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考點(diǎn)一微生物的試驗(yàn)室培育1.(2022·蘇、錫、常、鎮(zhèn)調(diào)研,32)微生物的分別和培育是現(xiàn)代生物工程應(yīng)用中的重要環(huán)節(jié)。下圖甲、乙是大腸桿菌分別和培育過程中部分操作和試驗(yàn)結(jié)果示意圖,請(qǐng)據(jù)圖回答有關(guān)問題:(1)上圖甲所示的是制備固體培育基時(shí)的試驗(yàn)操作步驟之一,它稱為________,若用該培育基培育大腸桿菌,除考慮養(yǎng)分條件外,還要考慮________、________和滲透壓等條件。(2)培育大腸桿菌時(shí),在接種前需要檢測(cè)培育基是否被污染。對(duì)于固體培育基應(yīng)接受的檢測(cè)方法是_______________。(3)上圖乙是平板劃線法接種操作示意圖,正確的操作挨次是A→B→________(用字母和箭頭表示);找出圖乙中兩處錯(cuò)誤的操作________、________(用字母表示)。解析(1)上圖甲所示的試驗(yàn)操作步驟之一為倒平板,若用該培育基培育大腸桿菌,還要考慮溫度、氧氣、pH和無菌操作等一系列相關(guān)條件。(2)培育大腸桿菌時(shí),在接種前需要檢測(cè)培育基是否被污染,因此要設(shè)置對(duì)比試驗(yàn),對(duì)于固體培育基應(yīng)接受的檢測(cè)方法是將未接種的培育基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間,觀看培育基上是否有菌落產(chǎn)生,若有則說明培育基已被污染,應(yīng)重新配制培育基進(jìn)行試驗(yàn)。(3)上圖乙是平板劃線法接種操作示意圖,正確的操作挨次是A→B→G→F→E→C→D→H;圖乙中兩處錯(cuò)誤的操作是C——未在酒精燈火焰旁進(jìn)行操作,D——將第五區(qū)域內(nèi)的劃線與第一區(qū)相連。答案(1)倒平板溫度(氧氣)pH(無菌)(2)將未接種的培育基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間,觀看培育基上是否有菌落產(chǎn)生(3)G→F→E→C→D→HCD2.為了從泡菜汁中篩選分別動(dòng)身酵產(chǎn)酸速度快、亞硝酸鹽降解力量強(qiáng)的乳酸菌,科研人員做了如下試驗(yàn)。請(qǐng)回答問題:(1)在無菌操作下,使用無菌水對(duì)泡菜汁進(jìn)行________,將不同稀釋度的泡菜汁涂布于添加了CaCO3的乳酸菌培育基(MRS培育基)平板上。在適宜條件下培育后,挑取有________的菌落,連續(xù)在MRS平板上用________法分別,得到單菌落。(2)取分別到的乳酸菌分別接種到MRS液體培育基中,間隔取樣測(cè)定pH,目的是篩選出________的乳酸菌。(3)取上一步篩選出的乳酸菌接種到含有NaNO2的MRS培育基中,培育一段時(shí)間后,用________法測(cè)定NaNO2的含量,篩選出________的菌株。解析篩選分別出的菌種需要滿足兩個(gè)條件:①發(fā)酵產(chǎn)酸速度快,②亞硝酸鹽降解力量強(qiáng)。先篩選分別出產(chǎn)酸速度快的乳酸菌,再?gòu)漠a(chǎn)酸速度快的乳酸菌中篩選分別出亞硝酸鹽降解力量強(qiáng)的乳酸菌。產(chǎn)酸速度快的乳酸菌在含有CaCO3的選擇培育基上可較快形成透亮?????圈。測(cè)定NaNO2的含量通常用比色法。答案(1)梯度稀釋透亮?????圈劃線(2)產(chǎn)酸速度較快(3)比色亞硝酸鹽降解力量強(qiáng)3.(2022·河北衡水中學(xué)二模,39)請(qǐng)回答下列相關(guān)問題。(1)在腐乳的制作時(shí),用來腌制腐乳的玻璃瓶,洗刷潔凈后要用________消毒;在提取植物細(xì)胞的DNA時(shí),需要先用洗滌劑溶解________。(2)葡萄皮、籽中含有原花青素、葡萄皮紅素和大量葡萄風(fēng)味物質(zhì)等,這些物質(zhì)易溶于乙醇、乙酸乙酯中,因此常接受________法來分別提取,還可以用________和________等提取植物芳香油的方法。(3)為了檢測(cè)某致病菌對(duì)于抗生素的敏感性,取該單菌落適當(dāng)稀釋,接種于固體培育基表面,在37℃培育箱中培育24h,使其均勻生長(zhǎng),布滿平板。將分別含有A、B、C三種抗生素的濾紙片均勻置于該平板上的不同位置,培育一段時(shí)間后,含A的濾紙片四周消滅透亮?????圈,說明該致病菌對(duì)抗生素A________(填“敏感”或“不敏感”);含B的濾紙片四周沒有消滅透亮?????圈,說明該致病菌對(duì)抗生素B________(填“敏感”或“不敏感”(4)用來推斷某選擇培育基是否起到了選擇分解纖維素的細(xì)菌的作用,要設(shè)置的對(duì)比是()A.未接種的選擇培育基B.未接種的牛肉膏蛋白胨培育基C.接種了的牛肉膏蛋白胨培育基D.接種了的選擇培育基解析(1)在制作腐乳時(shí),用來腌制腐乳的玻璃瓶,洗刷潔凈后要用沸水消毒;在提取植物細(xì)胞的DNA時(shí),需要先用洗滌劑溶解細(xì)胞膜。(2)提取植物芳香油的最常用方法有萃取法、蒸餾法和壓榨法。(3)若含抗生素的濾紙片四周消滅透亮?????圈,說明該致病菌對(duì)相應(yīng)抗生素敏感,若含抗生素的濾紙片四周沒有透亮?????圈消滅說明該致病菌對(duì)此抗生素不敏感。(4)將菌液稀釋相同的倍數(shù),在牛肉膏蛋白胨培育基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于在選擇培育基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目,因此,牛肉膏蛋白胨培育基可以作為對(duì)比,用來推斷選擇培育基是否起到了選擇作用。答案(1)沸水細(xì)胞膜(2)萃取蒸餾壓榨(3)敏感不敏感抗生素C的耐藥菌(4)C4.(2021·陜西長(zhǎng)安五校聯(lián)考)爭(zhēng)辯者初步篩選到能合成纖維素酶的菌株MC-1,回答以下問題。(1)為了獲得能合成纖維素酶的單菌落,可接受________法將初篩菌液接種在固體培育基上,這種培育基屬于________培育基。(2)關(guān)于制備固體培育基的敘述,錯(cuò)誤的是________。A.制備固體培育基時(shí)可以加入瓊脂B.操作的挨次為計(jì)算、稱量、溶化、倒平板、滅菌C.待培育基冷卻至50℃D.待平板冷卻凝固約5~10min后將平板倒過來放置(3)試驗(yàn)過程中如何防止其他微生物的污染?________。(4)下表的培育液pH均為4.8,若對(duì)MC-1中纖維素酶的活力進(jìn)行測(cè)定,則不能選擇表中的________培育液。(多選)(5)分別獲得了具有較高纖維素酶活性的菌株MC-1,為了在此基礎(chǔ)上獲得纖維素酶活性更高的菌株,最可行的做法是________。(6)某同學(xué)在培育過程中發(fā)覺培育基上感染了幾種細(xì)菌。若在以尿素為唯一氮源的培育基中加入________指示劑培育幾種菌后,指示劑變紅就可以鑒定其中含有能夠分解尿素的菌株;若在以纖維素為唯一碳源的培育基中加入________染料,培育后,培育基中消滅透亮?????圈,就可以鑒定其中含有纖維素分解菌。答案(1)劃線/涂布選擇(2)B(3)培育基滅菌、接種過程無菌操作(4)A、B、C(5)人工誘變(紫外線照射等)處理菌株,再進(jìn)行篩選(6)酚紅剛果紅5.回答下列有關(guān)微生物培育與運(yùn)用的問題。KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2gFeCl30.1gX1g維生素微量瓊脂15g(1)上表是篩選異養(yǎng)型細(xì)菌的培育基配方。從物理性質(zhì)上看該培育基屬于________培育基,其中成分X除了為目的菌供應(yīng)能源,還能供應(yīng)________。制備該培育基的一般操作挨次是計(jì)算→稱量→______→滅菌→______。對(duì)培育基進(jìn)行滅菌的常用方法是________。(2)如圖A、B是純化微生物培育的兩種接種方法,C、D是接種后培育的效果。某同學(xué)接種培育后獲得圖C所示效果,則其接受的接種方法是[]________([]選填“A”“B”);接種時(shí)可能的失誤操作是________。(3)微生物強(qiáng)化采油是利用某些微生物能降解石油、增大石油的乳化度、降低石油黏度的原理,通過向油井中注入含微生物的水來提高采油率的新技術(shù)。為篩選和純化該類微生物,應(yīng)向培育基中添加________作為唯一碳源;培育一段時(shí)間后在培育基上形成降油圈,此時(shí)選取________就可獲得高效菌株。解析(1)表中培育基的成分有凝固劑瓊脂,因此該培育基為固體培育基。培育基除應(yīng)含有水、無機(jī)鹽、特殊養(yǎng)分物質(zhì)(維生素等)外,還應(yīng)有碳源和氮源。制備固體培育基的一般挨次是計(jì)算→稱量→溶化→滅菌→倒平板。(2)圖A運(yùn)用接種環(huán),為平板劃線法,相應(yīng)培育效果如圖D所示;圖B運(yùn)用
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