DB33T 2110.3-2018 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 長(zhǎng)爪沙鼠 第3部分：遺傳質(zhì)量控制

DB33LaboratoryanimalMongolian浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I嬰1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物長(zhǎng)爪沙鼠第3部分：遺傳質(zhì)量控制本部分適用于長(zhǎng)爪沙鼠的遺傳分類、繁育和遺傳質(zhì)長(zhǎng)爪沙鼠Mongoliangerbil（Merionesunguieulataus）封閉群（遠(yuǎn)交群）closedcolonyoroutbred字母應(yīng)大寫，后面的字母小寫，一般不超過(guò)4個(gè)字母4封閉群長(zhǎng)爪沙鼠的繁殖方法4.1封閉群長(zhǎng)爪沙鼠的繁殖原則盡量保持封閉群長(zhǎng)爪沙鼠的遺傳概貌和生理特征，避免近交系數(shù)隨繁殖代數(shù)增加而過(guò)快上4.2.1作為繁殖用原種的長(zhǎng)爪沙鼠應(yīng)遺傳背景明確，來(lái)源清楚，有較完整的資料（包括種群名稱、來(lái)2種數(shù)目參照GB14923執(zhí)行。采用循環(huán)交5封閉群長(zhǎng)爪沙鼠的遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè)5.1封閉群長(zhǎng)爪沙鼠的遺傳質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)主要生物學(xué)特性等并能充分表明新培育的或引種的封閉群長(zhǎng)爪沙鼠符合封閉群定義的規(guī)定。b)用于封閉群保種及生產(chǎn)的繁殖記錄卡5.2封閉群長(zhǎng)爪沙鼠遺傳質(zhì)量檢測(cè)方法及實(shí)施5.2.1采樣取長(zhǎng)爪沙鼠的血液或其他組織。血液樣本不少于1毫升/只，其5.2.2檢測(cè)方法5.2.3結(jié)果判斷群體內(nèi)遺傳變異采用平均雜合度指標(biāo)或群體平衡狀態(tài)方法進(jìn)行當(dāng)用雜合度來(lái)判定時(shí),平均雜合度在0.5～0.7的群體，判定為合格的封閉群群體。因頻率，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。如果沒(méi)有達(dá)到平衡狀態(tài)，說(shuō)明群體的基因頻率或基因型頻率發(fā)生變化，該封閉5.2.4檢測(cè)時(shí)間間隔5.2.5結(jié)論與報(bào)告3A.1儀器設(shè)備PCR儀，遺傳分析儀，4℃冰箱，-20℃冰箱，低溫高速離心機(jī)，水浴鍋，感量為0.0001g的分析A.2基因組DNA的提取A.3微衛(wèi)星位點(diǎn)用28個(gè)分布于長(zhǎng)爪沙鼠染色體上的微衛(wèi)星位點(diǎn)檢測(cè)封閉群長(zhǎng)爪沙鼠的遺傳概貌。各微衛(wèi)星位點(diǎn)的名稱、引物序列、等位基因數(shù)、PCR反應(yīng)的Tm值及等位基因分布表A.1長(zhǎng)爪沙鼠各微衛(wèi)星位點(diǎn)的引物序列、最佳擴(kuò)增條件、等位基因數(shù)及等位基數(shù)AF200942AF200943AF200944AF200946AF200945AGTCCCTATTACATCCACAAF200941AF20094794表A.1長(zhǎng)爪沙鼠各微衛(wèi)星位點(diǎn)的引物序列、最佳擴(kuò)增條件度GTTTTTCTCAGAAGAATGCAAAAAGAATTGCACATCCACT99AATCCTTGTTCACTCTATCAAGTAACATGGAACATCGAC9ACACTCAGAGACCATGAGTA9GACATTCCTTAAGAGAGACAG5PCR產(chǎn)物，經(jīng)1.5%的瓊脂糖凝膠電泳以及凝膠成像系統(tǒng)拍照檢測(cè)擴(kuò)增結(jié)果。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)確保擴(kuò)增出目的片斷后，選擇分別以FAM、HEX、TAMRA標(biāo)記的三個(gè)位點(diǎn)的擴(kuò)增產(chǎn)物，以1:3:5體積比混合，取1μl上樣進(jìn)A.5STR掃描結(jié)果的判讀與統(tǒng)計(jì)分析A.5.1STR掃描結(jié)果的判讀A.5.2運(yùn)用群體遺傳分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析將所有樣本的每個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的基因型以ab,bb…等形式運(yùn)A.6結(jié)果判斷群體內(nèi)遺傳變異采用平均雜合度指標(biāo)或群體平衡狀態(tài)方法進(jìn)行當(dāng)用雜合度來(lái)判定時(shí),平均雜合度在0.5～0.7的群體，判定為合格的封閉群群體。