耳聾基因檢測

耳聾基因檢測主要內(nèi)容背景介紹耳聾基因檢測的意義產(chǎn)品介紹案例分享2什么是耳聾？聽覺障礙，不能聽到外界聲響的表現(xiàn)，輕者聽而不真，重者不聞外聲。WHO耳聾分級標準：4級別表現(xiàn)純音聽閾輕度聾近距離聽一般談話無困難26～40dB中度聾近距離聽話感到困難41～60dB重度聾在耳邊大聲呼喊方能聽到61～80dB全聾聽不到耳邊大聲呼喊的聲音超過80dB耳聾分類耳聾分為傳導(dǎo)性耳聾、感音性耳聾、混合性耳聾耳聾的致病因素遺傳因素；母親懷孕期間的藥物使用史；孕母宮內(nèi)感染:如巨細胞病毒、皰疹、毒漿體原蟲?。荒赣H的生產(chǎn)史；新生兒高膽紅素血癥；顱面部畸形；早產(chǎn)或體重低；各種后天因素，如外傷6我生育下一個孩子還會耳聾嗎？7常染色體隱性遺傳方式：有25%的幾率生育聾兒。線粒體母系遺傳：母系成員均會有聾病常染色體顯性遺傳：有50%的幾率生育聾兒。聽力障礙的發(fā)病率：新生兒1‰；青年人1%；45-64歲人群14%；65-75歲為30%-60%；75歲以后達50%-70%存在不同程度的聽力損失。中國殘疾人聯(lián)合會公布：1987年的第一次全國殘疾人抽樣調(diào)查各類殘疾人總數(shù)約為5164萬，其中聽力言語殘疾為1770萬人，占總殘疾人總數(shù)的34.28%，是各類殘疾的首位。2006年的第二次全國殘疾人抽樣調(diào)查，全國各類殘疾人總數(shù)為8296萬人，聽力殘疾2004萬人占殘疾人總數(shù)24.16%，位于第二位，僅次于肢體殘疾。在對四歲及四歲以內(nèi)的聽力損失患兒病因進行分析時，遺傳因素所占比例為71%，高于出生時新生兒聽力損失中遺傳因素占據(jù)了65%的病因NEnglJMed,2006.354:p.2151-2164.背景介紹——耳聾發(fā)病原因背景介紹——流行病學(xué)的警示意義

確立了中國聾啞人群常見的3個易感基因及突變熱點藥物敏感性耳聾（mtDNA1555A>G)：

占我國2780萬聽力殘疾者的5-12%,意味著139-333萬人可以通過用藥警示而避免致聾。先天性重度耳聾(GJB2)：

占聽力殘疾者的20%,意味著556萬人可以明確病因，早期發(fā)現(xiàn)，早期干預(yù)，聾而不“啞”。大前庭水管綜合征(SLC26A4)：

占聽力殘疾者的16%,意味著445萬人通過早期發(fā)現(xiàn)可以避免永久性聽力損失。

背景介紹——干預(yù)措施

助聽器：純音測聽，閾值在40～90dB（中度~重度耳聾）都應(yīng)建議配用。

人工耳蝸移植目前對于感音神經(jīng)性重度耳聾的有效治療方法-人工耳蝸植入手術(shù)，20萬元/只

適應(yīng)癥：1）先天性雙耳重度-極重度感音性耳聾；耳蝸移植的最佳時間是：2歲以內(nèi)（AudiolNeurootol.2004Jul-Aug;9(4):224-33）。2）語后聾及成年患者有基本語言識別能力及辨音能力且佩戴助聽器無效者。耳聾基因檢測意義指導(dǎo)婚育。實現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育早發(fā)現(xiàn)、早干預(yù)，實現(xiàn)聾而不啞產(chǎn)品匯總4個基因20個位點非綜合征型耳聾基因檢測-51單個耳聾基因sanger全測序遺傳性聽力損失基因檢測-127三個耳聾基因高通量測序四個基因20個位點-飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)技術(shù)原理Base

MolecularWeight

A

313.21

C

289.18

G

329.21

T304.19

CddATPddCTPddGTPddTTPG單堿基延伸技術(shù)（iPLEX?）檢測位點多：可同時檢測20個基因位點；靈敏度高：能分辨質(zhì)量差別為1Da的分子；準確率高：>99%；通量大：每天可檢測3000份以上；自動化程度高：檢測數(shù)據(jù)自動分析；檢測周期短：收到樣本后5個工作日可出報告。突變基因GJB2SLC26A4(PDS)12SrRNAGJB3突變位點35delG、167delT、176-191del16、299_300delAT、235delC281C>T、589G>A、IVS7-2A>G、1174A>T、1226G>A、1229C>T、1975G>C、2027T>A、2162C>T、2168A>G、IVS15+5G>A1494C>T

1555A>G538C>T547G>A染色體13q11-127q31mtDNA1p33-p35表達蛋白縫隙連接蛋白Connexin26多次跨膜蛋白Pendrin線粒體功能損失縫隙連接蛋白Connexin31臨床表現(xiàn)常染色體隱性遺傳。變異較大，可由輕度到極重度，但多數(shù)為重度或極重度耳聾常染色體隱性遺傳。先天性或后天性耳聾，耳聾發(fā)生或加重與外傷、感冒有關(guān)氨基糖甙類藥物性致聾，無法逆反常染色體顯性遺傳。我國本土克隆和鑒定的第一個耳聾致病基因適用人群新生兒婚前、孕前和產(chǎn)前人群各種原因不明的耳聾，包括先天性聾和后天性聾人群聽力正常，但有耳聾家族史的人群受檢人群檢測醫(yī)院結(jié)果不通過結(jié)果通過復(fù)篩(TEOAE/DPOAE)+AABR/ABR閾值)篩選聽力異常知情同意、自愿選擇采取最少3個采血斑自愿選擇，知情同意臨床檢驗中心耳聾基因檢測出具檢測報告檢測結(jié)果正常檢測結(jié)果為雜合突變或純合突變隨訪檢測醫(yī)院確診出具確診報告確診結(jié)果為突變確診結(jié)果正常干預(yù)追蹤隨訪基因檢測流程5個工作日51個基因+2個位點PCR、第一代測序目標區(qū)域捕獲、第二代高通量測序適用范圍：1）基因診斷：對于臨床表型難以確診的病例給予分子水平的鑒別診斷；2）攜帶者篩查：對于無臨床表型的致病突變攜帶者進行基因篩查；檢測周期：35工作日檢測流程醫(yī)院就診樣本采集DNA提取文庫制備高通量測序數(shù)據(jù)分析親屬驗證發(fā)送報告檢測周期：35個工作日檢測基因/位點綜合征型耳聾基因Waardenburg（瓦登伯格）綜合征EDN3,EDNRB,MITF,PAX3,SNAI2,SOX10遺傳性共濟失調(diào)性多發(fā)性神經(jīng)炎樣?。≧efsum綜合征）PEX1,PEX2,PEX26尤塞氏綜合征（Ushersyndrome）CDH23,CLRN1,GPR98,USH2AMohr-Tranebjaerg綜合征TIMM8A特雷徹-柯林斯綜合征（TreacherCollinssyndrome）TCOF1Alport綜合征（遺傳性腎炎）COL4A3,COL4A4,COL4A5Wolfram綜合征1型WFS1單個耳聾基因全測序檢測基因GJB2GJB3SLC26A4測序采用sanger法，在以下情況可建議進行單個基因全測序1）耳聾患者檢測某個耳聾基因雜合子突變，為明確病因做該基因的全測序2）若胎兒母親為某個耳聾基因的攜帶者，為了評估胎兒患有耳聾的風(fēng)險，對父親做該耳聾基因的全測序。遺傳因素的具體分析遺傳性耳聾基因檢測內(nèi)容疾病分類疾病中類基因數(shù)目非綜合征型（72個基因）常染色體隱性45常染色體顯性28X-連鎖3大前庭水管綜合征3聽神經(jīng)病4綜合征型（66個基因）伴外耳畸形11伴眼病17伴代謝性疾病2伴肌肉骨骼異常10伴泌尿生殖疾病6伴內(nèi)分泌疾病3伴皮膚疾病6伴神經(jīng)病變2伴心臟缺陷4線粒體遺傳性聽力損失-5臨床服務(wù)：127個基因（重復(fù)11個基因）技術(shù)簡介：采用新一代高通量測序技術(shù)，對受檢者的耳聾相關(guān)基因區(qū)域進行檢測和分析。目標區(qū)域捕獲測序檢測時間：35個工作日（7周）檢測樣本：全血：5ml，EDTA抗凝(紫蓋)；DNA：6ug，OD在1.7-2.0，未降解運輸條件：冰袋+干冰運輸檢測結(jié)果：形成報告文件

27樣本處理樣本檢測數(shù)據(jù)分析報告發(fā)送血樣接收解讀咨詢適用條件主要適用于以下情況：1：通過熱點突變檢測未能發(fā)現(xiàn)致病原因的耳聾患者2：非綜合征型耳聾，無法確定致病基因及遺傳方式的3：綜合征型耳聾患者4：存在耳聾家族史的人群篩查案例一家9口人，6人是耳聾

佛山家系為3代遺傳的耳聾家系，現(xiàn)有家系成員9人，其中6名為耳聾患者，除由于婚姻關(guān)系成為該家系成員的2名耳聾患者外，剩余的4名患者均為母系家庭成員。

家系基因30外婆同質(zhì)突變外公正常

姨媽同質(zhì)突變祖父雜合突變祖母雜合突變叔叔純和突變女：1555A純和235delc雜合12SrRNA

A1555GGJB2

235delc母親重聾同質(zhì)突變

父親重聾純和突變啟示非常值得警惕的是：這個孩子通過了聽力篩查，如果沒有做基因篩查，一旦誤用了氨基糖苷類藥物將一針致聾，導(dǎo)致嚴重后果31臨床案例患兒杜某，女，11歲；自述4歲左右，“感冒”后出現(xiàn)耳聾癥狀；臨床診斷：大前庭水管綜合征；否認孕期病毒感染及耳聾家族史；檢測結(jié)果：患兒：SLC26A4基因1174A>T+2168A>G復(fù)合突變；患兒父親：SLC26A4基因1174A>T雜合突變；患兒母親：SLC26A4基因2168A>G雜合突變。臨床案例患