鼻咽癌組和鼻咽癌癌旁組織組比較，差異有極顯著性(P<0.001)，χ2值為55.273.結(jié)果EBERs的陽性對照（ISH×200）

EBERs在鼻咽癌癌旁組織中陰性表達(dá)（ISHX200）

結(jié)果EBERs在鼻咽癌中的陽性表達(dá)（ISH×200）

臨床病理部分CD44H高表達(dá)、?-catenin異常表達(dá)和E-cadherin低表達(dá)與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移有關(guān)。EBERs與鼻咽癌的發(fā)生有關(guān)，但不是鼻咽癌發(fā)生的必需條件。

CD44H、?-catenin和E-cadherin在鼻咽癌中均為異質(zhì)性表達(dá)，各種不同標(biāo)記的癌細(xì)胞生物學(xué)特性有待進(jìn)一步研究E-cadherin失表達(dá)與?-catenin異常表達(dá)有關(guān)，機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

討論

結(jié)果和討論

實(shí)驗(yàn)病理部分結(jié)果

空白對照（SP×400）

?-cat在CNE-2Z細(xì)胞中異常表達(dá)（SPX200）

結(jié)果CD44H在CNE-2Z細(xì)胞中的同質(zhì)性陽性表達(dá)（SP×200）

E-cadherin在CNE-2Z細(xì)胞中的異質(zhì)性表達(dá)（SP×200）

結(jié)果

空白對照（SP×400）

CNE-2Z細(xì)胞裸鼠移植瘤中CD44H異質(zhì)性表達(dá)（SP×400）

結(jié)果CNE-2Z細(xì)胞裸鼠移植瘤中E-cad的異質(zhì)性表達(dá)（SP×400）

CNE-2Z細(xì)胞裸鼠移植瘤中?-cat的異常表達(dá)（SP×400）

結(jié)果CNE-2Z細(xì)胞裸鼠移植瘤中EBERs的陰性表達(dá)（ISH×400）

EBERs在CNE-2Z細(xì)胞中的陰性表達(dá)（ISH×200）

結(jié)果CNE-2Z細(xì)胞克隆形成率為（71.88±4.52）％組織塊培養(yǎng)法對15例經(jīng)臨床病理證實(shí)的鼻咽癌新鮮組織進(jìn)行原代培養(yǎng)，14例有癌細(xì)胞長出，隨著培養(yǎng)時間的推移，細(xì)胞數(shù)量逐漸減少，最后僅剩余極少量細(xì)胞存活

實(shí)驗(yàn)病理部分鼻咽癌組織中除了一小部分細(xì)胞具有無限增殖能力以外，大多數(shù)細(xì)胞不能無限增殖。CD44H和?-cat在CNE-2Z細(xì)胞系中均為同質(zhì)性陽性表達(dá)，E-cad為異質(zhì)性表達(dá)，EBERs為陰性表達(dá)。裸鼠移植瘤中CD44H、?-cat和E-cad均為異質(zhì)性表達(dá)，EBERs為陰性表達(dá)，CD44H陽性細(xì)胞可分化產(chǎn)生CD44H陰性細(xì)胞。CNE-2Z細(xì)胞系中含有大量鼻咽癌干細(xì)胞。鼻咽癌細(xì)胞CNE-2Z的生長增殖及轉(zhuǎn)移成瘤不需要EBERs的參與，EBERs可能僅參與或促進(jìn)鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展。

討論

小結(jié)鼻咽癌中僅有極少部分細(xì)胞能在體外存活并生長增殖，這部分細(xì)胞高表達(dá)CD44H蛋白，可能是鼻咽癌干細(xì)胞。CNE-2Z細(xì)胞同質(zhì)性表達(dá)CD44H蛋白，可能含有極高比例的腫瘤干細(xì)胞。EBERs參與了鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展，但不是必需條件，不能做為分選鼻咽癌干細(xì)胞的標(biāo)志。CD44H陽性的細(xì)胞具有極高的克隆形成、轉(zhuǎn)移成瘤和分化能力，CD44H可能成為鼻咽癌干細(xì)胞的表面標(biāo)志。

致謝感謝導(dǎo)師姚運(yùn)紅副教授三年來在學(xué)習(xí)、生活上給予的關(guān)懷與幫助。在此，謹(jǐn)向精心指導(dǎo)和培育我的導(dǎo)師致以最誠摯的謝意！感謝教研室唐慰萍教授、陳小毅教授、孫寧教授、胡新榮教授、姜漢國副教授、盧慶林副教授、趙穎海副教授在課題設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)進(jìn)展和論文完成過程中給予的寶貴指導(dǎo)和幫助！感謝鄧惠華高級實(shí)驗(yàn)師、