2025年浙教版選擇性必修3生物上冊階段測試試卷

…………○…………內…………○…………裝…………○…………內…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………※※請※※不※※要※※在※※裝※※訂※※線※※內※※答※※題※※…………○…………外…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………第=page22頁，總=sectionpages22頁第=page11頁，總=sectionpages11頁2025年浙教版選擇性必修3生物上冊階段測試試卷615考試試卷考試范圍：全部知識點；考試時間：120分鐘學校：______姓名：______班級：______考號：______總分欄題號一二三四五六總分得分評卷人得分一、選擇題(共9題，共18分)1、戊型肝炎病毒是一種RNA病毒；ORF2基因編碼的結構蛋白（pORF2）位于病毒表面，構成病毒的衣売。我國科研人員利用基因工程技術，在大腸桿菌中表達pORF2，制備戊型肝炎疫苗，過程如圖。下列關于該疫苗的敘述正確的是（）

A.過程①需要的酶是RNA聚合酶，原料是U、G、CB.重組基因表達載體上的啟動子需來源于戊型肝炎病毒C.過程⑤需要用聚乙二醇處理大腸桿菌使其處于感受態(tài)D.過程⑥大量制備pORF2蛋白前應做相應的檢測與鑒定2、甲；乙兩圖表示從細菌細胞中獲取目的基因的兩種方法；以下說法中錯誤的是（）

A.甲方法可建立該細菌的基因組文庫B.乙方法可建立該細菌的cDNA文庫C.甲方法要以脫氧核苷酸為原料D.乙方法需要反轉錄酶參與3、下列有關腐乳制作的敘述，正確的是（）A.所使用豆腐含水量過高有利于毛霉菌絲生長B.腐乳坯堆積會改變發(fā)酵溫度而影響毛霉生長C.鹵湯處理可使豆腐塊變硬且能抑制雜菌生長D.加鹽腌制可抑制雜菌生長且能賦予獨特風味4、A種植物細胞和B種植物細胞的結構如圖所示（僅顯示細胞核）；將A；B兩種植物細胞去掉細胞壁后，誘導二者的原生質體融合，形成單核的雜種細胞，若經(jīng)過組織培養(yǎng)得到了雜種植株，則該雜種植株是（）

A.二倍體，基因型是DdYyRrB.三倍體，基因型是DdYyRrC.四倍體，基因型是DdYyRrD.四倍體，基因型是DDddYYyyRRrr5、微生物代謝過程中產(chǎn)生的CO32-，可與環(huán)境中的Ca2+反應形成碳酸鈣沉淀，這種現(xiàn)象稱為微生物誘導碳酸鈣沉淀（MICP）。MICP形成的機制多種多樣，通過細菌分解尿素引起碳酸鈣沉淀是最廣泛的方式。下列相關說法正確的是（）A.尿素只有被土壤中的細菌分解成氨后，才能被植物利用B.通常用以尿素為唯一碳源的培養(yǎng)基篩選分解尿素的細菌C.在培養(yǎng)基中加入酚酞指示劑，可以初步鑒定尿素分解菌D.尿素分解菌可以分解碳酸鈣質碎石，有效避免土壤板結6、農(nóng)桿菌轉化法是植物轉基因技術中常用的轉化方法之一。下列與該方法相關的敘述，錯誤的是（）A.土壤農(nóng)桿菌是重組質粒的受體細胞B.T—DNA是擬核DNA上的一段序列C.農(nóng)桿菌能侵染雙子葉植物和裸子植物D.新鮮葉圓片與農(nóng)桿菌在適宜條件下共培養(yǎng)，部分細胞會被轉化7、野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長，賴氨酸營養(yǎng)缺陷型突變菌由于發(fā)生基因突變只能在添加了賴氨酸的培養(yǎng)基上生長。下圖為以野生型菌株為材料，誘變、純化賴氨酸營養(yǎng)缺陷突變株的部分流程圖，數(shù)字代表培養(yǎng)基，A、B、C表示操作步驟。下列有關說法正確的是（）

（原位影印是指用無菌絨布輕蓋在已長好菌落的培養(yǎng)基②上；然后不轉動任何角度，將②上的菌落按原位“復印”至新的培養(yǎng)基③和④上）

A.野生型大腸桿菌能夠合成所需的全部氨基酸，因此培養(yǎng)基中無需提供氮源B.①②④培養(yǎng)基中需添加賴氨酸，而③培養(yǎng)基中不能添加賴氨酸C.需將①中的菌液適當稀釋后，用接種環(huán)蘸取菌液在②上進行劃線接種D.從④培養(yǎng)基中挑取乙菌落進行純化培養(yǎng)即可獲得所需突變株8、重慶忠州豆腐乳被業(yè)界稱為“腐乳王”，因風味獨特而盛銷不衰，遠銷英國、加拿大、中東、東南亞等國家和地區(qū)，腐乳的制作流程為“讓豆腐塊長出白色菌絲（前期發(fā)酵）→加鹽腌制→加鹵湯裝瓶→密封腌制”。下列相關說法正確的是（）A.腐乳制作過程中有多種微生物的參與，其中起主要作用的是曲霉B.霉菌分泌的蛋白酶等物質，能將蛋白質分解為小分子肽和氨基酸C.加鹽和鹵湯腌制的目的僅僅是調味，并不能抑制瓶內雜菌的生長D.豆腐塊相當于固體培養(yǎng)基，腌制用的玻璃瓶常用紫外線進行滅菌9、科研人員用電融合的方法誘導母羊的乳腺上皮細胞與另一只羊的去核卵細胞融合，然后將重構胚移植到代孕母羊的體內，最終培育出了克隆羊多莉。下表是科學家獲得的部分實驗數(shù)據(jù)，下列相關敘述，不合理的是（）。實驗組別序號①②核供體細胞6歲母羊的乳腺上皮細胞發(fā)育到第9天的早期胚胎細胞融合成功細胞數(shù)277385早期發(fā)育成功胚胎數(shù)2990移植后成功懷孕母羊數(shù)/代孕母羊數(shù)1/1314/27出生并成活羔羊數(shù)1（多莉）4A.兩組羔羊性狀主要與核供體母羊相同B.②組比①組成功率高，可能因為胚胎細胞分化程度低C.本實驗涉及到細胞培養(yǎng)、核移植和胚胎分割技術D.克隆技術應用于人類，可能存在一定的倫理風險評卷人得分二、多選題(共7題，共14分)10、如圖是研究人員從紅棕壤中篩選高效分解尿素細菌的示意圖；有關敘述正確的是（）

A.在配制步驟②、③的培養(yǎng)基時，應先調pH后高壓蒸汽滅菌B.步驟③采用涂布平板法接種，并需向牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入尿素C.步驟④挑取③中不同種的菌落分別接種，比較細菌分解尿素的能力D.步驟③純化分解尿素細菌的原理是將聚集的細菌分散，可以獲得單細胞菌落11、下列相關實驗的敘述，正確的是（）A.發(fā)酵過程中，要嚴格控制溫度、pH等發(fā)酵條件，否則會影響菌種代謝產(chǎn)物的形成B.DNA的粗提取與鑒定實驗中，用菜花替代雞血作為實驗材料，實驗操作會有不同C.PCR實驗中使用的微量離心管、槍頭、緩沖液、蒸餾水等在使用前不用滅菌D.用瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物時，DNA分子的遷移速率與凝膠濃度、分子大小無關12、B基因存在于水稻基因組中；其僅在體細胞（2n）和精子中正常表達，但在卵細胞中不轉錄。為研究B基因表達對卵細胞的影響，設計了如下實驗，培育轉基因植株。以下鑒定篩選轉基因植株的方式正確的是（）

A.將隨機斷裂的B基因片段制備成探針進行DNA分子雜交B.以Luc基因為模板設計探針進行DNA分子雜交C.以B基因編碼蛋白的序列為模板設計探針與從卵細胞提取的mRNA雜交D.檢測加入熒光素的卵細胞中是否發(fā)出熒光13、下表有關基因表達的選項中；能夠表達的有（）

?；虮磉_的細胞表達產(chǎn)物A細菌抗蟲蛋白基因抗蟲棉葉肉細胞細菌抗蟲蛋白B人酪氨酸酶基因正常人皮膚細胞人酪氨酸酶C動物胰島素基因大腸桿菌工程菌細胞動物胰島素D兔血紅蛋白基因兔成熟紅細胞兔血紅蛋白A.AB.BC.CD.D14、我國首例綠色熒光蛋白“轉基因”克隆豬的培育過程如圖所示，其中字母代表結構或生物，數(shù)字代表過程，下列相關敘述錯誤的是（）

A.為了①和②的順利完成，需要用滅活的病毒對細胞進行誘導B.將C的細胞核去掉，實質上是去除紡錘體—染色體復合物C.為避免將E植入F時產(chǎn)生排斥反應，移植前應給F注射免疫抑制劑D.移入F的桑葚胚要經(jīng)歷囊胚、原腸胚等階段才能形成豬的幼體15、轉基因作物的推廣種植，大幅度提高了糧食產(chǎn)量，取得了巨大的經(jīng)濟效益和生態(tài)效益碩果累累的轉基因成果在帶給人們喜悅的同時，也促使人們關注轉基因生物的安全性問題。下列有關轉基因作物的安全性的敘述，正確的是（）A.轉入抗性基因的植物可能成為“入侵物種”，影響生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性B.抗性基因可能會隨花粉傳播到田間近緣野生植物體內，造成基因污染C.若目的基因來自自然界，則培育出的轉基因植物不會有安全性問題D.大面積種植抗蟲棉，有可能會導致棉鈴蟲群體中相關抗性基因頻率增大16、某牧場引進一只產(chǎn)肉性能優(yōu)異的良種公羊；為了在短時間內獲得具有該公羊優(yōu)良性狀的大量后代，該牧場通過以下流程進行了相關操作。下列有關敘述錯誤的是（）

A.在體外受精前對采集到的精子要進行獲能處理B.用孕激素對供體母羊進行處理，可獲得更多的卵母細胞C.為避免受體母羊對植入胚胎產(chǎn)生排斥反應，應注射免疫抑制劑D.為了提高已有胚胎的利用率，可采用胚胎分割技術評卷人得分三、填空題(共8題，共16分)17、一般包括______、______等技術18、微生物________________的方法很多，最常用的是_____________和__________________。19、通過統(tǒng)計平板上的________________，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結果準確，一般選擇菌落數(shù)在_________________________的平板進行計數(shù)。20、轉化的概念：是______進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持______的過程。21、目的基因是指：______22、沙門氏菌是一種常見的食源性致病菌；被感染了沙門氏菌的人或帶菌者的糞便污染的食品，會使人發(fā)生食物中毒。沙門氏菌的最適繁殖溫度為37°C，在20℃以上即能大出繁殖，其對熱抵抗力不強，在60℃的條件下15min就能被殺死。肉桂精油是從肉桂樹中提煉獲得的，具有不溶于水；易溶于有機溶劑且易揮發(fā)的特性，能抑制沙門氏菌的繁殖?；卮鹣铝袉栴}：

（1）培養(yǎng)沙門氏菌時要進行無菌操作，常用的滅菌方法有________（答出兩種）。用平板培養(yǎng)沙門氏菌時一般需要將平板________（填“倒置”或“正置”）。單個細菌在平板上會形成菌落，研究人員通?？筛鶕?jù)菌落的形狀、大小和顏色等特征來初步區(qū)分不同種的微生物，原因是________。

（2）從雞糞便取樣，經(jīng)選擇培養(yǎng)后需要經(jīng)過一系列________才能將樣品涂布到鑒別培養(yǎng)基上。對獲得的沙門氏菌常采用________的方法長期保存。

（3）根據(jù)題干信息，為避免食用被沙門氏菌污染的食品而引發(fā)的食物中毒，家庭中儲存、加工食品的方法是________。

（4）根據(jù)肉桂精油的化學特性，可采用________法來提取，提取過程中影響精油品質的因素有________。23、我國政府同樣禁止進行治療性克隆實驗。（選擇性必修3P108）()24、動物細胞培養(yǎng)的條件：_____、_____、_____、_____等。評卷人得分四、判斷題(共2題，共18分)25、通過體細胞核移植技術已經(jīng)獲得了多種克隆動物，該技術的成功率已經(jīng)很高。（選擇性必修3P54）()A.正確B.錯誤26、胚胎發(fā)育早期，細胞的數(shù)量不斷增加，胚胎的總體積也增加。()A.正確B.錯誤評卷人得分五、實驗題(共3題，共12分)27、單克隆抗體特異性強；靈敏度高，用于診療疾病具有準確；高效等特點。下圖表示單克隆抗體制備過程。

回答下列問題：

（1）若細胞B是小鼠的骨髓瘤細胞；則A是_________________細胞，誘導d過程常用的因素是_________________（答出一個即可）。

（2）用于篩選細胞D的培養(yǎng)基必需滿足兩個條件：一是_________________細胞都會死亡；二是保證_________________細胞能生長。

（3）使用合成培養(yǎng)基體外培養(yǎng)雜交瘤細胞時；通常需要加入_________________等一些天然成分，并置于含有_________混合氣體的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

（4）制備抗新冠病毒單克隆抗體檢測試劑，可用_________________（選填數(shù)字標號：①新冠病毒滅活疫苗、②新冠病毒RNA疫苗、③新冠病毒滅活疫苗或RNA疫苗）免疫小鼠，以獲得圖中的A細胞。28、釀酒；釀醋、腐乳、泡菜、醬制品等是源于中國的傳統(tǒng)發(fā)酵技術；為部分地區(qū)經(jīng)濟發(fā)展做出巨大貢獻。請依據(jù)相關生物學知識回到下列問題。

（1）泡菜腌制過程中，進行發(fā)酵的主要微生物在細胞結構上屬于___________生物。不能采用加入抗生素的方法來抑制雜菌的原因是____________________________。

（2）腐乳外部有一層致密的“皮”，是前期發(fā)酵時______等生物在豆腐表面上生長的菌絲。

（3）測定亞硝酸鹽含量的方法是___________，在泡菜腌制過程中定期測定亞硝酸鹽含量的目的是____________________________。

（4）為了保證既無雜菌，又能使發(fā)酵菌發(fā)揮正常作用，泡菜所用鹽水應__________再使用。

（5）某些制作泡菜的某些蔬菜也可用作DNA粗提取與鑒定，沸水浴條件下，提取出的DNA可與_________試劑反應呈_______________色。29、科學家的發(fā)現(xiàn)給人類的生活帶來了無限的想象；他們采集了某深海海域的沉積物樣品，分離；鑒定得到其中的深海放線菌，以期獲得具有前景的抗生素替代品。據(jù)此回答下列問題：

(1)研究人員欲篩選出深海放線菌進行研究，取1g沉積物樣品接種在液體培養(yǎng)基中搖瓶培養(yǎng)，稀釋后取菌液通過_______________法接種到高氏一號（加數(shù)滴質量分數(shù)為10%的酚）培養(yǎng)基表面以獲得單菌落。

(2)通過PCR技術擴增分離得到的放線菌的16SrRNA基因可進行菌株的種屬鑒定。PCR技術中起關鍵作用的酶是_____________。該技術能在放線菌總的DNA中專一性擴增出16SrRNA基因的原因是______________。PCR產(chǎn)物一般可通過_________________鑒定。

(3)科學家還將Oct3/4、Sox2、c-Mc和KIf4基因通過逆轉錄病毒轉入小鼠成纖維細胞中。2~3周后，這些細胞顯示出ES細胞的形態(tài)、具有活躍的分裂能力，它們就是iPS細胞。在這個實驗過程中，逆轉錄病毒的作用是_______________如何證明iPS細胞的產(chǎn)生不是由于培養(yǎng)基的作用？請寫出實驗設計思路______________評卷人得分六、綜合題(共4題，共24分)30、新冠病毒（COVID-19）是一種單股正鏈RNA病毒；為了更大限度地提升疫苗研發(fā)的成功率，我國的科研攻關組布局了新冠病毒的滅活疫苗；核酸疫苗、基因工程疫苗這3大類疫苗的技術路線。請回答下面關于疫苗生產(chǎn)的相關問題：

（1）2020年12月31日，新冠滅活疫苗已獲得國家藥監(jiān)局批準附條件上市。滅活疫苗是在體外培養(yǎng)新冠病毒，然后將其滅活，將其制成疫苗。在制備滅活疫苗時，要先取相關細胞進行________________（技術），再接種病毒。該過程中，要給細胞合適的培養(yǎng)條件，包括________________、適宜的營養(yǎng)、溫度和pH以及適宜的________________。

（2）基因工程疫苗被稱為第二代疫苗；是指將病毒基因片段導入合適的表達載體，在體外表達病毒抗原后經(jīng)純化制備而成的疫苗，或用能夠表達病毒抗原的活的重組載體本身制成的疫苗。常見的基因工程疫苗包括重組亞單位疫苗；病毒樣顆粒疫苗、活病毒載體疫苗等。

①重組亞單位疫苗相當于生產(chǎn)不完整的病毒，而是單獨生產(chǎn)最可能作為抗原的蛋白質制成疫苗。病毒的結構和病毒侵染人體細胞的過程如下圖所示。選擇蛋白________為重組亞單位疫苗的生產(chǎn)蛋白最合適。若要在體外獲得該病毒的DNA，需要向試管中加入________________________作為模板、________________________作為原料、________作為催化劑等進行合成。常選擇大腸桿菌作為相關基因的受體細胞，其優(yōu)點是_______________________________________________。

②活病毒載體疫苗是指將相關蛋白質基因導入某些活病毒本身，常用的病毒載體包括腺病毒、流感病毒等。腺病毒是一種常見的DNA病毒，其優(yōu)點包括宿主范圍廣泛、________________、病毒基因組相對容易操作、允許插入的外源基因容量大、病毒增殖速度快、顆粒比較穩(wěn)定、凍干后無須冷藏等，目前已經(jīng)成為最常用的病毒載體之一。在制造活病毒載體時，需要用到的工具酶是________________、________________等。

（3）核酸疫苗包括mRNA疫苗和DNA疫苗；是將編碼相關蛋白質的基因；mRNA或者DNA注入人體，利用自身細胞合成外源蛋白，刺激人體產(chǎn)生抗體。目前，莫德納公司和輝瑞/拜恩泰科的mRNA疫苗，已在美國和歐洲等地獲得緊急授權批準。

①已知RNA病毒的核酸有正鏈RNA（+RNA）和負鏈RNA（-RNA）等類型；其區(qū)別如下圖：

則mRNA疫苗中應將COVID-19中的RNA________（選填“本身”或“其互補鏈”）作為疫苗；注入人體。

②若將制好的RNA直接注入人體，會被人體內的________催化水解為核苷酸，因此可以將其裝入脂質體中，送入細胞。這些RNA進入細胞后，能不能遺傳下去？________（選填“能”或“不能”）。31、下圖是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的技術路線。圖中tet表示四環(huán)素抗性基因；amp表示氨芐青霉素抗性基因，BamHI；HindⅢ、SmaΙ直線所示為三種限制酶的切割位點：

（1）科學家用PCR的方法對人乳鐵蛋白基因進行體外擴增，加熱至94℃的目的是使DNA樣品的_______鍵斷裂；如果人乳鐵蛋白基因的部分序列是：

5’ATGGCTAGGAAC3’

3’TACCGATCCTTG5’

根據(jù)上述序列應選擇引物B和_______（填字母）進行PCR。

【選項A】引物：5’-TACCGA-3’【選項B】引物：5’-GTTCCT-3’

【選項C】引物：5’-AUGGCU-3’【選項D】引物：5’-ATGGCT-3’

（2）圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用_______、______限制酶同時切割載體和人乳鐵蛋白基因。篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含_________的培養(yǎng)基上進行。

（3）能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞中特異性表達的調控序列是______

【選項A】啟動子【選項B】tetR【選項C】復制原點【選項D】ampR

（4）過程①可采用的操作方法是________技術。

【選項A】農(nóng)桿菌轉化【選項B】大腸桿菌轉化【選項C】顯微注射【選項D】細胞融合。

（5）為檢測人乳鐵蛋白是否成功表達，通常可采用________技術。32、馬鈴薯是重要的經(jīng)濟作物；植物細胞工程在馬鈴薯的脫毒及育種等方面有重要應用。請回答下列問題：

(1)培育脫毒馬鈴薯時，外植體宜選用___________(“莖尖”葉片”)，不選另一個的理由是___________。

(2)植物組織培養(yǎng)常用到愈傷組織培養(yǎng)基、生芽培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基。在愈傷組織培養(yǎng)基上，外植體經(jīng)脫分化形成愈傷組織，愈傷組織是一團___________。在再分化階段，生長素和細胞分裂素參與了細胞分化方向的調節(jié)，與生根培養(yǎng)基相比，一般情況下生芽培養(yǎng)基中___________。

(3)馬鈴薯栽培種的抗病性和抗逆性較差，野生馬鈴薯種的抗病性和抗逆性較好，但二者存在雜交不親合性。利用野生馬鈴薯種，通過細胞工程改進馬鈴薯栽培種種質的思路是___________。

(4)避免微生物污染、優(yōu)化培養(yǎng)條件可提高植物組織培養(yǎng)的成功率。在植物組織培養(yǎng)時，應從___________等方面制定措施，減少污染(至少答出2點)；在培養(yǎng)室中培養(yǎng)時，注意優(yōu)化培養(yǎng)環(huán)境，控制___________等培養(yǎng)條件(至少答出3點)。33、（一）現(xiàn)科研人員研究利用玉米秸稈作為廉價的糖源轉化生產(chǎn)燃料酒精；不僅可以緩解能源危機；減少環(huán)境污染，而且是實現(xiàn)可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略的基本保障，具體的工藝流程如下圖。請回答下列問題：

（1）由于木質纖維素組成成分復雜、結構穩(wěn)定，生物降解時難以迅速進行，常用酸或堿預處理，目的是打斷纖維素內部的化學鍵，降低聚合度，易被_______水解。

（2）將預處理后的玉米秸稈進行_______滅菌，冷卻后接種一定濃度的里斯木霉菌懸液，24h就能產(chǎn)生大量的葡萄糖，葡萄糖與蒽酮試劑能產(chǎn)生顏色，為了檢測秸稈水解效果，可采用光電比色法測定糖液中的葡萄糖含量，之前制作_______的標準曲線（填寫坐標），使用的比色杯若光面玻璃不干凈，將導致測量的數(shù)據(jù)_______（填偏小、偏大或無影響）。推測加入里氏木霉菌懸液的用途是_______。

（3）發(fā)酵過程接種休哈塔酵母，該微生物在_______的發(fā)酵液中可以生長繁殖；而絕大多數(shù)其他微生物都因無法適應該環(huán)境而抑制。

（4）釀酒的殘渣堆積會積累醋桿菌，可從中篩選優(yōu)良菌株?？刹捎胈______方法將混合菌液接種到加有碳酸鈣粉末的固體培養(yǎng)基中，加入碳酸鈣可以篩選菌株的實驗原理是_______。

（二）轉基因技術可以使重組生物增加人們所期望的新性狀；培育出新品種，下圖是基因工程操作流程圖，請根據(jù)圖示回答下列問題：

（5）獲取序列未知的目的基因，常用的方法是從______中提取，①過程中常用的酶有______。

（6）若要通過工程菌獲得人類胰島素，②過程中常用氯化鈣處理大腸桿菌，其目的是______。為了檢測目的基因是否成功表達出胰島素，需要采用的方法有______

（7）在培育轉基因抗凍蕃茄時，將離體蕃茄葉組織經(jīng)脫分化形成愈傷組織，再通過______培養(yǎng)得到單細胞，將外源基因導入其中并培育形成抗凍蕃茄植株，過程④中用到的植物細胞工程技術是______

（8）若要培育能生產(chǎn)彩色羊毛的轉基因羊，則需將轉基因的受體細胞培養(yǎng)到早期胚胎后，再通過______過程形成轉基因羊。參考答案一、選擇題(共9題，共18分)1、D【分析】【分析】

基因工程技術的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取；利用PCR技術擴增和人工合成；（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟；基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等；（3）將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法；（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

【詳解】

A；戊型肝炎病毒是一種RNA病毒；過程①是以病毒RNA為模板合成DNA，獲取目的基因的過程，需要的酶是逆轉錄酶，原料是四種脫氧核苷酸，A錯誤；

B；啟動子是一段有特殊結構的DNA片段；其作用是供RNA聚合酶的識別結合以驅動目的基因的轉錄，啟動子具有物種或組織特異性，構建在大腸桿菌細胞內特異表達pORF2蛋白的載體時，需要選擇大腸桿菌細胞的啟動子，而不能選擇其他物種和組織細胞的啟動子，B錯誤；

C、將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法，需要用Ca2+處理大腸桿菌；增大大腸桿菌細胞壁的透過性，使其處于感受態(tài)，C錯誤；

D；過程⑥大量制備pORF2蛋白前應對受體大腸桿菌進行目的基因的檢測與鑒定；篩選出能表達pORF2蛋白的大腸桿菌進行培養(yǎng)，大量制備pORF2蛋白，D正確。

【點睛】2、C【分析】【分析】

分析圖示可知，甲圖中a表示從細菌細胞中獲取的含目的基因的DNA分子，b表示用限制酶切割DNA分子；乙圖表示通過反轉錄法合成目的基因；c表示從細菌細胞中獲取的RNA，d表示反轉錄過程。

【詳解】

A；甲圖獲取的是該細菌的全部DNA分子；因此用限制酶切割后可用于構建基因組文庫，A正確；

B；乙圖表示通過反轉錄法得到DNA分子；只包含該生物的部分基因，因此可用于構建cDNA文庫，B正確；

C；甲圖中是利用限制酶切割得到的目的基因；所以不需要脫氧核苷酸原料，C錯誤；

D；乙圖為反轉錄過程；需要逆轉錄酶參與，D正確。

故選C。

【點睛】

本題考查獲取目的基因的方法，其中比較基因組文庫和部分基因文庫，掌握反轉錄過程是解題的關鍵。3、B【分析】【分析】

參與腐乳制作的微生物主要是毛霉；其新陳代謝類型是異養(yǎng)需氧型。腐乳制作的原理：毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪水解成甘油和脂肪酸。

【詳解】

A；豆腐含水量過高不利于毛霉生長；A錯誤；

B；腐乳坯堆積會導致發(fā)酵溫度升高；從而影響毛霉生長，B正確；

C；加鹽腌制可以析出豆腐中的水分；使豆腐塊變硬，并可抑制雜菌的生長，使豆腐塊變硬且能抑制雜菌生長是鹽的作用，而不是鹵湯的作用，C錯誤；

D；加鹽腌制可以抑制雜菌生長；但不能賦予獨特風味，D錯誤。

故選B。

【點睛】4、C【分析】【分析】

植物體細胞雜交利用的原理是細胞膜的流動性；細胞的全能性，其操作流程為：首先獲得植物的體細胞，而后去除細胞壁以獲得原生質體，然后利用離心；電刺激、聚乙二醇等試劑誘導原生質體融合，當該原生質體再生出新的細胞壁意味著雜種細胞誘導成功，而后對雜種細胞進行植物組織培養(yǎng)技術，獲得雜種植株，該過程的意義是克服遠緣雜交不親和的障礙。

【詳解】

據(jù)圖可知，A物種基因型為Dd，屬于二倍體，B物種的基因型為YyRr，也屬于二倍體。植物細胞融合后形成的雜種細胞含有兩個親本的遺傳物質，基因型為DdYyRr；屬于異源四倍體，即C正確。

故選C。

【點睛】5、A【分析】由于細菌在分解尿素的過程中合成脲酶；脲酶將尿素分解成氨，會使培養(yǎng)基堿性增強，pH升高，所以可以用檢測pH的變化的方法來判斷尿素是否被分解，可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，尿素被分解后產(chǎn)生氨，pH升高，指示劑變紅。

【詳解】

A；尿素不能直接被植物吸收；只有被土壤中的細菌分解成氨后，才能被植物利用，A正確；

B；通常用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基篩選分解尿素的細菌；B錯誤；

C；根據(jù)分析可知；在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，可以初步鑒定尿素分解菌，C錯誤；

D；由題意可知；尿素分解菌分解尿素可引起碳酸鈣沉淀，而不能分解碳酸鈣質碎石，D錯誤。

故選A。6、B【分析】【分析】

農(nóng)桿菌轉化法的原理：農(nóng)桿菌中的Ti質粒上的T-DNA可轉移至受體細胞；并且整合到受體細胞染色體的DNA上。根據(jù)農(nóng)桿菌的這一特點，如果將目的基因插入到Ti質粒的T-DNA上，通過農(nóng)桿菌的轉化作用，就可以把目的基因整合到植物細胞中染色體的DNA上。

【詳解】

A；將目的基因與載體相連形成重組質粒后；要導入土壤農(nóng)桿菌內，再讓農(nóng)桿菌去侵染植物細胞，A正確；

B；T-DNA是位于Ti質粒中的一段序列；不位于擬核，B錯誤；

C；農(nóng)桿菌能在自然條件下侵染雙子葉植物和裸子植物；對大多數(shù)單子葉植物沒有侵染能力，C正確；

D；農(nóng)桿菌轉化法的轉化效率不是100%；因此適宜條件下，新鮮葉圓片與農(nóng)桿菌共培養(yǎng)后，一部分細胞會被轉化，D正確。

故選B。7、B【分析】【分析】

培養(yǎng)基：人們按照微生物對營養(yǎng)物質的不同需求；配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質，是進行微生物培養(yǎng)的物質基礎。

培養(yǎng)基種類：培養(yǎng)基按照物理性質可分為液體培養(yǎng)基；半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。

微生物的接種方法：平板劃線法和稀釋涂布平板法。

①平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作；將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。

②稀釋涂布平板法：將菌液進行一系列的梯度稀釋；然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。

【詳解】

A；野生型大腸桿菌不能夠合成所需的全部氨基酸；并且還有別的有機物需要氮元素，因此培養(yǎng)基中需要提供氮源，A錯誤；

B；紫外線照射菌液；使大腸桿菌產(chǎn)生基因突變，便于篩選賴氨酸營養(yǎng)缺陷突變株，由于基因突變頻率較低，且不定向，因此發(fā)生賴氨酸營養(yǎng)缺陷型突變的菌種不多，因此需要在①中添加賴氨酸來增大該突變株濃度，以便進行稀釋涂布操作，②④中添加賴氨酸目的是使賴氨酸營養(yǎng)缺陷突變株能夠在該培養(yǎng)基上生長，③不添加賴氨酸，賴氨酸營養(yǎng)缺陷突變株不能在其上繁殖形成菌落，通過③④對比，選擇能在④中生長但是不能在③中生長的菌落即為賴氨酸營養(yǎng)缺陷突變株，故①②④培養(yǎng)基中需添加賴氨酸，而③培養(yǎng)基中不能添加賴氨酸，B正確；

C；需將①中的菌液適當稀釋后；用微量移液器吸取少量菌液，用涂布器在②上進行涂布接種，C錯誤；

D；乙菌落在③培養(yǎng)基內對應位置也有菌落；屬于野生型，不是所需突變株，D錯誤。

故選B。8、B【分析】【分析】

腐乳的制作原理：參與豆腐發(fā)酵的微生物有青霉；酵母、曲霉、毛霉等多種；其中起主要作用的是毛霉，其代謝類型為異養(yǎng)需氧型；毛霉能夠產(chǎn)生蛋白酶和脂肪酶，將蛋白質和脂肪分別水解成小分子的肽和氨基酸、甘油和脂肪酸。

【詳解】

A；參與豆腐發(fā)酵的微生物有青霉、酵母、曲霉、毛霉等多種；其中起主要作用的是毛霉，A錯誤；

B；毛霉能夠產(chǎn)生蛋白酶和脂肪酶；將蛋白質和脂肪分別水解成小分子的肽和氨基酸、甘油和脂肪酸，B正確；

C；加鹽腌制和加鹵湯的目的是抑制瓶內雜菌生長的同時又能調制腐乳的風味；C錯誤；

D；豆腐塊相當于固體培養(yǎng)基；能為微生物發(fā)酵提供營養(yǎng)條件等，在密封腌制時，最好將瓶口通過酒精燈的火焰，用灼燒法進行滅菌，以防止瓶口被污染，D錯誤。

故選B。9、C【分析】【分析】

胚胎移植的基本程序主要包括:

①對供；受體的選擇和處理（選擇遺傳特性和生產(chǎn)性能優(yōu)秀的供體；有健康的體質和正常繁殖能力的受體。用激素進行同期發(fā)情處理，用促性腺激素對供體母牛做超數(shù)排卵處理)；

②配種或人工授精；

③對胚胎的收集；檢查、培養(yǎng)或保存（對胚胎進行質量檢查；此時的胚胎應發(fā)育到桑椹或胚囊胚階段)；

④對胚胎進行移植；

⑤移植后的檢查。

【詳解】

A；由于遺傳物質主要在細胞核內；所以兩組羔羊性狀主要與核供體母羊相同，A正確；

B；動物胚胎細胞分化程度低、易恢復全能性；故②組比①組成功率高，B正確；

C；本實驗涉及到細胞核移植、動物細胞培養(yǎng)；不涉及胚胎分割技術，C錯誤；

D；我國禁止對人類的克隆原因是克隆人一旦成功；將嚴重威脅著人類社會的穩(wěn)定，打破原有的人際關系，可能引發(fā)一系列社會倫理、道德和法律問題，D正確。

故選C。二、多選題(共7題，共14分)10、A:C:D【分析】【分析】

微生物常見的接種的方法：①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板；接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。

【詳解】

A；在配制步驟②、③的培養(yǎng)基時；為避免雜菌污染，應先調pH值后再進行高壓蒸汽滅菌，A正確；

B；要篩選出能高效分解尿素細菌；所選用的培養(yǎng)基要以尿素為唯一氮源，但牛肉膏和蛋白胨中都含有氮源，因此步驟③所用的培養(yǎng)基中不能含有牛肉膏蛋白胨，B錯誤；

C；步驟④挑取③中不同種的菌落分別接種；形成相互對照試驗，比較細菌分解尿素的能力，C正確；

D；步驟③純化分解尿素的原理是將聚集的細菌分散；可以獲得單細胞菌落，D正確。

故選ACD。11、A:B【分析】【分析】

1；DNA粗提取和鑒定過程中破碎動植物細胞；獲取含DNA的濾液區(qū)別：動物細胞的破碎比較容易，以雞血細胞為例，在雞血細胞液中加入一定量的蒸餾水，同時用玻璃棒攪拌，過濾后收集濾液即可。如果實驗材料是植物細胞，需要先用洗滌劑溶解細胞膜。例如，提取洋蔥的DNA時，在切碎的洋蔥中加入一定的洗滌劑和食鹽，進行充分的攪拌和研磨，過濾后收集研磨液。

2；影響DNA在瓊脂糖凝膠中遷移速率的因素很多；包括DNA分子大小和構型、瓊脂糖濃度、所加電壓、電泳緩沖液的離子強度等。

【詳解】

A；微生物發(fā)酵過程中要嚴格控制溫度、pH、溶氧、通氣量與轉速等發(fā)酵條件；因為環(huán)境條件的變化不僅會影響菌種的生長繁殖，而且會影響代謝產(chǎn)物的形成，A正確；

B；用菜花替代雞血作為實驗材料；其實驗操作步驟不完全相同，如植物細胞有細胞壁，破碎細胞時需要研磨并加入食鹽和洗滌劑，B正確；

C；為避免外源DNA等因素的污染；PCR反應中使用的微量離心管、槍頭、緩沖液以及蒸餾水等在使用前必須進行高壓滅菌，C錯誤；

D；用瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物時；DNA分子的遷移速率與瓊脂糖的濃度、DNA分子大小及構型等因素有關，D錯誤。

故選AB。

【點睛】

本題考查發(fā)酵技術、DNA和蛋白質技術等相關知識，對于此類試題，需要考生注意的細節(jié)較多，如實驗的原理、實驗需要采用的試劑及試劑的作用、實驗現(xiàn)象等，需要考生在平時的學習過程中注意積累。12、B:C:D【分析】【分析】

分析題圖：圖中①表示將目的基因導入農(nóng)桿菌；②表示采用農(nóng)桿菌轉化法將目的基因導入植物細胞，之后再采用植物組織培養(yǎng)技術獲得轉基因植株。

【詳解】

A；探針是指用放射性同位素（或熒光分子）標記的含有目的基因DNA片段；因此要以B基因編碼蛋白的序列為模板設計探針，而不是將隨機斷裂的B基因片段制備成探針，A錯誤；

B；可用DNA分子雜交技術；即以Luc基因為模板設計探針進行DNA分子雜交，B正確；

C；用標記的目的基因作探針與mRNA雜交；即以B基因編碼蛋白的序列為模板設計探針與從卵細胞提取的mRNA雜交，C正確；

D；檢測目的基因是否翻譯成蛋白質；由圖可知B基因與Luc基因連接形成B-Luc融合基因，因此可通過Luc基因表達，檢測加入熒光素的卵細胞中是否發(fā)出熒光，D正確。

故選BCD。13、A:B:C【分析】【分析】

基因工程的原理是基因重組；把一種生物的基因轉入另一種生物后，目的基因可以在受體細胞中表達出相應的蛋白質。

【詳解】

A；細菌抗蟲蛋白基因可通過轉基因技術轉入棉花體內；在棉花的葉肉細胞中表達產(chǎn)生細菌抗蟲蛋白，使棉花具有抗蟲能力，A正確；

B；正常人皮膚細胞中含有人酪氨酸酶基因；人酪氨酸酶基因能夠表達產(chǎn)生人酪氨酸酶，B正確；

C；動物胰島素基因可通過轉基因技術轉移到大腸桿菌體內；在大腸桿菌工程菌細胞中合成動物胰島素，C正確；

D；兔屬于哺乳動物；其成熟的紅細胞中沒有細胞核和眾多細胞器，所以不可能表達出血紅蛋白，D錯誤。

故選ABC。

【點睛】14、A:C【分析】【分析】

分析圖解，可以看出綠色熒光蛋白“轉基因”克隆豬涉及了多項生物工程技術。圖中B表示基因表達載體的構建；然后將目的基因導入豬胎兒的成纖維細胞，經(jīng)過動物細胞培養(yǎng)篩選出轉基因體細胞，然后該細胞的細胞核與豬的卵細胞進行細胞核移植獲得重組細胞。重組細胞經(jīng)過早期胚胎培養(yǎng)到桑椹胚或囊胚期，最后經(jīng)過胚胎移植技術將早期胚胎移植到代孕母豬子宮內，最后生成轉基因克隆豬。由此可見，該過程中利用基因工程、動物細胞培養(yǎng)、細胞核移植、早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術。

【詳解】

A；①是將重組DNA導入受體細胞；直接采用顯微注射法，無需對受體細胞進行誘導，②過程通常是將細胞注入去核卵母細胞中，然后利用電融合法使D構建成功，A錯誤；

B；C是處于MⅡ期的卵母細胞；這個時期的“核”實際上是紡錘體—染色體復合物，B正確；

C；受體對移入的外來胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應；因此無需給F注射免疫抑制劑，C錯誤；

D；移入F的通常是桑葚胚；它要經(jīng)歷囊胚、原腸胚階段的發(fā)育才能成為豬的幼體，D正確。

故選AC。15、A:B:D【分析】【分析】

轉基因生物的安全性問題包括：食物安全（滯后效應；過敏源、營養(yǎng)成分改變）、生物安全（對生物多樣性的影響）、環(huán)境安全（對生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響）。

【詳解】

A；轉基因生物具有某些特殊性質；他們在某地區(qū)的競爭能力較強，可能成為“外來入侵物種”，威脅生態(tài)系統(tǒng)中其他生物的存在，從而影響生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性，A正確；

B；轉基因作物的基因可以通過花粉傳播到田間近緣野生植物體內；該近緣物種在通過授粉會造成基因進一步擴散和污染，B正確；

C；即使目的基因來自自然界；培自出的轉基因植物仍然可能會有潛在的安全性向題，C錯誤；

D；大面積種植轉基因抗蟲棉；有可能會導致棉鈴蟲群體中相關抗性基因頻率增加，D正確。

故選ABD。16、B:C【分析】【分析】

胚胎移植的基本程序主要包括:

①對供；受體的選擇和處理（選擇遺傳特性和生產(chǎn)性能優(yōu)秀的供體；有健康的體質和正常繁殖能力的受體）。用激素進行同期發(fā)情處理，用促性腺激素對供體母牛做超數(shù)排卵處理。

②配種或人工授精。

③對胚胎的收集；檢查、培養(yǎng)或保存（對胚胎進行質量檢查；此時的胚胎應發(fā)育到桑甚胚或胚囊胚階段。④對胚胎進行移植。

⑤移植后的檢查。

【詳解】

A；采集到的良種公羊的精子；在體外受精前要進行獲能處理，A正確；

B；對本地母羊注射促性腺激素可促使其超數(shù)排卵；進而獲得更多卵母細胞，B錯誤；

C；受體母羊對移入子宮的外來胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應；不需要注射免疫抑制劑，C錯誤；

D；采用胚胎分割技術可提高已有胚胎的利用率；D正確。

故選BC。三、填空題(共8題，共16分)17、略

【解析】①.動物細胞培養(yǎng)和核移植技術、②.動物細胞融合與單克隆抗體18、略

【解析】①.接種②.平板劃線法③.稀釋涂布平板法19、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】菌落數(shù)30～30020、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】目的基因穩(wěn)定和表達21、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】是人們所需要轉移或改造的基因22、略

【分析】【分析】

微生物實驗中常用的滅菌方法有干熱滅菌；高壓蒸汽滅菌和灼燒滅菌；其中對于培養(yǎng)基一般用高壓蒸汽滅菌，對于接種環(huán)一般用灼燒滅菌，對于培養(yǎng)皿等可以用干熱滅菌。培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中需要倒置培養(yǎng)，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染。對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時保藏的方法，即將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，在合適的溫度下培養(yǎng)，當菌落長成后將試管放入4℃的冰箱中保藏，以后每3-6個月都要重新將菌種從舊的培養(yǎng)基上轉移到新鮮的培養(yǎng)基上；對于需要長期保存的菌種可以采用甘油管藏法，在3mL的甘油瓶中裝入1mL甘油后滅菌，將1mL培養(yǎng)的菌液轉移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后放在-20℃的冷凍箱中保存。植物有效成分的提取方法主要有蒸餾法、壓榨法和萃取法，如玫瑰精油的化學性質穩(wěn)定，難溶于水，易溶于有機溶劑，能隨水蒸氣一同蒸餾，常采用蒸餾法提?。粚τ谌玳倨ぞ?，其主要儲存在橘皮部分，由于橘皮精油的有效成分在用水蒸氣蒸餾時會發(fā)生部分水解，又會產(chǎn)生原料焦糊問題，所以一般采用壓榨法提取。

【詳解】

（1）微生物培養(yǎng)中常用的滅菌方法有高壓蒸汽滅菌法；灼燒滅菌法、干熱滅菌法等。用平板培養(yǎng)沙門氏菌時一般需要將平板倒置；可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染。在一定的培養(yǎng)條件下，不同種微生物表現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特征，因此單個細菌在平板上會形成菌落，通常可根據(jù)菌落的形狀、大小和顏色等特征來初步區(qū)分不同種的微生物。

（2）從雞糞便取樣；經(jīng)選擇培養(yǎng)后，如果要將樣品涂布到鑒別培養(yǎng)基上，需要經(jīng)過一系列梯度稀釋。對獲得的沙門氏菌進行長期保存常采用甘油管藏法。

（3）根據(jù)題干信息；沙門氏菌的最適繁殖溫度為37°C，在20℃以上即能大出繁殖，其對熱抵抗力不強，在60℃的條件下15min就能被殺死，因此為避免食用被沙門氏菌污染的食品而引發(fā)的食物中毒，家庭中可采取低溫儲存；高溫加工方法進行處理。

（4）根據(jù)題意；肉桂精油不溶于水；易溶于有機溶劑且易揮發(fā)，故可采用水蒸氣蒸餾法進行提取，提取過程中蒸餾的溫度、時間都會影響精油品質。

【點睛】

本題主要考查現(xiàn)代生物科技的原理和運用，意在考查考生的識記能力和理解所學知識要點，把握知識間內在聯(lián)系，形成知識網(wǎng)絡結構的能力，能運用所學知識，準確判斷問題的能力?！窘馕觥孔茻郎缇ā⒏邏赫羝麥缇?、干熱滅菌法倒置在一定的培養(yǎng)條件下，不同種微生物表現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特征梯度稀釋甘油管藏低溫儲存、高溫加工水蒸氣蒸餾蒸餾的溫度、時間23、略

【分析】【詳解】

中國政府的態(tài)度：禁止生殖性克隆，不反對治療性克隆，該表述錯誤?！窘馕觥垮e誤24、略

【分析】略【解析】營養(yǎng)無菌、無毒的環(huán)境適宜的溫度、pH和滲透壓氣體環(huán)境四、判斷題(共2題，共18分)25、B【分析】【詳解】

目前；用體細胞核移植技術得到克隆動物的成功率還很低。

故錯誤。26、B【分析】【詳解】

胚胎發(fā)育早期；細胞數(shù)量不斷增加，但胚胎總體積不變或略有縮小。

故錯誤。五、實驗題(共3題，共12分)27、略

【分析】【分析】

1；動物細胞培養(yǎng)注意事項：

（1）原理：細胞增殖。

（2）培養(yǎng)基性質：液體培養(yǎng)基。動物細胞培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基的成分與體內細胞基本相同；如需要有葡萄糖；氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素、動物血清或血漿，還有適量的抗生素以保證無菌環(huán)境。

（3）需要使用動物血清。

（4）適宜的溫度：36.5℃±0.5℃；適宜的pH：7.2～7.4。

（5）無菌條件下進行。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素；以防培養(yǎng)過程中的污染。此外，應定期更換培養(yǎng)液，防止代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害。

（6）氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO2。O2是細胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。

2；單克隆抗體的制備：

（1）單克隆抗體制備的原理包括：①免疫原理：B淋巴細胞能產(chǎn)生特異性抗體。②細胞融合原理：利用病毒對宿主細胞的穿透性使B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合。③動物細胞培養(yǎng)技術：對雜交瘤細胞進行體內；體外培養(yǎng)。

（2）單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應；之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細胞；誘導B細胞和骨髓瘤細胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞；進行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞；進行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體。

（3）制備單克隆抗體過程中的幾種細胞：①免疫B細胞（漿細胞）：能產(chǎn)生單一抗體；但不能無限增殖。②骨髓瘤細胞：能無限增殖，但不能產(chǎn)生抗體。③雜交瘤細胞：既能產(chǎn)生單一抗體，又能在體外培養(yǎng)條件下無限增殖。

（4）動物細胞融合的原理是細胞膜的流動性；細胞的增殖。動物細胞融合誘導手段有電刺激、聚乙二醇、滅活的病毒等；結果產(chǎn)生雜交細胞。

【詳解】

（1）若細胞B是小鼠的骨髓瘤細胞；則此過程可以為單克隆抗體的制備過程。故A是已經(jīng)免疫的B淋巴細胞或能產(chǎn)生特定抗體的B細胞。動物細胞融合的原理是細胞膜的流動性；細胞的增殖。動物細胞融合誘導手段（誘導d過程）有電刺激、聚乙二醇、滅活的病毒等，結果產(chǎn)生雜交細胞。

（2）一般來說；誘導A細胞和B細胞融合，形成C細胞后，必須利用選擇培養(yǎng)基來篩選出目的細胞。那么滿足的條件必須是：未融合的（親本）細胞和融合的同種（核的）細胞都會死亡，而雜交（瘤）細胞（或雜種細胞）能夠在選擇培養(yǎng)基上生長。

（3）動物細胞培養(yǎng)注意事項：一是液體培養(yǎng)基。動物細胞培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基的成分與體內細胞基本相同，如需要有葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素、動物血清或血漿，還有適量的抗生素以保證無菌環(huán)境。二是氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO2。

（4）選用免疫原性好的細菌；病毒、立克次體、螺旋體等；經(jīng)人工培養(yǎng)，再用物理或化學方法將其殺滅制成疫苗，即為滅活疫苗。而新冠病毒為RNA病毒，選用RNA疫苗都可以。故選③新冠病毒滅活疫苗或RNA疫苗。

【點睛】

本題考查動物細胞培養(yǎng)、單克隆抗體制備的相關知識，意在考查考生理解所學知識要點，把握知識間內在聯(lián)系的能力；能運用所學知識與觀點，對某些現(xiàn)實生活中的生物學問題進行解釋、推理，做出合理的判斷或得出正確的結論?！窘馕觥拷?jīng)過（抗原、病原體）免疫的（小鼠）B（淋巴）細胞（或漿細胞，或已免疫的B細胞，或能產(chǎn)生特定抗體的B細胞）聚乙二醇（PEG）、滅活的（仙臺）病毒、電激（或電融合）未融合的（親本）細胞和融合的同種（核的）細胞雜交（瘤）細胞（或雜種細胞））血清（或血漿）95%空氣和5%CO2③28、略

【分析】【分析】

1；腐乳的制作過程主要是：讓豆腐上長出毛霉→加鹽腌制→加鹵湯裝瓶→密封腌制。毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶可以將豆腐中的蛋白質分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可以將脂肪水解成甘油和脂肪酸。

2；測定亞硝酸鹽含量的原理：在鹽酸酸化條件下；亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結合形成玫瑰紅色染料。將顯色反應后的樣品與已知濃度的標準液進行目測對比，可以大致估算出亞硝酸鹽的含量。

【詳解】

（1）泡菜腌制過程中；進行發(fā)酵的主要微生物是乳酸菌，乳酸菌為原核生物。由于抗生素會抑制乳酸菌的生長和繁殖，因此不能采用加入抗生素的方法來抑制雜菌。

（2）利用毛霉腌制腐乳時；腐乳的外部有一層致密的皮，它是毛霉等生物在豆腐表面上生長的菌絲。

（3）測定亞硝酸鹽含量的方法是比色法；不同發(fā)酵時期亞硝酸鹽的含量不同，在泡菜腌制過程中定期測定亞硝酸鹽含量的目的是把握取食泡菜的最佳時機。

（4）為了保證既無雜菌；又能使發(fā)酵菌發(fā)揮正常作用，泡菜所用鹽水應煮沸；冷卻再使用。

（5）沸水浴條件下；提取出的DNA可與二苯胺試劑反應呈藍色。

【點睛】

本題考查傳統(tǒng)發(fā)酵技術的應用和DNA鑒定的原理，意在考查考生對所學知識的識記能力。【解析】原核抗生素會抑制乳酸菌的生長和繁殖毛霉比色法把握取食泡菜的最佳時機煮沸、冷卻二苯胺藍29、略

【分析】【分析】

PCR原理：在解旋酶作用下；打開DNA雙鏈，每條DNA單鏈作為母鏈，以4種游離脫氧核苷酸為原料，合成子鏈，在引物作用下，DNA聚合酶從引物3'端開始延伸DNA鏈，即DNA的合成方向是從子鏈的5'端自3'端延伸的。實際上就是在體外模擬細胞內DNA的復制過程。DNA的復制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能從3′端延伸DNA鏈。

【詳解】

（1）分析題意可知；研究人員取1g沉積物樣品接種在液體培養(yǎng)基中搖瓶培養(yǎng)，稀釋后可通過稀釋涂布平板法接種到培養(yǎng)基表面以獲得單菌落。

（2）PCR技術是一項通過體外控制溫度擴增DNA的技術，該技術中由于溫度較高，起關鍵作用的酶是耐高溫DNA聚合酶；PCR擴增的前提是要有一段目的基因的核苷酸片段，分析題意，該技術能在放線菌總的DNA中專一性擴增出16SrRNA基因的原因是：引物是根據(jù)16SrRNA基因的一段已知核苷酸序列設計合成的；PCR產(chǎn)物一般可通過瓊脂糖凝膠電泳來鑒定：凝膠中的DNA分子通過染色；可以在波長為300nm的紫外燈下被檢測出來。

（3）分析題意，科學家將Oct3/4、Sox2、c-Mc和KIf4基因通過逆轉錄病毒轉入小鼠成纖維細胞中，該過程中逆轉錄病毒是載體，能將外源基因ct3/4、Sox2、c-Mc和KIf4送入小鼠成纖維細胞；分析題意，實驗目的是iPS細胞的產(chǎn)生不是由于培養(yǎng)基的作用，故實驗的自變量是外源基因的有無，因變量是IPS細胞的產(chǎn)生情況，實驗設計應遵循對照與單一變量原則，故可設計實驗如下：將轉入外源基因的細胞和沒有轉入外源基因的細胞分別培養(yǎng)在相同的培養(yǎng)基中，在相同且適宜的條件下，如果只有轉入外源基因的細胞轉化成了iPS細胞，則可以證明iPS細胞的產(chǎn)生不是由于培養(yǎng)基的作用。【解析】(1)稀釋涂布平板法##涂布平板法

(2)耐高溫DNA聚合酶引物能與16SrRNA基因特異性結合（引物是根據(jù)16SrRNA基因的一段已知核苷酸序列設計合成的）瓊脂糖凝膠電泳。

(3)逆轉錄病毒是載體，能將外源基因ct3/4、Sox2、c-Mc和KIf4送入小鼠成纖維細胞。將轉入外源基因的細胞和沒有轉入外源基因的細胞分別培養(yǎng)在相同的培養(yǎng)基中，在相同且適宜的條件下，如果只有轉入外源基因的細胞轉化成了iPS細胞，則可以證明iPS細胞的產(chǎn)生不是由于培養(yǎng)基的作用六、綜合題(共4題，共24分)30、略

【分析】【分析】

1；動物細胞培養(yǎng)就是從動物機體中取出相關的組織；將它分散成單個細胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖；

2、動物細胞體外培養(yǎng)需要滿足以下條件：無菌、無毒的環(huán)境、營養(yǎng)、溫度和pH、氣體環(huán)境（95%空氣加5%CO2的混合氣體）；

3；以RNA病毒的遺傳物質合成DNA需要病毒的RNA為模板、逆轉錄酶、游離的脫氧核糖核苷酸作為原料等條件。

【詳解】

（1）病毒不能獨立存活，需要寄生于活細胞中，要培養(yǎng)病毒，需先體外培養(yǎng)動物細胞，動物細胞的體外培養(yǎng)需要無菌無毒、適應的營養(yǎng)、溫度、pH和一定的氣體條件（95%空氣加5%CO2）；

（2）①新冠病毒是一種單股正鏈RNA病毒；利用RNA獲取DNA為逆轉錄過程，該過程需要病毒的RNA作為模板，以游離的脫氧核糖核苷酸為原料，在逆轉錄酶的催化下合成，大腸桿菌作為相關基因的受體細胞，有繁殖快；易培養(yǎng)等優(yōu)點；

②腺病毒作為常用的病毒載體；有宿主范圍廣泛；對人致病性低、病毒基因組相對容易操作、允許插入的外源基因容量大等特點，因此常用于重組病毒制作疫苗，制作活體病毒載體時，需要用限制酶將目的基因剪切再用DNA連接酶將目的基因和載體連接；

（3）①COVID-19是正鏈RNA病毒；自身的RNA可以作為合成蛋白質的模板，因此將本身作為疫苗注入人體即可表達相關蛋白質；

②若直接將RNA注入人體；會被人體內的RNA酶水解為核苷酸，因此可以將其裝入脂質體中再注入人體中，RNA進入人體的體細胞而不是生殖細胞因此不能在人體內遺傳下去。

【點睛】

本題涉及動物細胞培養(yǎng)、基因工程等相關知識點，需要學生能夠結合課本內容進行遷移運用進行答題，題目難度一般?！窘馕觥竣?動物細胞培養(yǎng)②.無菌、無毒③.氣體環(huán)境④.S⑤.病毒的RNA⑥.脫氧核苷酸⑦.逆轉錄酶⑧.繁殖快、易培養(yǎng)⑨.對人致病性低⑩.限制酶?.DNA連接酶?.本身?.RNA酶?.不能31、略

【分析】【分析】

結合題意分析圖解：圖中質粒包括四環(huán)素抗性基因；氨芐青霉素抗性基因、啟動子、復制原點；以及兩個限制酶切點，并且兩個限制酶切點的位置均在四環(huán)素抗性基因上；目的基因上有三個限制酶切點，與質粒對照，共有的是BamHI、HindIII。圖中①表示目的基因導入受體細胞，②表示通過胚胎移植的方式將早期胚胎移植到代孕母牛體內。

（1）

模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時間后；使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備，因此在此過程中加熱至94℃的目的是使DNA樣品的氫鍵斷裂。DNA聚合酶的合成方向都是子鏈的5′→3′，因此PCR所用引物設計應該是母鏈3'端互補的一段序列，人乳鐵蛋白基因的部分序列一條鏈是：5’ATGGCTAGGAAC3’，引物為5’-GTTCCT-3’，另外一條鏈是：3’TACCGATCCTTG5’，引物是5’-ATGGCT-3’，因此引物選擇B和D。

（2）

由圖中信息可知；載體上有HindⅢ和BamHⅠ酶切位點，目的基因上也有它們的酶切位點，應用此2種酶切。當人乳鐵蛋白基因和質粒連接成重組質粒后，tetR基因被人乳鐵蛋白基因隔開，不是完整的，而ampR基因是完整的，所以篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進行。

（3）

能讓目的基因開始表達的是啟動子；啟動子是RNA聚合酶特異性識別和結合的DNA序列，是基因的一個組成部分，控制基因表達（轉錄）的起始時間和表達的程度，因此能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細胞中特異性表達的調控序列是啟動子，A正確，BCD錯誤。故選A。

（4）

過程①可采用的操作方法是將目的基因導入到動物中常用顯微注射法；C正確，ABD錯誤。故選C。

（5）

基因表達是轉錄和翻譯；基因表達產(chǎn)物一般是蛋白質，因此一般檢測目的基因是否表達里用抗原-抗體雜交的方法。

【點睛】

本題難度適中，屬于考綱中識記、理解層次的要求，著重考查了基因工程的限制酶的作用特點、啟動子的功能、目的基因導入動物細胞的方法等相關知識，要求考生具有一定的識圖能力，并能識記相關基礎知識。【解析】（1）D

（2）BamHΙHindⅢ氨芐青青霉素。

（3）A

（4）C

（5）抗原-抗體雜交32、略

【分析】【分析】

植物細胞工程包括植物組織培養(yǎng)和植物體細胞雜交；其中植物組織培養(yǎng)技術依據(jù)的原理是植物細胞的全能性。植物細胞工程技術的應用：植物繁殖的新途徑（微型繁殖；作物脫毒、人工種子）、作物新品種的培育（單倍體育種、突變體的利用）、細胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)。

【詳解】

（1）培育脫毒馬鈴薯時；一般選擇莖尖作為外植體，而葉肉細胞帶病毒（病毒載量大）；細胞的全能性低，一般不能作為外植體。

（2）植物組織培養(yǎng)過程；外植體經(jīng)過脫分化形成的愈傷組織是一團具有分生能力（高度液泡化的）薄壁細胞。再分化形成芽和根