Customer病毒去除培訓(xùn)課件

病毒過濾病毒滅活

病毒吸附

法規(guī)方面內(nèi)容概要Seite1Customer病毒去除1/22/2025內(nèi)容概要VirusFiltrationVirusInactivation

VirusAdsorption

法規(guī)方面Seite2Customer病毒去除1/22/2025檢測原料血漿(獻(xiàn)血者監(jiān)控,檢測/生產(chǎn)監(jiān)控)生物工程(原料,細(xì)胞系,基因穩(wěn)定性)哺乳動物細(xì)胞(細(xì)胞來源跟蹤監(jiān)控)驗證病毒去除工藝病毒防護(hù),病毒數(shù)降低程度,交叉污染控制檢測成品法規(guī):安全策略PaulEhrlichInstituteSeite3Customer病毒去除1/22/2025病毒去除–

用戶方面-

用戶須形成完備的病毒去除觀念綜合采用病毒滅活和病毒分離截留的方法

缺少相關(guān)的內(nèi)源和外源病毒樣品

法規(guī)要求病毒去除率應(yīng)在12to20log10

至少使用兩種病毒去除方法

至少有一種方法是針對無包膜的小病毒CPMP/ICH/295/95:NoteforGuidanceonQualityofBiotechnologicalProducts.“ViralSafetyEvaluationofBiotechnologyProductsDerivedfromCellLinesofHumanorAnimalOrigin.October1997”Seite4Customer病毒去除1/22/2025病毒污染-污染機會-

病毒顆粒和相關(guān)病毒

潛在的污染-病毒意外污染-

細(xì)胞系源于被病毒侵染的動物

操作處理中污染

污染的試劑ICHQ5A:ViralSafetyEvaluationofBiotechnologyProductsDerivedfromCellLinesofHumanorAnimalOrigin,1997Seite5Customer病毒去除1/22/2025病毒去除–

工藝總結(jié)-病毒去除病毒滅活病毒滅活納濾15nmto75nm熱滅活

溶液加熱滅活

干熱滅活

蒸汽滅活光照滅活

射線紫外

微波分離法

層析

乙醇抽提

其他沉淀方法化學(xué)滅活

溶煤

去垢劑

化學(xué)試劑pH病毒裂解

高壓循環(huán)

超臨界流體Seite6Customer病毒去除1/22/2025病毒去除–主要供應(yīng)商-病毒過濾

Asahi病毒吸附

Pall

Millipore

GEHealthcare

Merck

Biorad病毒滅活

GEHealthcare

NewYorkBloodcenterpatent

Sartorius

提供全部技術(shù)Seite7Customer病毒去除1/22/2025完整的病毒去除平臺成品灌裝親和層析柱或其他純化步驟病毒截留濾芯

拋棄型濾器

病毒去除

針對所有病毒紫外滅活

拋棄型紫外滅活裝置

病毒滅活

針對非包膜小病毒膜吸附拋棄型層析裝置病毒吸附

針對所有病毒

還可去除HCP,DNA/RNA和內(nèi)毒素Seite8Customer病毒去除1/22/2025內(nèi)容概要病毒截留過濾VirusInactivation

VirusAdsorption

RegulatoryAspects

Seite9Customer病毒去除1/22/2025Virosart?CPV–病毒截留過濾器-膜材質(zhì)為聚醚砜典型病毒截留率PPV或PP7(約20nm粒徑)，LRV>4PR772(約50nm粒徑)，LRV>6完整性測試使用水(4.5bar@max22ml/min/10”)Sartopore0,1μm作為預(yù)過濾蒸汽或高壓滅菌Seite10Customer病毒去除1/22/2025病毒去除至少3-4log，并且蛋白收率>95%相關(guān)的特定和非特定的標(biāo)準(zhǔn)病毒去除特性料液情況(大分子蛋白，宿主細(xì)胞，ＤＮＡ等)病毒截留濾器在工藝中的位置

挑戰(zhàn)性物質(zhì)(細(xì)胞碎片，宿主細(xì)胞等)具有可放大性病毒截留濾器應(yīng)驗證考察的方面Seite11Customer病毒去除1/22/2025CPV上表面CPV下表面0,2μm和CPV膜電鏡對比0,2μm膜上表面0,2μm膜下表面Seite12Customer病毒去除1/22/2025VirosartCPV挑戰(zhàn)實驗，料液為2%BSA，PBSpH6,9病毒粒徑nm核酸型包膜Log10TCID50/ml料液體積[ml]LRVPPV18-25ss-DNANo8.1506,0Reo-360-80ds-RNANo8.8507.9HAV27-32ss-RNANo5.6505.4BVDV40-70ss-RNAYes7.150>5.9SV-4042ds-DNAYes7.6506.3MuLV80-110ss-RNAYes7.850>6.2DatadeterminedbyAnalysisGmbHK?ln,Germany2004Seite13Customer病毒去除1/22/2025Virosart?CPV–

產(chǎn)品線-5cm2拋棄型Virosart?CPVMinisart?20cm2拋棄型Virosart?CPVMidisart?150cm2拋棄型Virosart?CPV囊式濾器

0.7m2拋棄型Virosart?CPV囊式濾器1.4m2拋棄型Virosart?CPV囊式濾器2.1m2拋棄型Virosart?CPV囊式濾器Seite14Customer病毒去除1/22/2025Analysis

Dr.AndreasImmelmannBiomedizinischeTestGmbHGottfriedHagen-Strasse62D51105K?lnGermanyPhone:+49-221-346-1800Fax:+49-221-346-1801德國獨立的病毒實驗室NewLabBioQualityAG

Dr.KlausKellingsMaxPlanck-Srasse15AD40699ErkrathGermanyPhone:+49-211-92-55-300Fax:+49-211-92-55-333Seite15Customer病毒去除1/22/2025Virosart?CPV–

文件-Virosart?CPVlaunchpackageSeite16Customer病毒去除1/22/2025Virosart?CPV–

完整的文件-文件貨號產(chǎn)品手冊85030-521-89產(chǎn)品信息85030-522-03操作手冊SPK6520-e05021驗證指南85030-522-02病毒信息指南85030-521-91Seite17Customer病毒去除1/22/2025Virosart?CPV–標(biāo)準(zhǔn)濾芯訂貨信息-產(chǎn)品貨號Virosart?CPV10”

濾芯5452528V1Virosart?CPV20”

濾芯5452528V2Virosart?CPV30”

濾芯5452528V3Seite18Customer病毒去除1/22/2025Virosart?CPV–囊式濾器定貨信息-產(chǎn)品貨號Virosart?CPV10”MaxiCaps?5452528V1--SSVirosart?CPV20”MaxiCaps?5452528V2--SSVirosart?CPV30”MaxiCaps?5452528V3--SSSeite19Customer病毒去除1/22/2025內(nèi)容概要VirusFiltration病毒紫外滅活

VirusAdsorption

RegulatoryAspects

Seite20Customer病毒去除1/22/2025紫外滅活自1940s紫外滅活病毒方法已經(jīng)被證實有效WolfAM,MasonJ,etal.(1947).Ultravioletirradiationofhumanplasmatocontrolhomologousserumjaundice.JAMA135:476-477.最新的研究已經(jīng)確認(rèn)紫外法是一種有效的病毒滅活方法HartH,ReidK&HartW(1993).Inactivationofvirusesduringultravioletlighttreatmentofhumanintravenousimmunoglobulinandalbumin.VoxSang.64:82–88ChinS,JinR,etal.(1997).VirucidaltreatmentofbloodproteinproductswithUVCradiation.Photochem.Photobiol.65:432–435WangJ,MauserA,ChaoSF,RemingtonK,TreckmannR,KaiserK,PifatD,HottaJ.Virusinactivationandproteinrecoveryinanovelultraviolet-Creactor.VoxSang.2004May;86(4):230-8.Seite21Customer病毒去除1/22/2025紫外滅活技術(shù)X-raysUltravioletLightVisibleLightInfrared780400315280200100Hglowpressurelamp254nmSpectralcurveofDNA/RNAdamageWavelength[nm]UVCUVBUVAVacuumUV破壞病毒的DNA/RNASeite22Customer病毒去除1/22/2025DeanVortices迪恩渦技術(shù)優(yōu)化病毒滅活工藝DeanVorticeslightintensitydepthofpenetrationMinimisedresidencetimes;controlledmixing&withinlaminarflowbydeanvorticesSeite23Customer病毒去除1/22/2025紫外滅活病毒保留時間00,511,52相對保留時間病毒／蛋白量一般反應(yīng)裝置帶有環(huán)狀帽損傷蛋白區(qū)域低病毒滅活區(qū)域Seite24Customer病毒去除1/22/2025特氟龍螺旋管紫外燈石英玻璃管內(nèi)部凸緣紫外滅活裝置結(jié)構(gòu)Seite25Customer病毒去除1/22/2025不同規(guī)模的紫外病毒滅活裝置2to20l/h20to150l/h小試規(guī)模生產(chǎn)規(guī)模Seite26Customer病毒去除1/22/2025紫外病毒滅活裝置驗證方面參數(shù)MuLVBVDVReo-3HAVPPV單抗收率*包膜YesYesNoNoNo-核酸類型RNARNARNARNADNA-LRVat50J/m24,35,736,81>4,73>6,5297%LRVat38J/m23,33,852,562,923,1698%LRVat30J/m23,33,402,033,043,4098%DatadeterminedbyAnalysisGmbH,Germany2004Seite27Customer病毒去除1/22/2025病毒滅活：蛋白完整性研究*紫外光照能量(J/cm2)單體a活性a%單體%收率

mg/ml%收率0.00077.09100%4.98100%0.00976.94100%4.9299%0.02477.00100%4.8998%0.04976.6499%4.8698%0.07276.3799%4.7896%0.14475.1397%4.8197%0.28871.9193%4.4690%0.43169.4390%4.3287%(aaverageoftriplicatesamples)*WangJ,MauserA,ChaoSF,RemingtonK,TreckmannR,KaiserK,PifatD,HottaJ.Virusinactivationandproteinrecoveryinanovelultraviolet-Creactor.VoxSang.2004May;86(4):230-8.Seite28Customer病毒去除1/22/2025病毒滅活:蛋白確認(rèn)研究光照處理ＣＨＯ抗體(2mg/mlPBS緩沖液)侵染法檢測PPV病毒去除log10

值

>4log10PPV

抗體性質(zhì)研究(二維凝膠電泳,Maldi-Toff)

紫外光照處理

未進(jìn)行紫外光照處理Seite29Customer病毒去除1/22/2025

賽多利斯公司與用戶進(jìn)行研發(fā)和臨床前研究研究紫外光照對目標(biāo)蛋白的影響

在賽多利斯公司或用戶處進(jìn)行單體活性裂解理化分析SDS電泳,HPLC,二維凝膠電泳...

賽多利斯公司與用戶進(jìn)行臨床研究1st

生產(chǎn)Ｉ期臨床樣品前進(jìn)行病毒挑戰(zhàn)研究

2nd

生產(chǎn)III期臨床樣品前進(jìn)行病毒挑戰(zhàn)研究病毒滅活研究Seite30Customer病毒去除1/22/2025內(nèi)容概要VirusFiltrationVirusInactivation

病毒吸附

RegulatoryAspects

Seite31Customer病毒去除1/22/2025膜層析技術(shù):基本原理膜層析產(chǎn)品與顆粒膠電鏡照片對比Seite32Customer病毒去除1/22/2025孔徑–顆粒膠與層析膜對比-顆粒膠顆粒膠粒徑分布為：15-160μm孔徑分布為：15-40nm層析膜高開孔結(jié)構(gòu)孔徑：250-3000nmSeite33Customer病毒去除1/22/2025膜層析技術(shù):基本原理“不是過濾膜”開放孔結(jié)構(gòu)>3μm低壓力降單純的對流傳質(zhì)擴(kuò)散效應(yīng)最小化應(yīng)用于去除：宿主細(xì)胞蛋白，DNA，內(nèi)毒素和病毒膜層析產(chǎn)品與顆粒膠電鏡照片對比Seite34Customer病毒去除1/22/2025病毒去除至少3-4log，并且蛋白收率>95%相關(guān)的特定和非特定的標(biāo)準(zhǔn)病毒去除特性物質(zhì)平衡和獨立的吸附機制具有可放大性膜層析系統(tǒng)應(yīng)驗證考察的方面Seite35Customer病毒去除1/22/2025層析膜形成層析床單張層析膜厚度0.275mm最多60層疊加形成16mm厚柱床36cm2

膜面積=1ml床體積=30mg載量Seite36Customer病毒去除1/22/2025膜床體積： 1μl到2.1ml

載量：30μg到60mg

拋棄型技術(shù)

捕獲，精致和病毒去除

膜層析–拋棄型實驗室規(guī)模產(chǎn)品-Seite37Customer病毒去除1/22/2025膜層析–生產(chǎn)規(guī)模拋棄型產(chǎn)品-

膜床體積： 7ml到530ml

載量：0.2到16g拋棄型技術(shù)捕獲，精致和病毒去除

Seite38Customer病毒去除1/22/2025膜層析–可重復(fù)使用產(chǎn)品-

膜床體積： 35ml到2.130ml

載量：1到64g

反復(fù)使用技術(shù)

捕獲和精制Seite39Customer病毒去除1/22/2025膜層析去除病毒病毒粒徑(nm)包膜SartobindQ去除因子(log10)

Run1SartobindQ去除因子(log10)Run2SV-40:SimianVirus-4045no1.25

0.461.34

0.43Reo-3:ReovirusTypeIII75-80no4.07

0.503.62

0.42MuLV:MurineLeukemiaVirus80-110yes3.80

0.394.40

0.56PRV:Pseudorabiesvirus150-250yes3.97

0.443.88

0.38Galliher,P.,Fowler,E.,MillenniumPharmaceuticalsInc.),“ValidationofImpurityRemovalbythe

CMAPATH-1HBiomanufacturingProcess”IBC’sBiopharmaceuticalProductionWeek,ParadisePointResort–SanDiego,CA,November12-15,2001Seite40Customer病毒去除1/22/2025膜層析去除病毒病毒粒徑(nm)包膜SartobindQ去除因子(log10)

Run1SartobindQ去除因子(log10)Run2MMV:MinuteMouseVirus16-25no6.67

0.244.41

0.37Reo-3:ReovirusTypeIII75-80no7.28

0.307.53

0.29MuLV:MurineLeukemiaVirus80-110yes5.57

0.256.29

0.32PRV:Pseudorabiesvirus