2024實時震動誘導轉化技術在克-雅病臨床診斷中的應用

2024實時震動誘導轉化技術在克-雅病臨床診斷中的應用

克-雅?。–JD）是一組由阮蛋白錯誤折疊引起的臨床罕見的神經系統(tǒng)變性

疾病，具有遺傳性和傳染性，是人類骯病毒病的最常見類型。20世紀20

年代，德國神經科學家Creutzfeldt和Jakob首次描述一種臨床表現為快

速進展性癡呆（RPD）,精神行為異常，伴視覺障礙、共濟失調、錐體外

系癥狀和肌陣攣，以及病理表現為灰質海綿狀改變，神經元丟失和神經膠

質增生，但無炎癥性改變的疾病，并命名為克-雅病。隨著對克-雅病臨床

和病理學特征的深入了解，逐漸認識到該病是一種中樞神經系統(tǒng)變性疾病,

亦稱為皮質-紋狀體-脊髓變性或亞急性海綿狀腦病。正常情況下，神經細

胞表面的骯蛋白稱為正常細胞骯蛋白（PrPC）;某些因素刺激下,PrPC構

象改變,形成致病形式的異常羊瘙癢病阮蛋白（PrPSc）即骯病毒，阮病

毒通過改變鄰近蛋白生理構象引起神經元功能障礙，最終導致阮病毒病。

根據病因，克-雅病可以分為4種類型,即散發(fā)性克-雅?。╯CJD）,病因

尚未明確，約占90%;遺傳性克-雅?。╣CJD）,呈常染色體顯性遺傳，

系PRNP基因變異使PrPC構象發(fā)生改變，形成PrPSc;醫(yī)源性克-雅病

（iCJD）,因接觸感染組織引起外源性骯病毒感染，如注射人源性生長激

素或者移植感染供體的角膜或硬腦膜，異體PrPSc誘導自身PrPC轉化為

PrPSc而致病；變異型克-雅?。╲CJD）,系牛海綿狀腦?。˙SE）傳播所

致，患者因食用骯病毒病牛肉而致病。

2002年，中國疾病預防控制中心（CDC）病毒病預防控制所牽頭制定《克

雅氏病診斷標準和姐里原則》。同年，中國克-雅病監(jiān)測網絡被世界衛(wèi)生組

織納入全球監(jiān)測網絡。2006年,中國CDC病毒病預防控制所在北京市、

上海市、天津市、重慶市、廣東省、吉林省、陜西省、安徽省、貴州省、

湖北省、河南省和新疆維吾爾自治區(qū)共12個省、市、自治區(qū)設立監(jiān)測點，

克-雅病監(jiān)測工作正式開展。2018年2月，中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準

《克-雅病診斷》實施，成為我國診斷克-雅病的標準，該標準主要參考德

國哥廷根大學神經病學家Zerr教授團隊2009年制定的《散發(fā)性克-雅病

臨床診斷標準》，強調在滿足4項臨床病史和流行病學史（進行性癡呆、

臨床病程＜2年、常規(guī)實驗室檢查除外其他疾病、無明確醫(yī)源性接觸史）,

以及4項核心臨床癥狀肌陣攣、視覺障礙或小腦共濟失調、錐體系禾口或）

錐體外系癥狀、無動性緘默］中2項的基礎上，合并腦電圖周期性三相波、

頭部FLAIR成像殼核和I或尾狀核異常高信號或DWI大腦灰質對稱性〃緞

帶征二腦脊液14-3-3蛋白陽性中的一項，可臨床診斷散發(fā)性克-雅病，

但明確診斷需腦組織活檢或尸檢病理學檢查，HE染色發(fā)現腦組織海綿狀

變性、或者免疫組化染色和（或）免疫印跡法檢測腦組織存在蛋白酶抗性

PrPSc沉積,方可明確診斷。然而，腦組織活檢風險較高，接觸克-雅病患

者腦組織易引起醫(yī)源性感染，故限制其臨床應用。此外，腦脊液14-3?3

蛋白陽性診斷克-雅病的敏感性較低，尤其對于疾病早期、病程較長、發(fā)病

年齡較小（＜40歲I遺傳性和變異型克-雅病患者,14?3-3蛋白陰性并

不能排除克-雅病。在臨床癥狀符合克-雅病的患者中，腦脊液14-3-3蛋

白陽性的診斷特異度約為95%，但腦脊液14-3-3蛋白陽性亦可見于腦梗

死、癲癇、中樞神經系統(tǒng)炎癥性疾病等多種疾病，因此在未經篩選的神經

系統(tǒng)疾病人群中，腦脊液14-3?3蛋白陽性的總體診斷特異度僅為70%。

由此可見該診斷標準無法對散發(fā)性克-雅病進行早期診斷存在一定缺陷,

因此，亟待一項可以早期快速準確診斷克-雅病的檢測手段。

自20世紀70年代以來，骯病毒特征逐漸被深入認識。根據PRNP基因

第129位氨基酸的多態(tài)性（MM、MV、VV）及PrPSc的類型（1型、2

型）將散發(fā)性克-雅病分為6種類型，即MM1型、MM2型、MV1型、

MV2型、VV1型、VV2型，其中絕大多數散發(fā)性克-雅病屬于MM1型、

MV1型、MV2型或VV2型，而罕見MM2型和VV1型。這一時期，診

斷性檢測技術取得長足進展，尤以實時震動誘導轉化（RT-QuIC）技術最

為突出,RT-QuIC技術是一種通過蛋白擴增檢測樣本中極微量蛋白含量的

方法。由于克-雅病患者腦脊液和部分腦組織含有微量PrPSc,RT-QuIC

反應過程中PrPSc與正常重組PrPC蛋白接觸之后誘導后者發(fā)生轉化即錯

誤折疊，聚集形成更大的纖維化結構，經高頻震動后，未發(fā)生錯誤折疊和

穩(wěn)定聚集的PrPC從纖維化結構中分裂出來，并進入新一輪孵育和震動循

環(huán)中再進行轉化；正常重組PrPC蛋白在錯誤折疊和聚集形成纖維化結構

過程中與熒光染料硫黃素T相結合并發(fā)出熒光，通過檢測熒光信號強度以

代表PrPSc含量。既往10余年，國內外許多研究者采用RT-QuIC技術檢

測克-雅病患者腦脊液、皮膚、嗅黏膜中PrPSc含量,并評估其對克-雅病

的診斷價值，腦脊液RT-QuIC陽性的靈敏度和特異度分別為82.1%-96%

和98.5%-100%;皮膚組織RT-QuIC陽性的靈敏度為91.2%-100%,特

異度為85.7%-100%;嗅黏膜上皮刷取物RT-QuIC陽性的靈敏度增至

97%,特異度增至100%;如果聯合檢測腦脊液和嗅黏膜，其診斷靈敏度

和特異度均可達100%。值得注意的是,與其他亞型的患者相比，MM2

型和VV1型散發(fā)性克-雅病患者腦脊液RT-QuIC陽性的敏感性更彳氐。與腦

脊液RT-QuIC陽性患者相比，假陰性患者祖經元損傷標志物(腦脊液總

tau蛋白和14-3-3冒白)水平更低、臨床癥狀期病程更長。2018年，美

國CDC對散發(fā)性克-雅病的診斷標準進行修訂，將RT-QuIC技術納入其

中并賦予較高的診斷權重，診斷證據級別僅次于病理學檢查。對于臨床表

現為進展性神經精神癥狀的患者，若腦脊液或其他組織RT-QuIC陽性即

可診斷為很可能的(probable)散發(fā)性克-雅病。

2021年,德國哥廷根大學神經病學家Hermann教授團隊聯合美國、法

國、澳大利亞、英國等多國家骯病毒病研究團隊再次更新散發(fā)性克-雅病的

診斷標準，強調若RT-QuIC陽性，則臨床特征不再以快速進展性癡呆為

必要條件，只要存在進展性神經精神癥狀，即可診斷為很可能的散發(fā)性克

-雅病。

目前，我國RT-QuIC技術檢測PrPSc相對滯后,為提高國內臨床醫(yī)師對

克-雅病早期識別和診斷能力，中華醫(yī)學會神經病學分會神經感染性疾病與

腦脊液細胞學學組于2021年成立阮病毒病診斷指南制訂專家委員會,