《益生菌活菌計(jì)數(shù)及代謝活力檢測 拉曼光譜法》編制說明

《益生菌活菌計(jì)數(shù)及活性檢測拉曼光譜

法》

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)編制說明

標(biāo)準(zhǔn)起草小組

2023年5月20日

《益生菌活菌計(jì)數(shù)及活性檢測拉曼光譜法》

標(biāo)準(zhǔn)編制說明

一、制定標(biāo)準(zhǔn)的背景介紹

2001年聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織和世界衛(wèi)生組織（FAO/WHO）提出，當(dāng)攝入足夠

數(shù)量時，對宿主產(chǎn)生健康益處的活性微生物稱之為益生菌[1]。國際益生菌和益生元科

學(xué)協(xié)會（ISAPP）2021年對發(fā)酵食品定義為：通過所需的微生物生長和食品成分的酶

轉(zhuǎn)化而制成的食品。其中特別指出，當(dāng)發(fā)酵食品中含有確切的活益生菌時，才能標(biāo)注

“含有益生菌”，并認(rèn)為改善食品營養(yǎng)、調(diào)節(jié)人體免疫和腸道菌群、含有影響腸道和機(jī)

體功能的生物活性物質(zhì)等，是其促進(jìn)健康的潛在機(jī)制[2]。近年來，隨著益生菌概念的

流行，益生菌的產(chǎn)品線已經(jīng)從飲食補(bǔ)充劑擴(kuò)展到臨床治療[3-6]。對于益生菌，不同菌

株的活細(xì)胞數(shù)是否符合標(biāo)準(zhǔn)是公眾主要關(guān)心的問題。但是，由于國內(nèi)益生菌行業(yè)長期

缺乏產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范，導(dǎo)致益生菌產(chǎn)品質(zhì)量良莠不齊，許多商品的說明書上并未標(biāo)注關(guān)

于所含益生菌菌株的功效和產(chǎn)品中實(shí)際存在的活細(xì)胞數(shù)量(菌落形成單位[CFU/毫升])[7,

8]。因此，為規(guī)范愈發(fā)龐大的益生菌市場，避免益生菌產(chǎn)品市場規(guī)模不斷擴(kuò)大而出現(xiàn)

的虛假夸大宣傳等亂象，對商業(yè)益生菌產(chǎn)品進(jìn)行包括快速活菌計(jì)數(shù)、原位活力測試在

內(nèi)的定性和定量評價的檢測方法迫在眉睫。

然而，目前行業(yè)中廣泛應(yīng)用的方法有很大的局限性。對于益生菌產(chǎn)品的活菌計(jì)

數(shù)、活性檢測等質(zhì)檢工作存在檢測周期長、成本昂貴、混合益生菌產(chǎn)品檢測效果差等

問題[9,10]。為提高益生菌產(chǎn)品的質(zhì)量檢測能力，本標(biāo)準(zhǔn)提出了拉曼光譜檢測方法，

對益生菌產(chǎn)品的活細(xì)胞數(shù)和原位活力進(jìn)行測定。該方法能夠準(zhǔn)確測定益生菌產(chǎn)品中的

活菌數(shù)和活性指標(biāo)。該方法的建立為今后豐富我國益生菌產(chǎn)品的質(zhì)控工作打下了一個

良好的基礎(chǔ)，并為制定中國自己的益生菌標(biāo)簽法律法規(guī)以及檢測方法提供可靠的數(shù)據(jù)

保障。

二、標(biāo)準(zhǔn)制定原則和依據(jù)

我國目前對益生菌活菌計(jì)數(shù)及活性檢測方法研究還處于初級階段，有很大的局限

性，有關(guān)測定方法的文獻(xiàn)報道比較少，主要是色譜法和微生物法。

參考文獻(xiàn)Mondol等人研究表明可以基于拉曼檢測細(xì)胞活力，成功預(yù)測混合樣品

1

中活菌占比，采用拉曼光譜法，經(jīng)過大量的實(shí)驗(yàn)，建立了《益生菌活菌計(jì)數(shù)及活性檢

測拉曼光譜法》[11]。

本標(biāo)準(zhǔn)的建立不僅彌補(bǔ)了我國益生菌行業(yè)質(zhì)控方法的空白，同時對益生菌活菌計(jì)

數(shù)及活性檢測的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法進(jìn)行了補(bǔ)充，很好的解決了益生菌行業(yè)長期缺乏產(chǎn)品標(biāo)

準(zhǔn)規(guī)范，導(dǎo)致益生菌產(chǎn)品質(zhì)量良莠不齊的問題。

三、起草過程

1.2021年10月，青島生物能源與過程研究所單細(xì)胞中心承擔(dān)的國家重大科學(xué)儀器研

制、國家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃等項(xiàng)目中，計(jì)劃基于單細(xì)胞拉曼技術(shù)建立益生菌產(chǎn)品質(zhì)檢方

法。

2.2022年3月對方法標(biāo)準(zhǔn)申請立項(xiàng)，同月成立標(biāo)準(zhǔn)起草工作組，主要由青島生物能源

與過程研究所單細(xì)胞中心、中國計(jì)量科學(xué)研究院、中國食品發(fā)酵工業(yè)研究院、青島東

海藥業(yè)和青島星賽生物組成。

3.2022年6月標(biāo)準(zhǔn)起草工作小組召開第一次工作組會議并共同制定工作計(jì)劃，包括分

工、調(diào)研相關(guān)資料、安排試驗(yàn)內(nèi)容，確定了起草原則、標(biāo)準(zhǔn)適用范圍、試驗(yàn)方案以及

驗(yàn)證方法準(zhǔn)確性等標(biāo)準(zhǔn)所要求的試驗(yàn)內(nèi)容。標(biāo)準(zhǔn)主要是益生菌活菌數(shù)和原位活力測定

方法研究，以益生菌固體飲料等常見保健食品為主要目標(biāo)。

4.2023年6月，成立“益生菌單細(xì)胞技術(shù)聯(lián)盟（A-STEP）”，由青島能源所、中國食品

發(fā)酵工業(yè)研究院、熱心腸研究院、星賽生物等聯(lián)合發(fā)起，聯(lián)盟成員單位有中國計(jì)量學(xué)

會生物計(jì)量專委會、江南大學(xué)、內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)、伊利集團(tuán)、蒙牛集團(tuán)、中糧營養(yǎng)健

康研究院有限公司、東海藥業(yè)、青島啤酒、國際香精香料公司IFF、諾維信

OneHealth、帝斯曼康萃樂、科拓生物、錦旗生物、恒天然、華大基因等。

5.2023年10月，工作小組計(jì)劃組織標(biāo)準(zhǔn)全國范圍內(nèi)的征求意見?？傆?jì)向包括省、自

治區(qū)、直轄市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局，科研院所，益生菌產(chǎn)業(yè)領(lǐng)軍企業(yè)的等20家以上單位征

詢意見。

四、標(biāo)準(zhǔn)主要條款的說明

1.本標(biāo)準(zhǔn)分為6個部分：范圍、規(guī)范性引用文件、術(shù)語和定義、試劑或材料、儀器設(shè)

備、檢驗(yàn)要求和方法。

2

2.針對我國益生菌產(chǎn)品中添加各菌種的活菌數(shù)量情況，本文件適用于添加以下一種或

多種菌種的益生菌產(chǎn)品活菌計(jì)數(shù)及代謝活力檢測，包括植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、鼠

李糖乳桿菌、副干酪乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、格氏乳桿菌、卷曲乳桿菌、乳雙歧桿菌

和長雙歧桿菌。

五、工作內(nèi)容及主要試驗(yàn)

本方法分樣品預(yù)處理、樣品重水（D2O）孵育、自動化采集單細(xì)胞拉曼圖譜三大

步驟。進(jìn)行了方法的準(zhǔn)確度、方法的應(yīng)用實(shí)例和方法的適用性等實(shí)驗(yàn)。

1.樣品預(yù)處理

分別用單一菌株益生菌產(chǎn)品MPP-A作為測試樣品。依據(jù)GB4789.35-2016益生菌

產(chǎn)品樣品制備流程，在無菌環(huán)境下稱取益生菌產(chǎn)品，溶于0.85%的生理鹽水中，充分

振蕩使其徹底溶解，制成1：10倍樣品稀釋液。將制備的懸浮液進(jìn)行適當(dāng)稀釋以備待

用。孵育液制備流程為：按照產(chǎn)品說明書稱取適量的MRS（ManRogosaSharpe）培養(yǎng)

基粉末，并取適量的D2O加入培養(yǎng)基中進(jìn)行溶解，待溶解完全后，用0.22um的針頭

過濾器過濾除菌，避光保存待用。

2.樣品D2O孵育條件的確定

為使樣品中的活細(xì)胞與D2O結(jié)合完全，對不同濃度的D2O和不同孵育時間條件進(jìn)

行實(shí)驗(yàn)，當(dāng)利用D2O同位素標(biāo)記時，并考察孵育前后的細(xì)胞數(shù)，驗(yàn)證D2O孵育過程可

以標(biāo)記樣品中所有的活細(xì)胞且不會影響計(jì)數(shù)結(jié)果。

2.1D2O濃度的確定

用0%，25%，50%，75%和100%D2OMRS孵育液重懸菌體，厭氧孵育0，1，

2，2.5，3，3.5和4h。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明100%D2OMRS孵育3小時后，具有代謝活性細(xì)

胞與D2O的結(jié)合比例不再顯著增加。此外，D2O濃度等于或小于75%時，需要更長的

孵育時間（4小時）才能達(dá)到飽和，而且低濃度D2O導(dǎo)致孵育時間延長，既降低了檢

測效率，又會導(dǎo)致細(xì)胞有繁殖從而影響計(jì)數(shù)結(jié)果（表1）。

表1不同濃度D2O中不同孵育時間活菌標(biāo)記率

/平均值

75%D2

時間0%D2O25%D2O50%D2O100%D2O

O

0h00000

1h00.11150.16570.2170.2289

2h00.26130.44870.58670.7776

3

2.5h00.34730.71730.81230.8745

3h00.39030.7450.88730.9388

3.5h00.39370.73530.8960.9536

4h00.45570.90370.93170.961

2.2孵育時間的確定

將結(jié)果較為接近的75%D2O和100%D2O孵育3小時，分別進(jìn)行平板計(jì)數(shù)，由經(jīng)

過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析可以看出75%的D2O孵育0小時和3小時后平板計(jì)數(shù)，二者之間P值小

于0.05，即存在顯著差異，所以75%D2O孵育3小時會影響計(jì)數(shù)結(jié)果。當(dāng)D2O濃度為

100%，D2O孵育0小時和3小時后平板計(jì)數(shù)，二者之間P值大于0.05，即不存在顯著

差異，后續(xù)實(shí)驗(yàn)均采用100%D2O孵育3h的條件。

表275%D2O和100%D2O孵育3小時的平板計(jì)數(shù)結(jié)果

濃度(CFU/g)P值

0h3h

1010

75%D2O1.27±0.10×102.81±0.09×10p<0.05

1010

100%D2O1.26±0.03×101.31±0.05×10p>0.05

3.基于單細(xì)胞拉曼技術(shù)對益生菌產(chǎn)品快速計(jì)數(shù)和原位活力檢測

取3-10ul待測樣品和背景樣品分別加入到微流控芯片進(jìn)樣口，真空進(jìn)樣2min。然

后取100ulddH2O滴加到進(jìn)樣口，利用水的擴(kuò)散除去培養(yǎng)基和細(xì)胞表面的D2O，得到

的樣品進(jìn)行拉曼檢測；通過顯微拉曼光譜儀自動化采集背景樣品多個視野中的所有單

細(xì)胞（100-200個細(xì)胞），并采集背景拉曼光譜扣除背景信號干擾，獲得的CDR（C-D

ratios）值用于拉曼光譜重水峰的歸零，即為CDR_背景。通過顯微拉曼光譜儀自動化采

集待測樣品多個視野中的所有單細(xì)胞（100-200個細(xì)胞），并采集背景拉曼光譜扣除背

景信號干擾，自動化獲得總菌數(shù)、活菌數(shù)、活菌率等指標(biāo)。

設(shè)定MAL值作為評價益生菌產(chǎn)品的原位活力的指標(biāo)，MAL=CDR_樣品-CDR_背景，

MAL值越高，則活力越高。如果細(xì)胞的MAL≤0，被認(rèn)為是死細(xì)胞;如果細(xì)胞的

MAL>0,則被認(rèn)為是活細(xì)胞。

在三個平行樣品的15個視野分別收集了129、70、73、63、78、54、49、70、

82、61、58、102、96、93和52個SCRS（Single-cellRamanspectrum）值。而

MAL>0的細(xì)胞分別有87、47、34、40、49、41、30、49、61、50、43、77、66、61

和33個（MAL>0被判為活菌）。另外，通過MAL計(jì)算，MPP-A的MAL平均值為

4

0.0266±0.0019。因此，基于單細(xì)胞拉曼技術(shù)，可檢測出益生菌產(chǎn)品的“活菌率”

（67.84%）和“原位活力”（各細(xì)胞MAL值和MAL平均值），該“原位活力”可以通過

MAL值量化每個單細(xì)胞的代謝活力和產(chǎn)品整體活力。

圖1自動化計(jì)數(shù)益生菌產(chǎn)品的顯微鏡視圖

4.方法的準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)：

分別用單一菌株益生菌產(chǎn)品MPP-A和復(fù)合型益生菌產(chǎn)品CPP-A進(jìn)行準(zhǔn)確度實(shí)

驗(yàn)。

4.1細(xì)胞總數(shù)準(zhǔn)確度驗(yàn)證

4.1.1MPP-A細(xì)胞總數(shù)

細(xì)胞總數(shù)準(zhǔn)確度采用傳統(tǒng)方法neubauer血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行驗(yàn)證，分別對計(jì)數(shù)室的

左上，右上，左下，右下和中間方格的細(xì)胞數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，傳統(tǒng)方法細(xì)胞總數(shù)的結(jié)果

為1.84±0.17×1010CFU/g，基于單細(xì)胞拉曼技術(shù)計(jì)算出的細(xì)胞總數(shù)為1.99±0.28×1010

CFU/g，與血球計(jì)數(shù)板結(jié)果接近（p>0.05）。結(jié)果見表3。

4.1.2CPP-A細(xì)胞總數(shù)

細(xì)胞總數(shù)準(zhǔn)確度采用傳統(tǒng)方法neubauer血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行驗(yàn)證，分別對計(jì)數(shù)室的

左上，右上，左下，右下和中間方格的細(xì)胞數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，傳統(tǒng)方法細(xì)胞總數(shù)的結(jié)果

為4.13±0.03×1011CFU/g，基于單細(xì)胞拉曼技術(shù)計(jì)算出的細(xì)胞總數(shù)為

5

4.09±0.07×1011CFU/g，與血球計(jì)數(shù)板結(jié)果接近（p>0.05）。結(jié)果見表3。

4.2活細(xì)胞數(shù)準(zhǔn)確度驗(yàn)證

4.2.1MPP-A活細(xì)胞數(shù)

活細(xì)胞數(shù)準(zhǔn)確度采用GB4789.35-2016中6.2.3乳酸菌計(jì)數(shù)中要求的平板計(jì)數(shù)法

進(jìn)行驗(yàn)證，記錄平板上的菌落數(shù)，乘以稀釋因子，獲得樣品中的活細(xì)胞數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表明平板計(jì)數(shù)法的活菌數(shù)結(jié)果為1.25±0.45×1010CFU/g，基于單細(xì)胞拉曼技術(shù)計(jì)算出

的活細(xì)胞的數(shù)量為1.35±0.13×1010CFU/g，與平板計(jì)數(shù)法結(jié)果接近（p>0.05）。結(jié)果

見表3。

4.2.2CPP-A活細(xì)胞數(shù)

活細(xì)胞數(shù)準(zhǔn)確度采用GB4789.35-2016中6.2.3乳酸菌計(jì)數(shù)中要求的平板計(jì)數(shù)法

進(jìn)行驗(yàn)證，記錄平板上的菌落數(shù)，乘以稀釋因子，獲得樣品中的活細(xì)胞數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表明平板計(jì)數(shù)法的活菌數(shù)結(jié)果為3.84±0.02×1011CFU/g，基于單細(xì)胞拉曼技術(shù)計(jì)算出的

活細(xì)胞的數(shù)量為3.72±0.35×1011CFU/g，與平板計(jì)數(shù)法結(jié)果接近（p>0.05）。結(jié)果見表

3。

表3傳統(tǒng)方法和基于單細(xì)胞拉曼技術(shù)細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果

傳統(tǒng)方法（CFU/g）拉曼方法（CFU/g）p值

細(xì)胞總數(shù)1.84±0.17×10101.99±0.28×1010p>0.05

MPP-A

活細(xì)胞數(shù)1.25±0.45×10101.35±0.13×1010p>0.05

細(xì)胞總數(shù)4.13±0.03×10114.09±0.07×1011p>0.05

CPP-A

活細(xì)胞數(shù)3.84±0.02×10113.72±0.35×1011p>0.05

5.單細(xì)胞拉曼技術(shù)原位活力指標(biāo)應(yīng)用實(shí)例

產(chǎn)品X和產(chǎn)品Y是同一種嬰兒雙歧桿菌菌株，分別采用沒有微膠囊化包被和微膠

囊化包被生產(chǎn)工藝進(jìn)行加工。使用傳統(tǒng)方法平板計(jì)數(shù)法分別計(jì)算產(chǎn)品X和產(chǎn)品Y的活

細(xì)胞數(shù)，工藝1為3.40±0.36×109CFU/g，工藝2為2.51±0.06×109CFU/g。為了測試產(chǎn)

品的穩(wěn)定性，將不同工藝生產(chǎn)的嬰兒雙歧桿菌產(chǎn)品進(jìn)行加速實(shí)驗(yàn)（37℃下儲存10

天），然后再次基于傳統(tǒng)方法計(jì)算出活細(xì)胞數(shù)，工藝1為3.57±0.25×107CFU/g，工藝

2為2.08±0.14×109CFU/g；根據(jù)加速實(shí)驗(yàn)前后的活細(xì)胞數(shù)計(jì)算產(chǎn)品X和產(chǎn)品Y的存活

率，分別為1.05%和82.76%（表3）。根據(jù)傳統(tǒng)方法10天的加速實(shí)驗(yàn)表明，產(chǎn)品Y的

存活率要高于產(chǎn)品X。

6

表3平板計(jì)數(shù)法計(jì)算工藝1或工藝2生產(chǎn)益生菌產(chǎn)品的活細(xì)胞數(shù)

工藝加速前（CFU/g）加速后（CFU/g）存活率

產(chǎn)品X3.40±0.36×1093.57±0.25×1071.05%

產(chǎn)品Y2.51±0.06×1092.08±0.14×10982.76%

使用單細(xì)胞拉曼技術(shù)對益生菌產(chǎn)品X和產(chǎn)品Y進(jìn)行原位活力檢測。采集兩種工藝

生產(chǎn)的益生菌產(chǎn)品的拉曼光譜后，得出產(chǎn)品X和產(chǎn)品Y的平均MAL值分別為0.0056

（MAL工藝1=0.0140-0.0084）和0.0172（MAL工藝2=0.0247-0.0075）（圖2）。根據(jù)單

細(xì)胞拉曼技術(shù)原位活力結(jié)果表明，產(chǎn)品Y的原位活力高于產(chǎn)品X，與傳統(tǒng)方法加速實(shí)

驗(yàn)結(jié)果一致，以上全部實(shí)驗(yàn)過程在5小時內(nèi)完成，充分體現(xiàn)了該方法具有不依賴于培

養(yǎng)，活力檢測迅速等優(yōu)勢。

圖2基于單細(xì)胞拉曼技術(shù)產(chǎn)品X和產(chǎn)品Y原位活力檢測

6.方法的適用性實(shí)驗(yàn)

以含益生菌的不同類型的產(chǎn)品為例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，其中飲樂多為液體飲料，蒙牛酸奶

為半固體飲料，Lifespace膠囊益生菌產(chǎn)品為藥品，寵兒香為畜牧業(yè)產(chǎn)品?；罴?xì)胞數(shù)準(zhǔn)

確度采用GB4789.35-2016中6.2.3乳酸菌計(jì)數(shù)中要求的平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行驗(yàn)證，記錄

平板上的菌落數(shù)，乘以稀釋因子，獲得樣品中的活細(xì)胞數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明飲樂多平板

計(jì)數(shù)法的活菌數(shù)結(jié)果為7.50±0.15×108CFU/mL，基于單細(xì)胞拉曼技術(shù)計(jì)算出的活細(xì)胞

7

的數(shù)量為6.42±1.40×108CFU/mL，與平板計(jì)數(shù)法結(jié)果接近（p>0.05）；蒙牛酸奶平板

計(jì)數(shù)法的活菌數(shù)結(jié)果為4.87±0.69×108CFU/mL，基于單細(xì)胞拉曼技術(shù)計(jì)算出的活細(xì)胞

的數(shù)量為4.46±0.48×108CFU/mL，與平板計(jì)數(shù)法結(jié)果接近（p>0.05）。Lifespace膠

囊益生菌產(chǎn)品平板計(jì)數(shù)法的活菌數(shù)結(jié)果為1.83±1.24×108CFU/g，基于單細(xì)胞拉曼技術(shù)

計(jì)算出的活細(xì)胞的數(shù)量為2.04±1.01×108CFU/g，與平板計(jì)數(shù)法結(jié)果接近（p>0.05）；

寵兒香益生菌產(chǎn)品平板計(jì)數(shù)法的活菌數(shù)結(jié)果為5.90±1.53×108CFU/g，基于單細(xì)胞拉曼

技術(shù)計(jì)算出的活細(xì)胞的數(shù)量為5.75±1.01×108CFU/g，與平板計(jì)數(shù)法結(jié)果接近

（p>0.05）。結(jié)果見表4。因此該方法適用于液體飲料、半固體飲料、藥品和畜牧業(yè)

益生菌產(chǎn)品的檢測。

表4傳統(tǒng)方法和基于單細(xì)胞拉曼技術(shù)活細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果

傳統(tǒng)方法拉曼方法

p值

（CFU/g或CFU/mL）（CFU/g或CFU/mL）

飲樂多7.50±0.15×1086.42±1.40×108p>0.05

蒙牛酸奶4.87±0.69×1084.46±0.48×108p>0.05

Lifespace藥丸1.83±1.24×1082.04±1.01×108p>0.05

寵兒香5.90±1.53×1085.75±1.01×108p>0.05

7.其他拉曼光譜儀器測試結(jié)果

以上所述檢測實(shí)驗(yàn)結(jié)果均由星賽生物出品的自動化顯微拉曼光譜儀檢測得出，為

測試不同儀器檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，用日本HORIBA顯微拉曼光譜儀（型號HR800）對

君小寶益生菌粉進(jìn)行了測試。君小寶益生菌粉平板計(jì)數(shù)法的活菌數(shù)結(jié)果為

6.25±0.35×108CFU/g，基于單細(xì)胞拉曼技術(shù)計(jì)算出的活細(xì)胞的數(shù)量為6.79±0.77×108

CFU/g，與平板計(jì)數(shù)法結(jié)果接近（p>0.05）。因此該方法適用于其他滿足性能要求的

顯微拉曼光譜儀器進(jìn)行檢測。

六、實(shí)施標(biāo)準(zhǔn)建議說明

標(biāo)準(zhǔn)起草小組在本標(biāo)準(zhǔn)的制定過程中做了大量的工作，在標(biāo)準(zhǔn)的建立伊始就本著

邊制定邊應(yīng)用的原則，自2015年建立本標(biāo)準(zhǔn)起中科院青能所單細(xì)胞中心已經(jīng)與多家益

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生菌企業(yè)建立合作關(guān)系，提供顯微拉曼光譜儀和檢測方法進(jìn)行驗(yàn)證，并得到了客戶的

廣泛認(rèn)同。通過客戶的反饋，進(jìn)一步印證了方法的可行性。

七、采用國際標(biāo)準(zhǔn)、國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的程度及水平的簡要說明

本標(biāo)準(zhǔn)參考國家標(biāo)準(zhǔn)GB4789.34、GB4789.35給出的規(guī)則起草。

本標(biāo)準(zhǔn)起草參考國際標(biāo)準(zhǔn)聯(lián)合國糧農(nóng)組織/世界衛(wèi)生組織（FAO/WHO）《食品中

益生菌的評價指南》（GuidelinesfortheevaluationofProbioticsinFood：2002）、加拿

大《益生菌在食品中的使用》（TheUseofProbioticMicroorganismsinFood：2009）、

世界胃腸病學(xué)組織（WGO）《益生菌與益生元》的全球指南（Probioticsand

prebiotics：2023）。

八、與現(xiàn)行法律法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的協(xié)調(diào)性

本標(biāo)準(zhǔn)為推薦性標(biāo)準(zhǔn)，與國家標(biāo)準(zhǔn)GB4789.34、GB4789.35相協(xié)調(diào)，不與現(xiàn)行法

律、法規(guī)和其他相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)沖突。本標(biāo)準(zhǔn)適應(yīng)了GB4789.34、GB4789.35含益生菌產(chǎn)品

的活菌總數(shù)的要求，但現(xiàn)行的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)缺乏對益生菌代謝活力指標(biāo)的評價方法。因

此，本標(biāo)準(zhǔn)可為評價益生菌代謝活力提供強(qiáng)有力的方法支撐。

九、標(biāo)準(zhǔn)涉及的知識產(chǎn)權(quán)說明

本標(biāo)準(zhǔn)涉及專利為：一種基于單細(xì)胞拉曼技術(shù)的一體化益生菌質(zhì)檢方法（申請

號：202211426753.X），專利權(quán)人為：中國科學(xué)院青島生物能源與過程研究所，專利

申請人為：中國科學(xué)院青島生物能源與過程研究所，目前專利狀態(tài)為：專利受理。專

利權(quán)人將作出專利實(shí)施許可聲明，同意在公平、合理、無歧視基礎(chǔ)上，免費(fèi)許可任何

組織或者個人在實(shí)施該國家標(biāo)準(zhǔn)時實(shí)施其專利。

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十、參考文獻(xiàn)

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