實時熒光定量PCR儀ViiA7操作步驟

實時熒光定量PCR儀ViiA7操作步驟實時熒光定量PCR儀ViiA7操作步驟——以RNaseP示例實驗為例一、定義384孔樣品模塊的實驗屬性打開電腦訪問ViiA7軟件，然后打開左側(cè)儀器開關(guān)。單擊ExperimentSetup圖標(biāo)。單擊ExperimentProperties以訪問ExperimentProperties屏幕。在ViiA7軟件中設(shè)計RNaseP實驗示例時，請輸入：二、使用Define屏幕定義RNaseP示例實驗的目標(biāo)基因、樣品。1.單擊Define以訪問Define屏幕。2.定義目標(biāo)基因a.單擊New以增加和定義目標(biāo)基因。b.在目標(biāo)基因表中，單擊TargetName列中的一個單元格，并輸入：c.（可選）單擊Save以便將新增或原有的正在編輯的目標(biāo)基因保存到TargetLibrary。d.單擊AddSaved從目標(biāo)基因庫添加目標(biāo)基因。3.定義樣品a.單擊New以增加和命名樣品。b.在樣品表中，單擊SampleName列中的一個單元格，并輸入：c.（可選）單擊Save以將新增或原有的正在編輯的樣品保存到SampleLibrary。d.單擊AddSaved從樣品庫添加樣品。4.（可選）定義生物學(xué)平行測定a.在DefineBiologicalReplicatesGroups表中，單擊New以增加和命名生物學(xué)平行測定組。b.從下拉菜單選擇Color。c.單擊Comments列，以便為該生物學(xué)平行測定組添加注釋。注：實驗示例不使用生物學(xué)平行測定組。保留BiologicalReplicateGroups空白。5.選擇用作參比熒光的染料ROX。三、分配目標(biāo)基因、樣品和生物學(xué)組利用Assign（分配）屏幕將目標(biāo)基因、樣品和生物學(xué)平行測定組分配到RNaseP實驗示例反應(yīng)板內(nèi)的各孔。注：您可以在不進(jìn)行分配的情況下開始運行，但在擴(kuò)增曲線中，將不會有實時數(shù)據(jù)（只有在您已經(jīng)對板進(jìn)行設(shè)置后，才可以見到擴(kuò)增曲線）。1.單擊Assign以訪問Assign屏幕。2.定義并設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品。a.單擊Assign屏幕上的DefineandSetUpStandards（定義和設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品）。b.選擇目標(biāo)基因。c.定義標(biāo)準(zhǔn)曲線。d.為標(biāo)準(zhǔn)品選擇和安排反應(yīng)孔。3.目標(biāo)基因和樣品。a.利用Assign屏幕上的板布局或反應(yīng)孔表選擇反應(yīng)孔。b.利用下拉菜單分配目標(biāo)基因RNaseP為其任務(wù)。c.選擇您想要分配給所選反應(yīng)孔的樣品附近的復(fù)選框。四、設(shè)置運行方法利用RunMethod屏幕為RNaseP實驗設(shè)置運行方法。1.單擊RunMethod以訪問RunMethod屏幕。2.為每個孔的反應(yīng)體積輸入1到20的數(shù)字。對于下列消耗品，ViiA?7儀器支持的最大反應(yīng)體積如下：①MicroAmp?Optical384孔反應(yīng)板–20μL②微流體卡–1μL3.在GraphicalView選項卡中：①確保熱循環(huán)擴(kuò)增曲線適合您的試劑。②如需要，可對默認(rèn)的運行方法進(jìn)行編輯，或用ViiA?7Dx軟件隨附的運行方法庫中的一個運行方法代替默認(rèn)運行方法。③通過單擊啟用數(shù)據(jù)采集。注：當(dāng)需要對各階段實時采集的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析時，啟用數(shù)據(jù)采集特別有用。④編輯升降溫速度。您可以增加或降低某一階段的升降溫速度。⑤編輯PCR階段a.更改PCR階段的循環(huán)次數(shù)。b.選擇EnableAutoDelta復(fù)選框以增加或降低后續(xù)各循環(huán)的溫度和（或）保溫時間。您還可以更改AutoDelta的起始循環(huán)。啟用AutoDelta后會顯示圖標(biāo)。單擊AutoDeltaOff圖標(biāo)以改變AutoDeltaSettings對話框中循環(huán)階段的AutoDelta設(shè)置。然后，單擊SaveSetting以顯示AutoDeltaOn圖標(biāo)。五、開始實驗1.觸碰ViiA?7DxInstrument儀器觸屏上的按鈕，或單擊ViiA7軟件InstrumentConsole屏幕的OpenDoor，以從儀器側(cè)面彈出板適配器。2.將反應(yīng)板或微流體卡放到板適配器上。確保反應(yīng)板或微流體卡正確對齊。①確?？譇1位于反應(yīng)板或微流體卡托盤左上方的位置。②確保反應(yīng)板或微流體卡的條形碼朝向儀器的前面。3.觸碰ViiA?7DxInstrument儀器觸屏上的按鈕，或單擊ViiA?7軟件Inst